發(fā)布時間：2018-02-01 22:43

  本文關鍵詞： 5-aza-CdR 乳腺癌 WIF1 E-cadherin β-catenin 增殖 遷移　出處：《南華大學》2015年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的:研究5-氮雜-2'-脫氧胞苷對乳腺癌MDA-MB-231細胞系增殖及遷移的影響,為探索乳腺癌新的治療靶點及化療藥物奠定基礎。方法:1.細胞培養(yǎng)及藥物處理:體外培養(yǎng)人乳腺癌細胞株MDA-MB-231,經傳代后,分別用含有不同濃度(1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L)5-氮雜2-脫氧胞苷(5-Aza-Cd R)的RPMI1640培養(yǎng)液進行培養(yǎng),并設不含該藥物的對照組;2.用噻唑藍MTT法測定不同濃度5-Aza-Cd R作用MDA-MB-231細胞株不同時間的OD值,檢測細胞增殖速度的變化;3.采用劃痕試驗檢測各組乳腺癌細胞株MDA-MB-231的遷移距離;4.采用逆轉錄PCR法(Reverse transcription-polymerase chain reaction)、Western Blot檢測10μmol/L 5-Aza-Cd R作用不同時間后E-cadherin、WIF1及β-catenin m RNA和蛋白的影響;5.采用SPSS18.0分析各處理組與對照組細胞抑制率、相關基因m RNA及蛋白表達水平的差異。結果:1.MTT結果顯示,5-Aza-Cd R對MDA-MB-231細胞生長有明顯抑制作用,并且存在劑量及濃度依賴性反應關系;2.細胞遷移顯示:劃痕24小時后,5μmol/L、10μmol/L藥物處理組MDA-MB-231細胞愈合率分別為(30.0%±2.0%)、(24.6%±2.4%),較對照組(45.0%±1.3%)低,48小時后,5μmol/L、10μmol/L藥物處理組MDA-MB-231細胞愈合率分別為(37.3%±2.2%)、(25.7%±2.4%)均低于對照組(55.3%±2.2%),差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);3.PCR及Western Blot顯示,10μmol/L 5-Aza-Cd R使MDA-MB-231細胞中E-cadherin、WIF1基因表達上調;且呈時間依賴性逐漸升高,而β-catenin的表達隨作用時間延長逐漸下降。結論:5-Aza-Cd R能抑制MDA-MB-231細胞增殖,降低其遷移能力,其機制與上調WIF1和E-cadherin的表達并降低β-catenin表達有關。
[Abstract]:Objective: to study the effect of 5-aza-2-deoxycytidine on proliferation and migration of breast cancer MDA-MB-231 cell line. Methods: cell culture and drug treatment: human breast cancer cell line MDA-MB-231 was cultured in vitro. 10 渭 mol/L with different concentrations of 1 渭 mol 路L ~ (-1) O _ (5 渭 mol 路L ~ (-1)) were used. The RPMI1640 medium of 20 渭 mol / L 5-azacytidine 5-Aza-CD R was cultured, and the control group without the drug was set up. 2. The OD value of MDA-MB-231 cell line at different concentrations of 5-Aza-CD R was measured by thiazolyl blue MTT assay, and the change of cell proliferation rate was detected. 3.The migration distance of breast cancer cell line MDA-MB-231 was detected by scratch test. 4. Reverse transcription-polymerase chain reaction was used. E-cadherin was detected by Western Blot after 10 渭 mol/L 5-Aza-CD R treatment for different time. The effects of WIF1 and 尾 -catenin m RNA and protein; 5. SPSS18.0 was used to analyze the difference of cell inhibition rate, expression level of m RNA and protein between treatment group and control group. 5-Aza-CD R inhibited the growth of MDA-MB-231 cells in a dose-and concentration-dependent manner. 2. Cell migration showed that the healing rate of MDA-MB-231 cells in 5 渭 mol / L 10 渭 mol/L drug treated group was 30.0% 鹵2.0% after 24 hours of scratch. Compared with the control group (45.0% 鹵1.3%), 24. 6% 鹵2. 4%) and 5 渭 mol/L after 48 hours. The healing rate of MDA-MB-231 cells in 10 渭 mol/L drug treated group was 37. 3% 鹵2. 2% respectively. It was significantly lower than that of the control group (55.3% 鹵2.2%, P 0.05). 3. E-cadherin in MDA-MB-231 cells was induced by 10 渭 mol/L 5-Aza-CD R and Western Blot. The expression of WIF1 gene was up-regulated. The expression of 尾 -catenin decreased gradually with the prolongation of time. Conclusion the proliferation of MDA-MB-231 cells can be inhibited by 5-Aza-CD R. The mechanism is related to the up-regulation of WIF1 and E-cadherin expression and the decrease of 尾 -catenin expression.
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9

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本文編號：1483045