[目的1：1.明確應(yīng)用CI-101細(xì)胞搜尋儀是否能富集肺癌患者外周靜脈血中的循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTCs),并對(duì)其進(jìn)行鑒定及計(jì)數(shù)；2.統(tǒng)計(jì)肺癌患者、良性腫瘤患者及健康人外周血CTCs計(jì)數(shù)差異,分析CTCs與肺癌TNM分期和臨床各參數(shù)之間相關(guān)性,明確CTCs是否能作為肺癌患者病情監(jiān)測(cè)指標(biāo)。[方法]1.選取5種不同腫瘤細(xì)胞系(即：NCI-H460、NCI-H446、7901、Hela、MCF-7)制成爬片,以GRP為抗體,用免疫組織化學(xué)染色檢驗(yàn)各種細(xì)胞中GRP的表達(dá)情況。采用免疫磁珠法將不同濃度梯度的腫瘤細(xì)胞系進(jìn)行分選,檢測(cè)免疫磁珠法對(duì)腫瘤細(xì)胞的篩選效果,并繪制成曲線圖。2.將不同數(shù)量的NCI-H446細(xì)胞摻入到5例健康志愿者的外周血中,通過(guò)免疫磁性細(xì)胞分離,計(jì)算該實(shí)驗(yàn)方法對(duì)腫瘤細(xì)胞的回收率。3.采集肺癌患者100例、肺部良性腫瘤40例、及30個(gè)健康志愿者的血樣作為陰性對(duì)照,應(yīng)用免疫磁珠法富集血中的循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTCs),檢測(cè)該實(shí)驗(yàn)方法的特異性和敏感性,再用細(xì)胞熒光技術(shù)對(duì)循環(huán)腫瘤細(xì)胞行形態(tài)學(xué)分析,并用HE細(xì)胞染色方法鑒定腫瘤細(xì)胞。4.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS17.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,用相關(guān)回歸方法分析檢出腫瘤細(xì)胞數(shù)與腫瘤細(xì)胞濃度關(guān)系,對(duì)變量進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn),實(shí)驗(yàn)結(jié)果以x±s表示；非正態(tài)分布或方差不齊的數(shù)據(jù)采用非參數(shù)秩和檢驗(yàn),相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)檢驗(yàn),以P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,趨勢(shì)圖用EXCEL制作。[結(jié)果J：1.用免疫磁珠法檢測(cè)不同數(shù)量的腫瘤細(xì)胞,隨著腫瘤細(xì)胞濃度的增加,免疫磁珠法檢測(cè)到的CTCs數(shù)量同時(shí)增加,相關(guān)性最好的腫瘤細(xì)胞株為NCI-H446細(xì)胞株,有顯著相關(guān)性,相關(guān)系數(shù)為0.8667(P0.001,),摻入細(xì)胞間回歸方程為：y=6.681X+26.795。將5種細(xì)胞系做成細(xì)胞爬片,用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞中的胃泌素釋放肽(GRP)的表達(dá),結(jié)果5種腫瘤細(xì)胞爬片免疫組化均為陽(yáng)性,且其陽(yáng)性表達(dá)率的高低與應(yīng)用免疫磁珠法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的檢出率相一致。2.不同數(shù)量的NCI-H446細(xì)胞摻入到5例健康志愿者的外周血中,以驗(yàn)證本實(shí)驗(yàn)對(duì)腫瘤細(xì)胞的回收率,其回收率在72%-89%之間,回收的細(xì)胞與添加細(xì)胞間數(shù)量有顯著相關(guān)性,相關(guān)系數(shù)為0.998(P0.001,),摻入細(xì)胞間回歸方程為：y=0.781X+1 1.307。3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析得到：(1)免疫磁珠法檢測(cè)100例肺癌患者、40例肺部良性腫瘤及30例健康志愿者外周血中的CTCs,并設(shè)定臨界值,計(jì)算該實(shí)驗(yàn)方法的敏感度和特異度分別為：85%和71.4%。(2)肺癌患者組、肺部良性腫瘤患者組及健康志愿者組兩兩比較(P0.05),有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(3)100例肺癌患者中,檢測(cè)到的CTCs與臨床各參數(shù)之間的比較：①患者的年齡(50歲組和50歲組)組間比較,P值0.769(P0.05)；男性組與女性組相比P值為0.536(P0.05),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；②腫瘤直徑3cm組和腫瘤直徑≥3cm相比(P0.05),有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；③TNM分期Ⅲ期、Ⅳ期患者檢出的循環(huán)腫瘤細(xì)胞明顯高于Ⅰ期和Ⅱ期(P0.05),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；④33例有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、40例骨轉(zhuǎn)移、80例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和20例無(wú)轉(zhuǎn)移組的肺癌患者檢出CTCs'情況比較,發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組和骨轉(zhuǎn)移組患者的循環(huán)腫瘤細(xì)胞明顯高于無(wú)轉(zhuǎn)移組和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組,并且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而與肺癌的病理類型無(wú)關(guān)(P0.05)。4.肺癌患者臨床參數(shù)與CTCs的相關(guān)性分析,CTCs檢測(cè)的陽(yáng)性率與患者的年齡、性別均無(wú)明顯關(guān)系(P0.05)；而與腫瘤大小以及臨床分期有密切關(guān)系,當(dāng)肺癌直徑大于3cm、有淋巴、骨轉(zhuǎn)移或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,其CTCs檢出率明顯相關(guān)(P0.05)；而與肺癌的病理類型無(wú)關(guān)(P0.05)。檢出CTCs數(shù)與血清腫瘤標(biāo)志物：CEA、CA125、 CA153、CA199升高明顯相關(guān)(P0.05)；與淋巴細(xì)胞因子：CD3+CD4+、CD3+CD8、NK、T細(xì)胞絕對(duì)值、Th細(xì)胞絕對(duì)、TS細(xì)胞絕對(duì)、自然殺傷細(xì)、CIKN有相關(guān)性；與細(xì)胞因子：IFN-γ、IL-2、TNF-α、IL-4、IL-6、IL-10有明顯相關(guān)性(P0.05)。I結(jié)論].1.應(yīng)用免疫磁珠法可以成功富集肺癌患者外周靜脈血中的循環(huán)腫瘤細(xì)(CTCs);2.肺癌患者的循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTCs)數(shù)與患者的腫瘤大小、TNM分期、有無(wú)轉(zhuǎn)移,血清腫瘤標(biāo)志物等有相關(guān)性,可作為臨床肺癌患者病情監(jiān)測(cè)的輔助指標(biāo)。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)

【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R734.2
【目錄】：
 

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