天堂国产午夜亚洲专区-少妇人妻综合久久蜜臀-国产成人户外露出视频在线-国产91传媒一区二区三区

當(dāng)前位置:主頁 > 醫(yī)學(xué)論文 > 腫瘤論文 >

Exosomal microRNA在前列腺癌臨床診斷中的作用

發(fā)布時間:2018-02-01 20:59

  本文關(guān)鍵詞: 前列腺癌 Exosomes microRNA 生物標(biāo)志物 出處:《第四軍醫(yī)大學(xué)》2016年博士論文 論文類型:學(xué)位論文


【摘要】:前列腺癌是男性泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤,但目前缺乏敏感性和特異性俱佳的生物標(biāo)志物,尋找一種理想的腫瘤生物標(biāo)志物是當(dāng)前前列腺癌臨床和基礎(chǔ)研究中備受關(guān)注的課題。Exosomes是細(xì)胞分泌到循環(huán)血液和體液中的一類包含特定蛋白質(zhì)、m RNA和micro RNA(mi RNA)等信號分子的小囊泡。最新研究表明,mi RNA能夠被主動選擇性地包裹進(jìn)Exosomes,并參與細(xì)胞間信息傳遞及通訊,其表達(dá)變化可以特異地反映機體某些生理病理狀態(tài)的動態(tài)變化和轉(zhuǎn)歸,在腫瘤發(fā)生發(fā)展中有望成為良好的腫瘤特異性分子標(biāo)志物,而且循環(huán)血液和體液中Exosomes的相關(guān)檢測具備無創(chuàng)、簡便等優(yōu)點。因此,體液中的Exosomal mi RNA分子標(biāo)志物在腫瘤臨床診斷和預(yù)后評估等方面具有良好的應(yīng)用前景。基于此,為了探討Exosomal mi RNA在前列腺癌臨床診斷中的作用,我們進(jìn)行了以下三部分研究:第一部分前列腺癌血清Exosomes的分離、鑒定及其生物學(xué)特性目的:建立穩(wěn)定的血清Exosomes分離方法并進(jìn)行形態(tài)學(xué)和分子表型鑒定,探討前列腺癌Exosomes的生物學(xué)特性。方法:采用Exo Quick沉淀試劑分離血清Exosomes,用透射電鏡和Nano Sight分析儀,以及Western blot和流式細(xì)胞術(shù)分別進(jìn)行形態(tài)學(xué)和分子表型鑒定。將來自前列腺癌患者混合血清的Exosomes與正常基質(zhì)細(xì)胞WPMY-1共培養(yǎng),用激光共聚焦顯微鏡觀察前列腺癌Exosomes在受體細(xì)胞中的轉(zhuǎn)運;分別采用CCK-8法、Transwell侵襲實驗和劃痕實驗檢測前列腺癌血清Exosomes對WPMY-1細(xì)胞增殖、侵襲和遷移能力的影響。結(jié)果:1、血清Exosomes的提取和鑒定:采用Exo Quick從人血清中分離到的沉淀物,顆粒直徑約為30~100nm,最大分布峰值為58nm,能夠表達(dá)特征性蛋白HSP70和CD63,符合Exosomes的主要特征。2、前列腺癌血清Exosomes的生物學(xué)特性:經(jīng)過24h共培養(yǎng),激光共聚焦顯微鏡觀察到前列腺癌血清Exosomes能夠穿過細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運到受體細(xì)胞中,且轉(zhuǎn)運量與Exosomes的初始濃度相關(guān);前列腺癌血清Exosomes可以使正常前列腺基質(zhì)細(xì)胞WPMY-1的增殖能力顯著提高,且與作用時間和Exosomes的作用濃度成正比;此外,前列腺癌Exosomes能夠促使正;|(zhì)細(xì)胞的侵襲能力和遷移能力顯著增強。結(jié)論:采用Exo Quick沉淀試劑從血清中可以穩(wěn)定分離出Exosomes,前列腺癌血清Exosomes能促使正常基質(zhì)細(xì)胞表現(xiàn)出顯著的增殖、侵襲和遷移能力,提示其可能與腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切,很有必要進(jìn)一步探討其在腫瘤臨床診療中的價值。第二部分Exosomal mi RNA檢測在前列腺癌診斷中的價值目的:研究Exosomes在前列腺癌循環(huán)mi RNA檢測中的價值。方法:采用Exo Quick沉淀試劑分離Exosomes,提取RNA,并用Agilent 2200生物分析儀進(jìn)行質(zhì)量分析。采用q RT-PCR法檢測mi RNA的相對表達(dá)量。結(jié)果:1、Exosomal RNA的分布及其特點:Agilent 2200生物分析儀檢測結(jié)果提示血清Exosomes中富含小RNA。10例健康人群血清Exosomes中均可檢出4種常見mi RNA(mi R-21,mi R-16,mi R-20a和let-7a),且其相對表達(dá)量顯著高于全血清樣本和去除Exosome后的上清液。