本文關(guān)鍵詞：突變型p53與HSP70和HSP90的相互作用的研究　出處：《湖南師范大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： p53R273H HSP70 HSP90 蛋白質(zhì)相互作用 質(zhì)譜分析

【摘要】：TP53基因編碼一種分子量為53kDa的蛋白質(zhì),命名為p53。TP53基因的失活對腫瘤形成起重要作用。在所有惡性腫瘤中,50%以上會出現(xiàn)該基因的突變。TP53突變大多是由于單個氨基酸發(fā)生替換而導(dǎo)致的錯義突變。突變p53蛋白依然保留著全長序列,但是功能上卻從抑癌基因轉(zhuǎn)變?yōu)榘┗�。熱休克蛋�?HSP)是生物受到環(huán)境中物理、化學(xué)、生物、精神等刺激時發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)而合成的蛋白質(zhì),是一類高度保守的蛋白質(zhì),普遍存在于原核和真核生物中。HSP家族的功能十分重要,主要作為分子伴侶、影響細(xì)胞凋亡、參與免疫和提高細(xì)胞耐熱性。在本文中,我們首先通過免疫共沉淀結(jié)合質(zhì)譜分析的方法在含有p53R273H突變體的乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-468中鑒定與p53R273H相互作用的蛋白質(zhì),一共鑒定到59個與p53R273H相互作用的蛋白。其中有9個蛋白為熱休克蛋白,其中屬于HSP70家族的有HSP70A2、HSP70A5、HSP70A6、HSP70A7、HSP70A8、HSP70A1L,屬于HSP90家族的為HSP90AA1、HSP90AB1、HSP90B1。然后,我們研究HSP70和HSP90對p53R273H蛋白功能的影響。我們將HSP90-AB1表達(dá)質(zhì)粒和一個HSP70-A5表達(dá)質(zhì)粒與p53R273H表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)入Hek293細(xì)胞中,然后檢測p53R273H蛋白的穩(wěn)定性。結(jié)果表明,HSP70和HSP90都能增強(qiáng)p53R273H的穩(wěn)定性,而且HSP70與HSP90共轉(zhuǎn)染比單獨(dú)轉(zhuǎn)染一種質(zhì)粒時p53R273H的穩(wěn)定性更好。而用HSP70的抑制劑Pifithrin-μ或/和HSP90的抑制劑17-AAG處理MDA-MB-468細(xì)胞,則促進(jìn)p53R273H蛋白的降解。進(jìn)一步研究表明,在MDA-MB-468細(xì)胞中干擾p53R273H突變體抑制細(xì)胞增殖,用HSP70的抑制劑Pifithrin-μ或/和HSP90的抑制劑17-AAG處理MDA-MB-468細(xì)胞,抑制細(xì)胞增殖和遷移、促進(jìn)細(xì)胞凋亡。這些結(jié)果說明,HSP70和HSP90可能通過與p53R27H蛋白的相互作用、促進(jìn)p53R27H蛋白的穩(wěn)定,從而促進(jìn)細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞凋亡。
[Abstract]:TP53 gene encodes a 53kDa protein named inactivation of p53.TP53 gene which plays an important role in tumor formation. More than 50% mutation. TP53 mutation of the gene is mostly caused by a single amino acid replacement resulting in missense mutation. The mutant p53 protein still retains the full-length sequence. Heat shock protein (HSPs) is a kind of protein which is synthesized by the stress reaction in the environment when the organism is stimulated by physical, chemical, biological, spiritual and other stimuli, but the function is changed from the tumor suppressor gene to the oncogene. HSPs are a class of highly conserved proteins. The function of HSP family is very important in prokaryotes and eukaryotes. It mainly acts as a molecular chaperone and affects cell apoptosis. Participate in immunization and improve cell heat resistance. In this article. We first identified proteins interacting with p53R273H in MDA-MB-468 of breast cancer cells containing p53 R273H mutant by immunoprecipitation and mass spectrometry. . A total of 59 proteins interacting with p53R273H were identified, of which 9 proteins were heat shock proteins, including HSP70A2HSP70A5 belonging to the HSP70 family. HSP70A6, HSP70A7, HSP70A8, HSP70A1L, and HSP90AA1, HSP90AB1, belonging to HSP90 family. HSP90B1. and... We studied the effects of HSP70 and HSP90 on the function of p53R273H protein. We combined HSP90-AB1 expression plasmid and a HSP70-A5 expression plasmid with p53R27. 3H expression plasmid was co-transfected into Hek293 cells. The stability of p53R273H protein was determined. The results showed that both HSP70 and HSP90 could enhance the stability of p53R273H. Moreover, the stability of p53R273H by co-transfection of HSP70 and HSP90 was better than that of p53R273H transfected with a plasmid alone. The inhibitor of HSP70, Pifithrin- 渭 or / and HSP9, was used as the inhibitor of p53R273H. MDA-MB-468 cells were treated with 17-AAG. Further studies showed that the p53R273H mutant interfered with the proliferation of MDA-MB-468 cells. MDA-MB-468 cells were treated with HSP70 inhibitor Pifithrin- 渭 or / and HSP90 inhibitor 17-AAG to inhibit cell proliferation and migration. These results suggest that HSP70 and HSP90 may promote the stability of p53R27H protein by interacting with p53R27H protein and thus promote cell proliferation. Inhibit apoptosis.
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R730.2

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本文編號：1425841