本文關(guān)鍵詞： RNA解螺旋酶DDX5 肝內(nèi)膽管癌 預(yù)后 上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化 惡性腫瘤　出處：《第二軍醫(yī)大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：第一章DDX5的表達(dá)調(diào)控對ICC生物學(xué)特性的影響及其可能機(jī)制目的:探討下調(diào)DDX5對肝內(nèi)膽管癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC)RBE細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲能力及其細(xì)胞周期的影響及其可能的分子機(jī)制。方法:DDX5-h RNA慢病毒轉(zhuǎn)染ICC細(xì)胞株RBE,利用Western Blot實(shí)驗(yàn)檢測慢病毒轉(zhuǎn)染后RBE細(xì)胞中DDX5蛋白表達(dá)水平的變化,通過流式細(xì)胞儀和Alamar Blue法檢測DDX5表達(dá)下調(diào)后對RBE細(xì)胞周期及增殖的影響。此外,采用劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測DDX5對RBE細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響,采用Western Blot實(shí)驗(yàn)檢測DDX5表達(dá)下調(diào)后EMT相關(guān)分子的表達(dá)變化。結(jié)果:Western Blot法檢測結(jié)果顯示,DDX5-sh RNA組中RBE細(xì)胞中DDX5蛋白的表達(dá)水平較空白對照組及陰性對照組顯著降低,提示DDX5-sh RNA轉(zhuǎn)染能有效抑制RBE細(xì)胞中DDX5蛋白的表達(dá)。Alamar Blue實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果顯示,DDX5-sh RNA組在48小時(shí)所檢測得到的細(xì)胞增值率均明顯低于空白對照組及陰性對照組(P值均0.05);劃痕愈合實(shí)驗(yàn)顯示,24小時(shí)后,DDX5-sh RNA組RBE細(xì)胞的遷移率明顯低于空白對照組和陰性對照組(P值均0.01);Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,DDX5-sh RNA組平均穿過膜的細(xì)胞數(shù)較空白對照組和陰性對照組明顯減少,差異具有顯著性(P值均0.01)。流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)顯示,DDX5-sh RNA1組和2組S期細(xì)胞所占百分比明顯高于空白對照組和陰性對照組,與之對應(yīng)的G0/G1、G2/M期比例相應(yīng)降低,細(xì)胞阻滯在S期(P值均0.05)。Western Blot法研究結(jié)果顯示,EMT分子vimentin、SNAIL及EGFR水平在DDX5-sh RNA細(xì)胞中的表達(dá)水平不同程度下降。結(jié)論:DDX5表達(dá)下調(diào)能抑制ICC RBE細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力,并阻滯細(xì)胞生長周期于S期;DDX5可以通過EMT機(jī)制影響ICC的生物學(xué)特性。第二章DDX5在ICC免疫病理學(xué)診斷和臨床預(yù)后評估中的意義目的:檢測ICC組織中DDX5的表達(dá)情況,驗(yàn)證DDX5在ICC的診斷及鑒別診斷中的價(jià)值,并探討DDX5的表達(dá)水平與ICC臨床病理參數(shù)及預(yù)后之間的相關(guān)性。方法:收集2000年7月至2006年3月間我院手術(shù)切除并病理診斷為ICC的病例323例。通過查閱電子和紙質(zhì)版病例檔案,收集患者的年齡、性別、腫瘤大小、數(shù)目、有無肝硬化、有無微血管癌栓、TNM分期等病理資料。另取癌旁正常組織作為對照。將統(tǒng)計(jì)完整的病例錄入Microsoft Excel并建立數(shù)據(jù)庫,以此數(shù)據(jù)庫為基礎(chǔ),利用SPSS 19.0分析比較DDX5的表達(dá)水平與ICC臨床病理參數(shù)之間的相關(guān)性,并對323例ICC預(yù)后進(jìn)行評估。結(jié)果:DDX5陽性染色呈棕褐色或棕黃色,主要表達(dá)于癌細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)。323例ICC組織中170例DDX5表達(dá)陽性,陽性率為52.6%。DDX5在ICC組織中的表達(dá)水平明顯高于正常膽管組織,統(tǒng)計(jì)結(jié)果有顯著差異(P0.05)。對4類病變進(jìn)行免疫組化分析,結(jié)果顯示,高級別上皮內(nèi)瘤變組織中DDX5的陽性率為40%(4/10),假腺管型肝細(xì)胞癌組織中DDX5的陽性率為0%(0/10),肝內(nèi)轉(zhuǎn)移性腺癌組織中DDX5的陽性率為50%(5/10)。ICC組織中DDX5的表達(dá)量與患者性別、血清ALP值有關(guān)(P0.05),但與患者的年齡、肝硬化情況、腫瘤大小、TNM分期等無關(guān)(P0.05)。DDX5高表達(dá)組的總生存期(overall suvival,OS)明顯差于低表達(dá)組(P=0.011),但與復(fù)發(fā)時(shí)間(time to recurrence,TTR)無關(guān)(P=0.555)。結(jié)論:DDX5作為ICC的一個(gè)新型腫瘤標(biāo)志物,在ICC的診斷與鑒別診斷,以及評估ICC患者術(shù)后生存狀況具有較大的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。
[Abstract]:Effect of expression and regulation of chapter DDX5 of ICC biological characteristics and its possible mechanism Objective: To investigate the effect of down-regulation of DDX5 in intrahepatic cholangiocarcinoma (intrahepatic, cholangiocarcinoma, ICC) RBE cell proliferation, migration, invasion and influence of cell cycle and its possible molecular mechanism. Methods: DDX5-h RNA lentivirus transfected ICC cell line RBE. The use of DDX5 cells RBE protein expression of Western was detected by Blot assay after lentivirus transfection, expression on cell cycle of RBE cells and down regulate the proliferation by flow cytometry and Alamar Blue assay for detection of DDX5. In addition, the effect of wound healing assay and Transwell invasion assay of DDX5 on invasion and migration of RBE cells. The expression by Western Blot assay after the down-regulation of DDX5 expression of EMT related molecules. Results: the testing results of Western Blot showed that DDX5 cells RBE protein DDX5-sh in the RNA group The expression level was