2、Exosomes在前列腺癌血清循環(huán)mi RNA檢測中的價值:血清Exosomes中的mi R-141表達(dá)水平顯著高于血清游離mi R-141,且二者顯著相關(guān),PCa組的Exosomal mi R-141含量顯著高于BPH組和正常對照人群;q RT-PCR檢測51例PCa患者和40例正常對照人群的血清Exosomal mi R-141表達(dá)水平,結(jié)果表明PCa組的Exosomal mi R-141表達(dá)水平顯著高于正常對照組(P0.0001),且與腫瘤臨床病理特征有不同程度的相關(guān)性。采用Exosomal mi R-141判斷轉(zhuǎn)移性前列腺癌的ROC曲線下面積(AUC)為0.8694,檢測敏感性和特異性分別為80%和87.10%。3、前列腺癌患者尿液Exosomal mi RNA的初步檢測:在血清學(xué)研究的基礎(chǔ)上,我們對10例前列腺癌患者的尿液樣本進(jìn)行了探索性研究。結(jié)果顯示,所有患者尿液Exosomes樣本中均可不同程度地檢出mi R-141,但總體表達(dá)水平與對照組之間未見顯著性差異(P=0.0992)。結(jié)論:分離血清Exosomes有利于提高某些循環(huán)mi RNA的檢測敏感性,尿液Exosomes中也可以檢測到mi RNA,這就為前列腺癌Exosomal mi RNA標(biāo)志物的研究提供了新的思路和可能性。第三部分前列腺癌尿液Exosomal mi RNA差異表達(dá)譜的測序篩選目的:測序篩選前列腺癌患者尿液Exosomal mi RNA差異表達(dá)譜。方法:選取轉(zhuǎn)移性前列腺癌、局限性前列腺癌和健康男性各3例,留取晨尿。采用Exo Quick-TC沉淀試劑分離尿液Exosomes,提取RNA并采用Agilent 2200生物分析儀進(jìn)行質(zhì)檢,構(gòu)建c DNA文庫,采用Illumina Hi SeqTM 2500平臺進(jìn)行小RNA序列測定。將測序數(shù)據(jù)與mi RBase21.0數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對,計算各樣本的mi RNA表達(dá)量并進(jìn)行組間差異分析,篩選出前列腺癌的尿液Exosomal mi RNA差異表達(dá)譜。對存在顯著性差異的基因進(jìn)行q RT-PCR初步驗證。結(jié)果:經(jīng)過深度測序,尿液Exosomes中mi RNA的平均含量為(8.10±0.03)%,各樣本間未見顯著差異。通過組間比對,發(fā)現(xiàn)Exosomal mi R-375差異最為顯著,在正常對照、局限癌和轉(zhuǎn)移癌組中呈漸進(jìn)性低表達(dá),采用20例前列腺癌尿液樣本對其進(jìn)行q RT-PCR初步驗證,所得結(jié)果與測序一致。此外,另有22個mi RNA在前列腺癌中出現(xiàn)差異表達(dá),其中10個呈漸進(jìn)性低表達(dá)(mi R-664a-5p,mi R-200b-5p,mi R-30a-5p,mi R-30a-3p,mi R-200c-3p,mi R-151a-3p,mi R-532-5p,mi R-361-3p,mi R-30d-5p,mi R-148-3p),12個呈漸進(jìn)性高表達(dá)(mi R-126-5p,mi R-3656,mi R-199a-5p,mi R-4508,mi R-9-5p,mi R-1-3p,mi R-126-3p,mi R-199a-3p,mi R-4497,mi R-1273g-3p,mi R-4532,mi R-3960)。結(jié)論:通過深度測序,初步篩選出包括mi R-375在內(nèi)的23個差異表達(dá)基因,為進(jìn)一步驗證和研究前列腺癌尿液Exosomal mi RNA表達(dá)譜奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】:第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】:博士
【學(xué)位授予年份】:2016
【分類號】:R737.25

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 魯慧英;Detection of hepatitis C virus RNA sequences in cholangiocarcinomas in Chinese and American patients[J];Chinese Medical Journal;2000年12期

2 ;Detection the HCV RNA by PCR-microplate hybridization method from clinical specimens[J];中國輸血雜志;2001年S1期

