本文關(guān)鍵詞： 肝細胞癌 趨化因子 調(diào)節(jié)性T細胞 免疫逃逸　出處：《鄭州大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的肝細胞肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是全球范圍內(nèi)第五大常見的惡性腫瘤,是腫瘤相關(guān)性死亡的第三大病因。病因復(fù)雜,其中感染或自身免疫性疾病等因素導(dǎo)致的慢性炎癥持續(xù)存在,在腫瘤的產(chǎn)生、發(fā)展和預(yù)后中發(fā)揮重要作用,并影響機體的免疫監(jiān)控和對治療的應(yīng)答;人體的大多數(shù)腫瘤都依賴免疫細胞并可以通過免疫細胞獲益,從而調(diào)整免疫細胞使之處于免疫耐受或免疫缺陷狀態(tài),使得腫瘤細胞能夠逃避機體的免疫監(jiān)控,從而導(dǎo)致疾病進展。因而,探討HCC免疫逃逸的發(fā)生機制將會為腫瘤發(fā)生、發(fā)展以及治療提供重要的理論基礎(chǔ)和治療新思路。在HCC腫瘤微環(huán)境中,發(fā)現(xiàn)多種免疫抑制通路被激活,其中免疫細胞及相關(guān)的細胞因子起到了關(guān)鍵作用。調(diào)節(jié)性T細胞(regulatory T cells,Treg)是一類具有獨特免疫調(diào)節(jié)功能的T淋巴細胞亞群,既往研究顯示Treg細胞在多種惡性腫瘤癌組織中比例增加,并且在HCC患者瘤內(nèi)的高表達常與疾病的進展及預(yù)后不佳有關(guān)。但目前在腫瘤微環(huán)境中Treg為什么以及如何被趨化,其機制目前仍不完全清楚,需要進一步探究。HCC腫瘤微環(huán)境表達多種細胞因子,其中趨化因子CC家族中的CCL22及表達在Treg細胞上的高親和力受體CCR4在Treg的遷移運動中起到重要作用,我們設(shè)想在HCC微環(huán)境內(nèi)通過CCL22與其受體CCR4的結(jié)合趨化Treg細胞的遷移運動,從而引起腫瘤在肝癌局部免疫逃逸導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。本實驗通過檢測肝癌組織、癌旁組織標本中CCL22的表達,以及CCL22的高親和力受體CCR4在腫瘤浸潤性淋巴細胞(tumor infiltrating lymphocytes,TIL)、外周血單個核細胞(perpheral blood mononuclear cell,PBMC)中Treg細胞表面CCR4受體的表達,研究CCL22/CCR4信號通路招募Treg細胞并在腫瘤部位發(fā)生免疫逃逸的作用機制。方法首先使用生物信息學(xué),在CBioportal數(shù)據(jù)庫下載HCC患者癌組織內(nèi)目標基因CCL22/CCR4/CD4芯片信息,分析之間相關(guān)性,以及趨化因子及其受體的表達在數(shù)據(jù)庫中的信息。收集鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院肝癌患者腫瘤組織,癌旁組織及外周血,所入組患者肝組織經(jīng)病理學(xué)資料證實均為原發(fā)性肝細胞癌。提取肝癌及癌旁組織內(nèi)的RNA,反轉(zhuǎn)錄為c DNA,采用real-time PCR技術(shù)檢測趨化因子配體CCL22在肝癌組織和癌旁組織的表達,以及CD4+T細胞表面標志胞內(nèi)因子Foxp3及功能因子IL-10在基因水平的表達。應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測HCC患者癌組織CCL22表達與臨床參數(shù)的關(guān)系。應(yīng)用密度梯度方法,提取外周血PBMC和腫瘤TIL細胞,應(yīng)用流式細胞儀對T細胞亞群及趨化因子相應(yīng)高親和力受體進行檢測。結(jié)果1.分析數(shù)據(jù)庫芯片信息提示HCC患者癌組織內(nèi)CCR4基因與CCL22及CD4存在相關(guān)性(r=0.2 p0.0001,r=0.2 p0.0001)。2.RT-PCR結(jié)果顯示趨化因子CCL22在肝細胞癌組織中的表達高于癌旁組織(0.56±0.06 vs 0.31±0.04),差異有統(tǒng)計學(xué)意義。3.免疫組化檢測趨化因子CCL22在HCC TNM分期I-III的表達,結(jié)果顯示CCL22在TNM II表達較TNM I高(4.231±0.2571 VS 3.326±0.3671,P=0.04),差異有統(tǒng)計學(xué)意義;TNM III表達較TNM I高(5.100±0.4033 VS 3.326±0.3671,p=0.0048),差異有統(tǒng)計學(xué)意義;TNM III較TNM II無差異(5.100±0.4033 VS4.231±0.2571 p=0.0769)。通過Log-rank檢驗分析高表達CCL22的患者和低表達CCL22的患者相比中位生存期分別為44個月,53個月,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.01)。CCL22表達高低在年齡,性別,HBe Ag,ALT,AST,AFP中差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05),而在腫瘤TNM分期(p=0.005),腫瘤大小(p=0.002),腫瘤數(shù)目(p=0.038),癌細胞分化(p=0.031)中存在統(tǒng)計學(xué)差異。因此CCL22可能成為預(yù)測HCC進展,預(yù)后的潛在預(yù)測指標。4.相關(guān)性分析結(jié)果顯示,HCC患者的癌組織中,CCL22與Foxp3、CD4、IL10的表達均呈現(xiàn)不同程度的正相關(guān)(r=0.22,p0.0001;r=0.24,p0.0001;r=0.36,p0.0001)。5.流式結(jié)果顯示,總CD4+T細胞在TIL中的比例較PBMC中升高(35.52±2.064 VS 29.41±1.96,p=0.03),Treg細胞亞群TIL中的比例16.60±1.29較PBMC中升高9.58±1.18,p=0.0001,CCR4+Treg細胞TIL中的比例亦較PBMC中升高(40.82±2.251 vs 33.85±2.291,p=0.03),差異有統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)論1.肝癌患者肝臟組織內(nèi)高表達CCL22,通過CCL22與受體CCR4結(jié)合,招募CD4+Foxp3+T(Treg)細胞向腫瘤部位聚集,引起腫瘤發(fā)生局部免疫逃逸,進而導(dǎo)致腫瘤發(fā)生及疾病進展。2.CCL22-CCR4信號通路可能成為HCC患者疾病發(fā)生的重要影響因素,Treg細胞參與了HCC患者肝癌的發(fā)生,該免疫學(xué)發(fā)病機制可成為予以HCC肝癌免疫治療的新靶點。
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本文編號：1490882