本文關(guān)鍵詞：利用大腸桿菌和煙草表達(dá)的重組全人源藥用抗EGFR單鏈抗體的抗腫瘤分析　出處：《聊城大學(xué)》2015年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】：表皮生長(zhǎng)因子受體(Epidermal Growth Factor Receptor,EGFR)是腫瘤治療中一個(gè)很重要的靶分子,針對(duì)EGFR靶點(diǎn)的抗體藥物的研究具有廣闊的前景。sc Fv是一種小分子抗體片段,其免疫原性較小,已逐漸成為抗體靶向治療的重要研究方向。目前,雖然動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)抗體時(shí),抗體活性高,但生產(chǎn)成本高。原核生物反應(yīng)器可以有效的解決生產(chǎn)成本高的缺陷,但是其仍存在不足之處,它不能對(duì)翻譯后的蛋白進(jìn)行修飾,因而只適合表達(dá)Fv,sc Fv、Fab等抗體。植物生物反應(yīng)器可以解決以上兩者的缺陷,被認(rèn)為是一種生產(chǎn)成本低、蛋白活性高的生物反應(yīng)器。如已經(jīng)有多種Fab、sc Fv等都已在植物中成功地表達(dá)�？贵w經(jīng)歷了鼠源抗體,人源化抗體和全人源抗體三個(gè)階段,全人源sc Fv能很大程度的消減HAMA反應(yīng)。乳腺癌是常見(jiàn)的惡性腫瘤�？笶GFR單克隆抗體具有抑制乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖的作用。本試驗(yàn)采用生物信息方法對(duì)HLL和LLH基因序列進(jìn)行構(gòu)建,并預(yù)測(cè)這兩種蛋白的性質(zhì)。構(gòu)建了p ET-28a-c(+)-HLL、p ET-28a-c(+)-LLH表達(dá)載體;利用E.coli生產(chǎn)HLL-p ET和LLH-p ET蛋白,并分析其抗腫瘤活性。構(gòu)建了p BI121-HLL-YC表達(dá)載體;利用煙草生產(chǎn)HLL-YC蛋白,并對(duì)其進(jìn)行了Western Blotting檢測(cè)。為了提高目的蛋白在煙草中的表達(dá)量和生物活性,構(gòu)建了HLL-YCPH-YC和LLH-YCPH-YC基因序列。研究結(jié)果如下:1.HLL、LLH的生化指標(biāo)都與可溶性sc Fv相符,但只有HLL與可溶性sc Fv有相似的空間結(jié)構(gòu)。2.構(gòu)建了p ET-28a-c(+)-HLL、p ET-28a-c(+)-LLH表達(dá)載體,表達(dá)了HLL-p ET和LLH-p ET蛋白。HLL-p ET對(duì)MCF-7有顯著的增殖抑制作用,具有生物活性。LLH-p ET對(duì)MCF-7無(wú)顯著的增殖抑制作用,不具有生物活性。3.構(gòu)建了p BI121-HLL-YC表達(dá)載體,表達(dá)了HLL-YC蛋白。4.構(gòu)建了HLL-YCPH-YC和LLH-YCPH-YC抗體基因序列,為了提高目的蛋白在煙草中的表達(dá)量和生物活性奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:琛ㄧ毊鐢熼暱鍥犲瓙鍙椾綋(Epidermal Growth Factor Receptor,EGFR)鏄偪鐦ゆ不鐤椾腑涓，

本文編號(hào)：1396603