本文關(guān)鍵詞：達(dá)沙替尼抑制鼻咽癌細(xì)胞侵襲及誘導(dǎo)其凋亡的作用　出處：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2016年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的鼻咽癌系我國(guó)高發(fā)的頭頸部惡性腫瘤,具有家族及地區(qū)聚集性。臨床上,就診的患者大多已為Ⅲ,Ⅳ期,單純的放射治療已經(jīng)不能滿(mǎn)足治療需要,化療作用有限,需要新的治療藥物出現(xiàn)。鼻咽粘膜的正常組織與癌組織中都有c-Src的表達(dá),癌組織中表達(dá)明顯增高,且鼻咽癌組織中c-Src表達(dá)分別與其與臨床分期、預(yù)后不良密切相關(guān)。故Src也可以作為NPC全身治療的一個(gè)潛在靶點(diǎn)。Src激酶家族系非受體酪氨酸蛋白激酶,其家族成員已發(fā)現(xiàn)有9個(gè),這些產(chǎn)物都是具有蛋白酪氨酸激酶活性的蛋白質(zhì)。它們由特殊結(jié)構(gòu)域組成,分子構(gòu)型極其相似,參與多條細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng),分化,增殖,遷移等生理過(guò)程均能發(fā)揮重要的作用。其中Src作為人類(lèi)首先發(fā)現(xiàn)的原癌基因c-Src編碼的蛋白激酶,其活化與多種人類(lèi)惡性腫瘤發(fā)生及復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移相關(guān)。因此,Src激酶被作為一個(gè)治療癌癥的重要靶點(diǎn),Src激酶抑制劑可能為癌癥的治療提供新的方法。本研究旨在研究Src激酶抑制劑達(dá)沙替尼在體外對(duì)鼻咽癌細(xì)胞的抑制作用。方法選擇人鼻咽癌細(xì)胞系CNE2,應(yīng)用不同濃度的達(dá)沙替尼處理,分別使用Western blot分析蛋白及磷酸化蛋白表達(dá)水平,MTT法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn),AnnexinV/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡及Transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn),了解達(dá)沙替尼應(yīng)用后,NPC細(xì)胞增殖,凋亡及遷移能力的變化。結(jié)果1)應(yīng)用不同濃度的達(dá)沙替尼處理細(xì)胞后發(fā)現(xiàn),隨著藥物濃度的增高,鼻咽癌細(xì)胞的增殖能力呈現(xiàn)出被抑制效應(yīng)明顯增強(qiáng)的現(xiàn)象。2)隨著藥物濃度的增加,phospho-AKT (Ser473)、 phospho-MEK (ser217/221)、phospho-ERK (tyr204)的蛋白水平呈現(xiàn)明顯的降低趨勢(shì),提示達(dá)沙替尼主要抑制MAPK 和 PI3K/AKT信號(hào)通路的活性,從而抑制細(xì)胞的生長(zhǎng)及增殖。3)隨著達(dá)沙替尼的濃度增加,發(fā)現(xiàn)達(dá)沙替尼抑制Src的磷酸化活性的能力明顯增強(qiáng),但對(duì)Src的總蛋白影響不大。4)達(dá)沙替尼能夠明顯濃度依賴(lài)性地誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生晚期凋亡,即PI和AnnexinV染色雙陽(yáng)性的細(xì)胞比例明顯增加。5)達(dá)沙替尼在體外能抑制FAK的磷酸化水平,使FAK-SRC復(fù)合物的活性顯著減弱,從而明顯抑制鼻咽癌細(xì)胞的遷移能力,且呈濃度依賴(lài)性。結(jié)論在我們的研究中發(fā)現(xiàn),達(dá)沙替尼能通過(guò)減少Src激酶磷酸化的水平,使得下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路MAPK和PI3K/AKT的活性受到抑制,抑制細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)凋亡。此外,達(dá)沙替尼還能夠抑制SRC-FAK復(fù)合體的形成,減弱細(xì)胞與細(xì)胞周?chē)|(zhì)之間的黏附作用,從而抑制鼻咽癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。本研究為Src激酶抑制劑Dasatinib將來(lái)進(jìn)一步應(yīng)用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn),及最終應(yīng)用于臨床治療晚期鼻咽癌,提供了開(kāi)端及有力的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
[Abstract]:Objectivenpc Department of head and neck malignant tumors with high incidence in China, with a family and area aggregation. Clinically, the patients with stage IV have been mostly for III,, radiotherapy alone can not meet the need for treatment, chemotherapy effect, need new drugs. The expression of c-Src in normal tissue and nasopharyngeal carcinoma the mucous membrane of the expression is significantly increased in cancer tissues, and the expression of c-Src and the clinical stages and prognosis are closely related. Therefore, Src NPC can also serve as a systemic treatment of a potential target of.Src kinase family non receptor tyrosine kinase, the family members have been found to have 9 of these products. Is the activity of protein tyrosine kinase protein. They consist of a special domain, molecular conformation is very similar, and participate in multiple cellular signal transduction pathways, cell growth, differentiation, proliferation, migration Shift the physiological process can play an important role. Protein kinase c-Src gene encoding human Src as the first discovered in which the activation of many kinds of human malignant tumor occurrence and metastasis. Therefore, Src kinase is an important target for a cancer treatment, Src kinase inhibitors may provide a new treatment method for cancer. The purpose of this research is to study the Src kinase inhibitor dasatinib in vitro inhibition of nasopharyngeal carcinoma cells. Methods CNE2 cells with different concentrations of dasatinib treatment respectively, using Western analysis of blot protein and phosphorylated protein expression, cell growth curve was drawn by MTT AnnexinV/PI double staining method detection of cell apoptosis and Transwell cell migration experiment, understanding of dasatinib application, NPC cell proliferation, apoptosis and migration. Results 1) with different concentrations Dasatinib treated cells showed that with the increase of drug concentration, the proliferation of nasopharyngeal carcinoma cells showed a significant inhibitory effect was the ability to enhance the phenomenon of.2) with the increase of drug concentration, phospho-AKT (Ser473), phospho-MEK (ser217/221), phospho-ERK (tyr204) protein levels decreased significantly, suggesting that dasatinib mainly the inhibition of MAPK and the activity of the PI3K/AKT signaling pathway, thereby inhibiting the growth and proliferation of.3 cells) with dasatinib concentration increase, ability to find the phosphorylation activity of dasatinib inhibited Src increased significantly, but the total protein has no significant effect on Src.4) Dashti Ni could concentration dependently induced cell induced apoptosis. PI and AnnexinV double staining positive cells significantly increased the proportion of.5 Dashti Ni) can inhibit the phosphorylation of FAK in vitro, the activity of the FAK-SRC complex was significantly reduced Thus, the migration ability of inhibition of nasopharyngeal carcinoma cells, in a dose-dependent manner. Conclusion in our study we found that dasatinib can reduce Src phosphorylation level, the downstream signal transduction pathway of MAPK and the activity of PI3K/AKT was inhibited, inhibit cell proliferation, induce apoptosis. In addition, the formation of dasatinib can also inhibit SRC-FAK complex, weaken the adhesion between the surrounding cells and extracellular matrix, thereby inhibiting the metastasis of nasopharyngeal carcinoma cells. The study of Src kinase inhibitor Dasatinib further applied to animal experiments, and finally applied to the clinical treatment of advanced nasopharyngeal carcinoma, provides the experimental basis for the beginning and strong.

【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R739.63

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本文編號(hào)：1369919