本文關(guān)鍵詞：肝癌干細(xì)胞靶向治療的研究　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 肝癌 腫瘤干細(xì)胞 單克隆抗體 28C10 HSP900α

【摘要】：肝癌是我國常見的惡性腫瘤之一,復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移和耐藥是導(dǎo)致其高死亡率的根本原因。研究表明腫瘤干細(xì)胞是腫瘤組織中一小部分具有干細(xì)胞特性的癌細(xì)胞,它具有自我更新和多向分化的能力,是腫瘤發(fā)生、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)和耐藥的根源。目前現(xiàn)有的治療手段主要?dú)缌嗣舾械哪[瘤子代細(xì)胞,而對(duì)腫瘤干細(xì)胞作用甚微,最終導(dǎo)致了腫瘤患者的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移,因此若能靶向腫瘤干細(xì)胞治療腫瘤將會(huì)成腫瘤治療的最有效的手段。通過雜交瘤融合技術(shù)獲得庫容量為2246株雜交瘤單克隆抗體的人肝癌干細(xì)胞單抗庫,通過產(chǎn)量測(cè)定、細(xì)胞ELISA檢測(cè)、功能篩選及Western Blot特異性檢測(cè)確定28C10為研究單抗。活細(xì)胞與固定細(xì)胞免疫熒光的檢測(cè)發(fā)現(xiàn),單抗28C10識(shí)別的靶抗原在Be17402-V13 和 MHCC97-L細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞漿中均有分布；活細(xì)胞流式檢測(cè)初步證實(shí)單抗28C10識(shí)別肝癌干細(xì)胞。采用免疫組化的方法研究了單抗28C10識(shí)別臨床肝癌患者組織的情況,分析發(fā)現(xiàn)單抗28C10的靶抗原在72.0%人肝癌組織中特異性表達(dá)。分選MHCC97-L細(xì)胞中28C10識(shí)別陽性的細(xì)胞進(jìn)行相關(guān)體能外腫瘤干細(xì)胞特征研究,結(jié)果表明28C10+的細(xì)胞顯現(xiàn)出比28C10-和模擬分選親本細(xì)胞更強(qiáng)的成球能力、侵襲能力、耐藥性及裸鼠致瘤能力,證明了單抗28C10是可以識(shí)別肝癌干細(xì)胞的單抗。體外功能實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,單抗28C10可明顯抑制肝癌細(xì)胞系Be17402-V13 和 MHCC97-L的自我更新能力、侵襲能力和耐藥能力。裸鼠體內(nèi)的抗體治療實(shí)驗(yàn)顯示,單抗28C10單獨(dú)應(yīng)用時(shí)可抑制肝癌移植瘤的生長(zhǎng),高劑量對(duì)移植瘤體積的抑制率為67.7%；低劑量抗體與化療藥物聯(lián)合應(yīng)用時(shí)抑制率達(dá)到70.1%,顯示出化療藥物與單抗聯(lián)合的優(yōu)勢(shì)。分離單抗28C10的靶抗原,經(jīng)質(zhì)譜鑒定其靶抗原為HSP90a。通過免疫熒光激光共聚焦、WB和免疫共沉淀初步證明了HSP90a確是單抗28C10的靶抗原。進(jìn)而采用免疫組化的方法研究了HSP90a識(shí)別臨床肝癌患者組織的情況,分析發(fā)現(xiàn)單抗HSP90a在82.52%人肝癌組織中特異性達(dá),陽性表達(dá)明顯高于正常肝組織、肝炎和肝硬化,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),且HSP90a在肝癌組織中的表達(dá)與病理分級(jí)相關(guān)。綜上所述,單抗28C10不僅可以識(shí)別肝癌干細(xì)胞,還具有抑制肝癌干細(xì)胞侵襲、成球和耐藥的能力,且有明顯的體內(nèi)抑制人肝癌移植瘤生長(zhǎng)的功能；鑒定單抗28C10的靶抗原為HSP900,并進(jìn)行了初步的驗(yàn)證,說明HSP90α+細(xì)胞具有腫瘤干細(xì)胞的特征,具有作為肝癌干細(xì)胞治療靶點(diǎn)的潛力。
[Abstract]:A monoclonal antibody against hepatocellular carcinoma ( HCC ) was identified by monoclonal antibody 28C10 . The results showed that the single anti - 28C10 antibody could inhibit the growth of hepatoma cell line Be17402 - V13 and MHCC97 - L .

【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.7

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