本文關(guān)鍵詞：缺氧在結(jié)直腸癌VM形成中的作用及相關(guān)機制的研究　出處：《天津醫(yī)科大學》2016年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：研究目的本課題主要研究缺氧在結(jié)直腸癌VM形成中的作用及相關(guān)機制,首先通過體內(nèi)實驗檢測缺氧誘導(dǎo)因子-lα(HIF-lα)在結(jié)直腸癌和結(jié)直腸腺瘤中的表達情況,其次檢測結(jié)直腸癌和結(jié)直腸腺瘤中VM存在情況,分析HIF-lα表達與病理資料的關(guān)系及其對臨床預(yù)后的影響;再通過檢測HIF-lα與EMT及VM相關(guān)蛋白的相關(guān)性,探討HIF-lα在結(jié)直腸癌VM形成中的作用;最后通過體外模擬缺氧微環(huán)境,探討缺氧對結(jié)直腸癌細胞VM形成的影響及可能的分子機制。研究方法(1)對收集的50例結(jié)直腸癌及50例結(jié)直腸腺瘤患者組織標本進行HIF-lα、VEGF、FLK-1、VE-cad、MMP-2、E-cadherin、Vimentin、Snail免疫組織化學染色及CD31/PAS雙重染色,檢測這些指標的表達變化。(2)分析結(jié)直腸癌中HIF-lα、MVD的表達與臨床預(yù)后的關(guān)系及HIF-lα的表達與VEGF、VE-cad、FLK-1、MMP-2、E-cadherin、Vimentin、Snail的相關(guān)性。(3)體外模擬缺氧微環(huán)境,檢測與常氧狀態(tài)相比,缺氧對結(jié)直腸癌HCT116和HT-29細胞侵襲、遷移和成管狀態(tài)的改變。(4)通過WB及RT-PCR實驗,檢測與常氧狀態(tài)相比,缺氧對EMT標志分子(E-cadherin、Vimentin)在蛋白及mRNA水平表達的改變。(5)通過WB實驗檢測缺氧誘導(dǎo)的VE-cad、MMP-2、Snail表達情況。研究結(jié)果(1)HIF-1α陽性表達在結(jié)直腸癌中顯著較腺瘤中高,且通過CD31/PAS雙重染色發(fā)現(xiàn):VM存在于缺氧程度嚴重的結(jié)直腸癌組織中,而腺瘤中無VM存在。(2)HIF-lα的表達與患者臨床病理資料的關(guān)系HIF-lα的表達在年齡"f50歲或50歲的患者,男性和女性患者,腫瘤"f5cm或5cm患者,TNM分期Ⅰ/Ⅱ期和Ⅲ/Ⅳ期患者中未見差別,差異無統(tǒng)計學意義,HIF-lα在低分化腫瘤和中分化腫瘤中的表達明顯多于高分化腫瘤中的表達,差異有統(tǒng)計學意義(P=0.04)。HIF-lα在有轉(zhuǎn)移組患者中的表達明顯高于無轉(zhuǎn)移組患者中的表達,差異有統(tǒng)計學意義(P=0.009)。生存分析結(jié)果顯示,與HIF-lα陰性患者相比,HIF-lα陽性患者存活時間顯著縮短。(3)結(jié)直腸癌中MVD值明顯高于結(jié)直腸腺瘤中MVD值,且差異具有統(tǒng)計學意義,并對結(jié)直腸癌中MVD≤20的患者與MVD20的患者進行生存分析比較,發(fā)現(xiàn)MVD≤20的患者生存時間比MVD20患者的長,MVD與患者生存時間呈負相關(guān)。(4)結(jié)直腸癌中HIF-lα的表達與VEGF、VE-cad、FLK-1、MMP-2的相關(guān)性HIF-lα與VEGF表達正性相關(guān)(r=0.346,P=0.014);HIF-lα與FLK-1表達正性相關(guān)(r=0.338,P=0.016);HIF-lα與VE-cad表達正性相關(guān)(r=0.406,P=0.003);HIF-lα與MMP-2表達正性相關(guān)(r=0.529,P=0.000)。(5)HIF-lα的表達與E-cadherin、Vimentin、Snail的相關(guān)性HIF-lα陽性表達與Snail的陽性表達呈正相關(guān)(r=0.371,P=0.004)。在50例結(jié)直腸癌中有32例呈HIF-lα陽性表達,且在這32例HIF-lα陽性中有10例Vimentin陽性表達(r=0.276,P=0.026),這10例均為E-cadherin陰性表達,這表明HIF-lα的表達與EMT的發(fā)生呈正相關(guān)。(6)通過體外構(gòu)建缺氧模型,觀察缺氧對結(jié)直腸癌HCT116和HT-29細胞功能學影響,結(jié)果顯示:與常氧組相比,缺氧組中這兩種細胞的侵襲、遷移和成管能力都增強。(7)WB結(jié)果表明:與常氧組相比,缺氧組E-cadherin蛋白表達顯著減少,HIF-1α、Vimentin、Snail、VE-cad、MMP-2蛋白表達都明顯增多。(8)RT-PCR結(jié)果表明,與常氧組相比,缺氧組E-cadherin mRNA表達顯著減少,HIF-1α、Vimentin mRNA表達水平增加。研究結(jié)論:(1)HIF-1α在結(jié)直腸癌中呈高表達,且與患者不良預(yù)后有關(guān)。(2)VM存在于缺氧程度嚴重的結(jié)直腸癌組織中,而腺瘤中無VM存在。(3)缺氧誘導(dǎo)結(jié)直腸癌HCT116、HT-29細胞的侵襲遷移及成管能力均增強。(4)缺氧誘導(dǎo)EMT的發(fā)生,并調(diào)控VM相關(guān)蛋白(VE-cad、MMP-2)的高表達,進一步促進VM的形成。
[Abstract]:The expression of HIF - 1偽 , VEGF , FLK - 1 , VE - cad , MMP - 2 , E - cadherin , Vimentin , MMP - 2 , E - cadherin , Vimentin , Vimentin , MMP - 2 , E - cadherin , Vimentin , Vimentin , MMP - 2 , E - cadherin , Vimentin , Vimentin , MMP - 2 , E - cadherin , Vimentin , Vimentin , MMP - 2 , E - cadherin , Vimentin , Vimentin , MMP - 2 , E - cadherin , Vimentin , Vimentin , MMP - 2 , E - cadherin , Vimentin , Vimentin were detected in 50 colorectal cancer patients and 50 patients with colorectal adenoma . ( 2 ) The expression of HIF - 1偽 in colorectal cancer was significantly higher than that in patients without metastasis ( r = 0.346 , P = 0 . 016 ) . ( 5 ) The expression of HIF - 1偽was positively correlated with the positive expression of E - cadherin , vimentin , and snail ( r = 0.371 , P = 0.004 ) . The expression of HIF - 1偽 and Vimentin was significantly decreased in the hypoxia group compared with the normal oxygen group . ( 4 ) Hypoxia - induced EMT occurred and the high expression of VM - related protein ( VE - cad , MMP - 2 ) was regulated and the formation of VM was further promoted .

【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.34

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本文編號：1434912