higher than that of blank control group and negative control group decreased significantly, suggesting that the expression of.Alamar Blue assay results DDX5-sh RNA transfection can effectively inhibit DDX5 protein in RBE cells showed that the DDX5-sh RNA group detected cell proliferation rate was significantly lower than that in blank control group and negative control group in 48 hours (P 0.05) wound healing; experimental results show that after 24 hours, the migration of DDX5-sh RBE cells in RNA group was significantly lower than the blank control group and negative control group (P < 0.01); Transwell invasion assay showed that the number of cells in DDX5-sh RNA group the average across the membrane compared with blank control group and negative control group were significantly reduced, the difference was significant (P < 0.01). Flow cytometry, DDX5-sh RNA1 group and the 2 group of S phase cell percentage was significantly higher than the blank control group and negative control group, and the corresponding G0/G1, G2/M ratio decreased, fine The cell block in S phase (P 0.05) the research results of.Western Blot showed that the EMT molecule vimentin, the expression level of SNAIL and EGFR in the level of DDX5-sh in RNA cells decreased. Conclusion: downregulation of DDX5 can inhibit ICC RBE cell proliferation, migration and invasion, and blocking the cell cycle in S period; DDX5 through the biological characteristics of EMT ICC mechanism. In the second chapter, the DDX5 diagnosis and clinical prognostic significance of ICC in immune pathology Objective: to detect expression of DDX5 ICC in the organization, verification of DDX5 in the diagnosis and differential diagnosis of ICC in value, and to explore the correlation between the expression of DDX5 and ICC the clinicopathological parameters and prognosis. Methods: from July 2000 to March 2006 in our hospital surgical resection and pathological diagnosis of ICC 323 cases. Through access to electronic and paper version of the case file, collect the patient's age, gender, tumor The size, number, there is no cirrhosis, without microvascular invasion, TNM staging and pathologic data. Another normal tissues as control. The statistics of cases with complete input Microsoft Excel and the establishment of a database, the database as the foundation, the correlation between the expression level of comparative analysis using SPSS 19 DDX5 with clinicopathological parameters of ICC, and to evaluate the prognosis of ICC. Results: 323 cases of DDX5 positive staining was brown or yellow brown, mainly expressed in the expression of DDX5 in 170 cases of cancer cell nucleus and cytoplasm of.323 cases of ICC tissues, the positive rate of 52.6%.DDX5 expression in ICC tissues was significantly higher than that in normal bile duct tissues. Statistical results there were significant differences (P0.05). Analysis of 4 types of lesions were immunohistochemistry showed that the positive rate of DDX5 high grade intraepithelial neoplasia tissues were 40% (4/10), false positive rate of glandular type DDX5 in hepatocellular carcinoma was 0% (0/10), The positive rate of DDX5 in liver metastatic adenocarcinoma tissues were 50% (5/10) expression and gender DDX5.ICC tissues, serum ALP value (P0.05), but with the age of patients, liver cirrhosis, tumor size, TNM stage was not significant (P0.05).DDX5 high expression group (total deposit overall suvival, OS) is significantly worse than the low expression group (P=0.011), but with time to recurrence (time to recurrence, TTR) to (P=0.555). Conclusion: DDX5 as a new tumor marker of ICC, in the diagnosis and differential diagnosis of ICC, ICC and evaluate the postoperative survival situation has great practical application value.