3 付漢江,鄭曉飛;類mRNA RNA研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊);2002年04期

4 Verheyden B ,徐其武;口服脊髓灰質(zhì)炎疫苗核殼和RNA的穩(wěn)定性[J];國外醫(yī)學(xué).預(yù)防.診斷.治療用生物制品分冊;2002年01期

5 CMBE譯文組;探索小RNA的功能[J];現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)生物工程學(xué)雜志;2004年03期

6 沈維干;RNA interference and its current application in mammals[J];Chinese Medical Journal;2004年07期

7 ;Potent and specific inhibition of SARS-CoV antigen expression by RNA interference[J];Chinese Medical Journal;2005年09期

8 孫娣;汪洋;張麗娟;閆玉清;;一種簡捷提取植物總RNA的方法[J];黑龍江醫(yī)藥;2005年06期

9 熊慧華;于世英;胡廣原;莊亮;;Effects of Survivin Expression Suppressed by Short Hairpin RNA on MCF-7 Cells[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)英德文版);2006年03期

10 楊益超;;RNA干擾及其在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用[J];廣西醫(yī)學(xué);2007年10期

相關(guān)會議論文 前10條

1 金由辛;;面向21世紀(jì)的RNA研究[A];面向21世紀(jì)的科技進(jìn)步與社會經(jīng)濟(jì)發(fā)展(下冊)[C];1999年

2 ;第四屆RNA全國研討會大會報告日程安排[A];第四屆全國RNA進(jìn)展研討會論文集[C];2005年

3 ;Function of Transfer RNA Modifications in Plant Development[A];植物分子生物學(xué)與現(xiàn)代農(nóng)業(yè)——全國植物生物學(xué)研討會論文摘要集[C];2010年

4 王峰;張秋平;陳金湘;;棉花總RNA的快速提取方法[A];中國棉花學(xué)會2011年年會論文匯編[C];2011年

5 關(guān)力;陳本iY;iJ云虹;郭培芝;魏重琴;邱蘇吾;苗健;;關(guān)于動物}D~T中RNAn,定方法的研究[A];中國生理科學(xué)會學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編(生物化學(xué))[C];1964年

6 夏海濱;;小RNA在免疫學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用研究進(jìn)展[A];中國免疫學(xué)會第五屆全國代表大會暨學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2006年

7 ;The stability of hepatitis C virus RNA in various handling and storage conditions[A];中國輸血協(xié)會第四屆輸血大會論文集[C];2006年

8 郭德銀;;RNA干擾在病毒研究和控制中的應(yīng)用[A];2006中國微生物學(xué)會第九次全國會員代表大會暨學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2006年

9 甘儀梅;楊業(yè)華;王學(xué)奎;曹燕;楊特武;;棉花總RNA快速提取[A];中國棉花學(xué)會2007年年會論文匯編[C];2007年

10 ;Identification and characterization of novel interactive partner proteins for PCBP1 that is a RNA-binding protein[A];中國優(yōu)生優(yōu)育協(xié)會第四屆全國學(xué)術(shù)論文報告會暨基因科學(xué)高峰論壇論文專輯[C];2008年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 記者 馮衛(wèi)東;研究人員發(fā)現(xiàn)可破壞腫瘤抑制基因的小RNA[N];科技日報;2009年

2 記者 儲笑抒 通訊員 盛偉;人體微小RNA有望提前發(fā)出癌癥預(yù)警[N];南京日報;2011年

3 瀘州醫(yī)學(xué)院副教授、科普作家 周志遠(yuǎn);“大頭兒子”與環(huán)狀RNA[N];第一財經(jīng)日報;2014年

4 麥迪信;小分子RNA可能有大作用[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2003年

5 董映璧;美發(fā)現(xiàn)基因調(diào)控可回應(yīng)“RNA世界”[N];科技日報;2006年

6 張忠霞;特制RNA輕推一下,就能“喚醒”基因[N];新華每日電訊;2007年

7 聶翠蓉;RNA:縱是配角也精彩[N];科技日報;2009年

8 馮衛(wèi)東;RNA干擾機制首次在人體中獲得證實[N];科技日報;2010年

9 馮衛(wèi)東 王小龍;英在地球早期環(huán)境模擬條件下合成類RNA[N];科技日報;2009年

10 記者 常麗君;新技術(shù)讓研究進(jìn)入單細(xì)胞內(nèi)RNA的世界[N];科技日報;2011年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 王趙瑋;昆蟲RNA病毒復(fù)制及昆蟲抗病毒天然免疫機制研究[D];武漢大學(xué);2014年

