本文關(guān)鍵詞：結(jié)直腸腫瘤中KRAS和BRAF基因突變特點(diǎn)及檢測(cè)方法對(duì)比分析的研究　出處：《上海交通大學(xué)》2015年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的:研究遠(yuǎn)端結(jié)直腸腺瘤和腺癌病變中KRAS和BRAF基因突變的特點(diǎn),初步了解分子學(xué)診斷在指導(dǎo)結(jié)直腸癌用藥中的臨床價(jià)值;同時(shí),對(duì)比分析Cast PCR法和DNA直接測(cè)序法檢測(cè)腸鏡活檢標(biāo)本KRAS G12D和BRAF V600E突變的差異。方法:在腸鏡下,采用活檢鉗收集遠(yuǎn)端結(jié)直腸腺瘤(腺瘤組,n=32)和腺癌(腺癌組,n=20)病變組織;抽提病變組織基因組DNA;并采用DNA直接測(cè)序法測(cè)定病變組織DNA的KRAS和BRAF基因序列。同時(shí),使用Cast PCR法檢測(cè)KRAS G12D和BRAF V600E突變情況。結(jié)果:1、采用DNA直接測(cè)序法在32例腺瘤組患者中,KRAS基因突變7例,突變率21.9%;20例腺癌組患者中,KRAS基因突變7例,突變率35%。兩組患者KRAS基因第12密碼子和第13密碼子較常見(jiàn)突變類(lèi)型均為G12D和G13D。統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果顯示腺瘤組和腺癌組KRAS基因陽(yáng)性突變率無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而且兩組患者KRAS基因陽(yáng)性突變率與性別、腺瘤分化程度、腺癌分化類(lèi)型之間均無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。兩組患者均未見(jiàn)BRAF V600E突變。2、結(jié)直腸腺瘤組Cast PCR法檢測(cè)KRAS G12D突變率28.1%,比DNA直接測(cè)序法高12.5%;結(jié)直腸癌組Cast PCR法檢測(cè)KRAS G12D突變率30%,比DNA直接測(cè)序法高15%。兩種方法陰性符合率100%。Mutation Detector分析結(jié)果顯示Cast PCR法能夠檢測(cè)出突變量1%的突變。從檢測(cè)突變率分析,兩種方法無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),結(jié)直腸腺瘤組總體符合率87.5%(Kappa值0.6429),結(jié)直腸癌組總體符合率85%(Kappa值0.5833)。兩組患者均未見(jiàn)BRAF V600E突變。結(jié)論:1、遠(yuǎn)端結(jié)直腸腺瘤和腺癌中BRAF V600E突變率較西方國(guó)家低;KRAS基因突變率較BRAF V600E基因突變率高,與西方國(guó)家基本一致,提示檢測(cè)KRAS基因突變?cè)谥笇?dǎo)結(jié)直腸癌用藥中的臨床價(jià)值可能更大,可在野生型KRAS基因型結(jié)直腸癌抗EGFR單克隆抗體耐藥的基礎(chǔ)上進(jìn)一步檢測(cè)BRAF基因突變情況。2、Cast PCR法靈敏度高達(dá)0.1%,能夠高效的檢測(cè)腸鏡活檢標(biāo)本中低突變量的KRAS G12D,而且操作簡(jiǎn)單、耗時(shí)短、可重復(fù)性強(qiáng),比DNA直接測(cè)序法臨床實(shí)用價(jià)值可能更高。
[Abstract]:Objective: to study the characteristics of KRAS and BRAF gene mutations in distal colorectal adenoma and adenocarcinoma, and to explore the clinical value of molecular diagnosis in guiding drug use of colorectal cancer. At the same time, the differences of KRAS G12D and BRAF V600E mutations between Cast PCR method and DNA direct sequencing method were analyzed. The lesions of distal colorectal adenoma (adenoma group) and adenocarcinoma (adenocarcinoma group) were collected by biopsy forceps. Genomic DNA was extracted from diseased tissues. The KRAS and BRAF gene sequences of DNA were determined by DNA direct sequencing. The mutation of KRAS G12D and BRAF V600E was detected by Cast PCR method. Results: 1. DNA direct sequencing was used in 32 patients with adenoma. There were 7 cases of KRAS gene mutation, the mutation rate was 21. 9%. There were 7 cases of KRAS gene mutation in 20 patients with adenocarcinoma. G12D and G13D were the most common mutations in codon 12 and codon 13 of KRAS gene in both groups. Statistical results showed that KRAS gene was positive in adenoma group and adenocarcinoma group. There was no significant difference in the rate of sexual mutation (. P0.05). Moreover, there was no significant difference between the two groups in KRAS gene mutation rate and sex, adenoma differentiation, adenocarcinoma differentiation type. There was no significant difference in BRAF V600E mutation between the two groups. The mutation rate of KRAS G12D was detected by Cast PCR in colorectal adenoma group, which was higher than that by DNA direct sequencing method. The mutation rate of KRAS G12D was detected by Cast PCR method in colorectal cancer group (30%%). The negative coincidence rate of the two methods was 100% higher than that of DNA direct sequencing. The results of Detector analysis showed that Cast. PCR method can detect 1% mutation. There was no significant difference between the two methods (P 0.05). The overall coincidence rate of colorectal adenoma group was 87.5% and the Kappa value was 0.6429). There was no BRAF V600E mutation in both groups. Conclusion: 1. The mutation rate of BRAF V600E in distal colorectal adenoma and adenocarcinoma was lower than that in western countries. The mutation rate of KRAS gene is higher than that of BRAF V600E gene, which is consistent with that of western countries, suggesting that detection of KRAS gene mutation may be of more clinical value in guiding drug use in colorectal cancer. The sensitivity of BRAF gene mutation. 2Cast PCR assay can be as high as 0.1% on the basis of the resistance to EGFR monoclonal antibody of wild-type KRAS genotype colorectal cancer. KRAS G12D, which can be used to detect the low mutation quantity of enteroscopy biopsy samples, is simple, time consuming and reproducible, which may be more valuable than DNA direct sequencing method in clinical practice.
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R735.34

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