【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R735.8

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 倪泉興;肝內(nèi)膽管癌的淋巴擴(kuò)散類型[J];國外醫(yī)學(xué).外科學(xué)分冊;2001年06期

2 莊大勇,梁平,王細(xì)文,陳海,趙平;轉(zhuǎn)化生長因子-α及表皮生長因子受體在肝內(nèi)膽管癌形成過程中的表達(dá)[J];山東醫(yī)藥;2004年09期

3 張敏杰,王成友,鄭凱,倪勇,程樹榜;肝內(nèi)膽管癌的診斷與治療(附12例報(bào)告)[J];中華肝膽外科雜志;2004年08期

4 上官惠敏,胡育前;肝內(nèi)膽管癌18例臨床分析[J];肝膽胰外科雜志;2005年02期

5 王麗杰;孟凡榮;;肝內(nèi)膽管癌的超聲診斷價(jià)值[J];臨床超聲醫(yī)學(xué)雜志;2008年01期

6 俞穎;譚潘麗;錢麗麗;;肝內(nèi)膽管癌患者血清蛋白指紋圖譜的檢測及其意義[J];中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志;2010年04期

7 湯天平;許紅蓮;李秀軍;耿建利;;肝內(nèi)膽管癌38例臨床分析[J];中華實(shí)用診斷與治療雜志;2010年07期

8 張克新;王云慧;;早期肝內(nèi)膽管癌9例超聲診斷分析[J];中國誤診學(xué)雜志;2012年06期

9 王凱,李延青;肝內(nèi)膽管癌[J];臨床肝膽病雜志;1994年03期

10 李介秋;原發(fā)性肝內(nèi)膽管結(jié)石與肝內(nèi)膽管癌8例報(bào)告[J];當(dāng)代醫(yī)師雜志;1996年01期

相關(guān)會議論文 前10條

1 周信達(dá);湯釗猷;樊嘉;周儉;吳志全;欽倫秀;馬曾辰;孫惠川;邱雙健;余耀;任寧;葉青海;王魯;葉勝龍;;手術(shù)切除272例原發(fā)性肝內(nèi)膽管癌的臨床病理分析[A];第十二屆全國肝癌學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2009年

2 周彥明;李濱;楊甲梅;;肝內(nèi)膽管癌肝外淋巴轉(zhuǎn)移特點(diǎn)的初探[A];中國抗癌協(xié)會膽道腫瘤專業(yè)委員會成立大會暨第一屆全國膽道腫瘤學(xué)術(shù)會議論文集[C];2009年

3 左朝暉;歐陽永忠;羅建紅;譚春祁;陳菊英;周德善;周征宇;莫勝川;;肝內(nèi)膽管癌的治療和預(yù)后因素的分析[A];中國抗癌協(xié)會膽道腫瘤專業(yè)委員會成立大會暨第一屆全國膽道腫瘤學(xué)術(shù)會議論文集[C];2009年

4 ;中國抗癌協(xié)會肝內(nèi)膽管癌診治指南(討論稿)[A];中國抗癌協(xié)會膽道腫瘤專業(yè)委員會第二屆全國膽道腫瘤學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