2 包純;一類新非編碼RNA的發(fā)現(xiàn)以及產(chǎn)生和功能的初探[D];華中師范大學(xué);2015年

3 李語麗;基于MeRIP-seq的水稻RNA m6A甲基化修飾的研究[D];中國科學(xué)院北京基因組研究所;2015年

4 熊瑜琳;miR-122靶位基因STAT3調(diào)控長鏈非編碼 RNA Lethe促進(jìn)HCV復(fù)制的機制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

5 范春節(jié);高通量測序鑒定毛竹小RNA及其功能分析[D];中國林業(yè)科學(xué)研究院;2012年

6 王加強;小鼠著床前胚胎特異ERV相關(guān)長非編碼RNA的定向篩選及功能研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

7 王業(yè)偉;非編碼RNA SPIU的結(jié)構(gòu)和功能研究和p19INK4D在APL發(fā)病中的作用[D];上海交通大學(xué);2013年

8 鄒艷芬;子癇前期中非編碼RNA對滋養(yǎng)細(xì)胞功能的調(diào)控及機制探索[D];南京醫(yī)科大學(xué);2015年

9 朱喬;miR-10b在人肝細(xì)胞肝癌發(fā)生中的作用及其機制的初步探索[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

10 蔣俊鋒;長鏈非編碼RNA BACE1-AS促進(jìn)Aβ聚集及其調(diào)節(jié)BACE1和SERF1a的ceRNA機制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 全弘揚;長鏈非編碼RNA在細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)中的相關(guān)作用及機制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

2 胡亮;DDX19A識別PRRSV基因組RNA并激活NLRP3炎癥小體[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

3 雷文婕;小菜蛾不同發(fā)育時期RNA編輯位點的識別與驗證[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

4 周燕;RNA干擾對大鯢蛙病毒(CGSRV)主要功能基因表達(dá)與增殖影響的研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

5 石新新;改進(jìn)的RNA-Seq數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)錄組表達(dá)分析研究[D];南京航空航天大學(xué);2015年

6 陳金梅;利用植物表達(dá)藥用干擾小RNA的研究[D];南京大學(xué);2014年

7 郭維超;miR-17家族在腫瘤生長和遷移中的作用及機制[D];杭州師范大學(xué);2016年

8 沈曉彤;RNA“一步法”檢測的酶學(xué)基礎(chǔ)及凝血酶等溫擴增檢測方法的研究[D];青島科技大學(xué);2016年

9 孫文陽;豬miR-15b前體單堿基突變對其生物加工過程的影響[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

10 郅淑引;微小RNA25在肺癌血清中的表達(dá)量與臨床意義的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2016年

,

本文編號:1482863

資料下載
論文發(fā)表

本文鏈接:http://sikaile.net/yixuelunwen/zlx/1482863.html


Copyright(c)文論論文網(wǎng)All Rights Reserved | 網(wǎng)站地圖 |

版權(quán)申明:資料由用戶1a0f1***提供,本站僅收錄摘要或目錄,作者需要刪除請E-mail郵箱bigeng88@qq.com
免费在线成人激情视频| 国内自拍偷拍福利视频| 午夜精品国产一区在线观看| 中文字幕在线区中文色| 国产丝袜美女诱惑一区二区| 男女一进一出午夜视频| 欧美韩日在线观看一区| 亚洲天堂一区在线播放| 国产午夜精品久久福利| 中文字幕乱子论一区二区三区| 欧美二区视频在线观看| 日韩人妻精品免费一区二区三区 | 国产成人av在线免播放观看av | 麻豆91成人国产在线观看| 国内外免费在线激情视频| 欧美精品日韩精品一区| 国产又大又硬又粗又湿| 成人午夜激情免费在线| 国产免费人成视频尤物| 亚洲中文字幕在线乱码av| 内用黄老外示儒术出处| 日韩人妻毛片中文字幕| 最近中文字幕高清中文字幕无| 日韩精品综合免费视频| 日本不卡在线视频中文国产| 国产中文字幕久久黄色片| 亚洲精品中文字幕无限乱码| 男女午夜在线免费观看视频| 91久久精品在这里色伊人| 在线观看视频日韩精品 | 爱在午夜降临前在线观看| 日韩精品一级一区二区| 日韩精品一区二区不卡| 中文字幕一区二区熟女| 国产又大又黄又粗的黄色| 91一区国产中文字幕| 欧美一区二区三区性视频| 在线免费视频你懂的观看| 东京热电东京热一区二区三区 | 伊人久久青草地综合婷婷| 国产在线一区二区免费|