5 劉辰;于勇;祝路民;姜小清;;1例聯(lián)合中肝靜脈中段切除的半肝切除肝內(nèi)膽管癌手術(shù)報(bào)告[A];中國抗癌協(xié)會膽道腫瘤專業(yè)委員會第二屆全國膽道腫瘤學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

6 董猛;;肝內(nèi)膽管癌的臨床進(jìn)展[A];中國腫瘤內(nèi)科進(jìn)展 中國腫瘤醫(yī)師教育（2014）[C];2014年

7 顏樹宏;鄭笑娟;陳麗萍;史曉龍;周國平;;實(shí)時(shí)超聲造影對海島地區(qū)肝內(nèi)膽管癌的診斷[A];第二屆長三角超聲醫(yī)學(xué)論壇暨2009年浙江省超聲醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2009年

8 蔣健松;羅建生;;肝膽管結(jié)石合并肝內(nèi)膽管癌21例臨床分析[A];2012年浙江省外科學(xué)學(xué)術(shù)年會論文集[C];2012年

9 王蒙蒙;趙云鵬;高春芳;;100例肝內(nèi)膽管癌臨床實(shí)驗(yàn)室特征分析[A];第一次全國中西醫(yī)結(jié)合檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議暨中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會成立大會論文匯編[C];2014年

10 邵初曉;呂昕亮;朱錦德;方基興;;肝內(nèi)膽管結(jié)石合并肝內(nèi)膽管癌的診斷分析[A];2005年浙江省腫瘤外科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2005年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前9條

1 李建偉;miR-605靶向調(diào)控PSMD10在肝內(nèi)膽管癌中的作用及機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

2 邢相磊;肝內(nèi)膽管癌肝切除術(shù)后的預(yù)后分析[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

3 畢超;肝內(nèi)膽管癌行手術(shù)切除后的生存分析及Beclin 1、ARID1A、IDH1和CA9表達(dá)情況及臨床意義分析[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2016年

4 司安鋒;肝內(nèi)膽管癌手術(shù)方式選擇及復(fù)發(fā)后再手術(shù)治療和遠(yuǎn)期療效[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2017年

5 徐亦君;肝再生磷酸酶-3在肝內(nèi)膽管癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用研究[D];山東大學(xué);2010年

6 翟博;肝內(nèi)膽管癌中上皮鈣粘附素/P120復(fù)合物表達(dá)異常的實(shí)驗(yàn)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2005年

7 陳本棟;胰高血糖素樣肽-1及其類似物Exendin4對肝內(nèi)膽管癌發(fā)生發(fā)展的作用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2013年

8 劉娟;人類臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞阻抑肝內(nèi)膽管癌細(xì)胞生長的分子機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2014年

9 湯靚;DEN誘導(dǎo)大鼠肝癌模型的代謝組學(xué)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 蔣添翼;探討PTEN作為肝內(nèi)膽管癌個(gè)性化治療靶標(biāo)的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

2 陳良;CO-029介導(dǎo)TNFα/TNFαR1誘導(dǎo)膽管癌上皮間變的初步研究[D];南華大學(xué);2015年

3 王清;不同病因相關(guān)肝內(nèi)膽管癌肝切除術(shù)預(yù)后的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

4 張楊;Hh信號通路抑制劑對肝內(nèi)膽管癌RBE細(xì)胞生物學(xué)行為的影響研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2016年

5 陳超;KRAS基因第12、13號密碼子突變與肝內(nèi)膽管癌臨床病理的關(guān)系[D];湖南師范大學(xué);2016年

6 李昊;利用外顯子組測序技術(shù)篩選肝內(nèi)膽管癌突變基因及驗(yàn)證USP17基因[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2016年

7 何鋮;shRNA沉默PKHD1表達(dá)對人肝內(nèi)膽管癌Hucct-1細(xì)胞增殖和侵襲轉(zhuǎn)移的影響[D];福建醫(yī)科大學(xué);2016年

8 吳慶賀;臨床表現(xiàn)為肝膿腫的肝內(nèi)膽管癌病人的診療分析[D];華中科技大學(xué);2016年

9 趙韻;RNA解螺旋酶DDX5的表達(dá)與調(diào)控對肝內(nèi)膽管癌生物學(xué)特性的影響及其臨床病理學(xué)意義的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2017年

10 李殿啟;肝內(nèi)膽管癌臨床特征的初步探討[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2008年

，

本文編號：1464048