本文關(guān)鍵詞：全人源抗Her2單克隆抗體的制備及其在乳腺癌細(xì)胞熒光標(biāo)記中的應(yīng)用　出處：《吉林大學(xué)》2016年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：熒光單分子腫瘤標(biāo)記技術(shù)主要針對(duì)腫瘤細(xì)胞的特定靶點(diǎn),利用高特異性的抗體分子與非生物毒性的熒光聚合物量子點(diǎn)相偶聯(lián),組裝成具有特異性靶向特定腫瘤細(xì)胞的免疫熒光標(biāo)記物�？梢约皶r(shí)、準(zhǔn)確的發(fā)現(xiàn)腫瘤,確定相關(guān)靶點(diǎn)的有效性。單分子腫瘤標(biāo)記已經(jīng)成為了繼分子靶向藥物后的另一研究熱點(diǎn)。人表皮生長因子受體2(human epidermal growth factor receptor2,Her2)是表皮生長因子受體家族的一員,研究表明其過表達(dá)會(huì)影響細(xì)胞生長、發(fā)育和分化,對(duì)多種腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)增和轉(zhuǎn)化起到關(guān)鍵作用。尤其在乳腺癌中,超過1/3的患者過表達(dá)Her2,因此,Her2是乳腺癌診斷和治療的一個(gè)重要靶點(diǎn)。目前,針對(duì)Her2開發(fā)出來的單克隆抗體已經(jīng)在乳腺癌疾病的診斷和治療中發(fā)揮了重要作用,但在臨床腫瘤標(biāo)記研究中多使用鼠源抗體或人源化抗體,這類抗體在人體內(nèi)依然存在著人抗鼠抗體反應(yīng)(HAMA)的風(fēng)險(xiǎn)。利用抗體工程技術(shù)開發(fā)高親和性的全人源單克隆抗體,將會(huì)克服這方面的問題。本研究以Her2作為靶點(diǎn),從大容量噬菌體展示全人源Fab抗體庫中,利用固定偶聯(lián)的Her2抗原,經(jīng)過4輪篩選,獲得一株有高抗原結(jié)合能力的噬菌體克隆。經(jīng)表達(dá)得到Fab和Ig G1抗體蛋白,ELISA分析發(fā)現(xiàn)這兩種抗體可以特異結(jié)合Her2蛋白。SPR實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,這兩種抗體對(duì)Her2抗原的親和力分別為15n M和1.01n M,表明該抗體具有高抗原親和力。流式細(xì)胞技術(shù)分析也證明抗體可以特異性的識(shí)別高表達(dá)Her2乳腺癌細(xì)胞SK-BR3(Her2+),而不結(jié)合MCF-7細(xì)胞(Her2-)。通過對(duì)該Ig G1抗體進(jìn)行疊氮標(biāo)記修飾,與一個(gè)新型高穩(wěn)定性熒光聚合物量子點(diǎn)(Pdots)上的DBCO官能團(tuán)進(jìn)行點(diǎn)擊化學(xué)連接,制備出可以特異性靶向結(jié)合乳腺癌細(xì)胞的免疫熒光標(biāo)記物,并利用共聚焦顯微技術(shù)針對(duì)SK-BR3乳腺癌細(xì)胞進(jìn)行單分子乳腺癌細(xì)胞標(biāo)記學(xué)研究,發(fā)現(xiàn)其可以特異性的識(shí)別SK-BR3,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記。綜上所述,本論文篩選得到一株高親和性識(shí)別人Her2的全人源單克隆抗體,可以特異性的識(shí)別Her2+乳腺癌細(xì)胞,此抗體與Pdots偶聯(lián)之后,可以特異性結(jié)合乳腺癌細(xì)胞并實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞的熒光標(biāo)記。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.9

【參考文獻(xiàn)】

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1 劉婕;陳俊亨;徐天殊;王麗萍;趙琦;;大容量人源Fab噬菌體展示抗體庫的構(gòu)建及抗CD276抗體篩選[J];中國醫(yī)藥生物技術(shù);2014年04期

2 方亞;胡海蘭;;女性乳腺癌危險(xiǎn)因素及其變化[J];中國衛(wèi)生統(tǒng)計(jì);2009年03期

3 秦麗莉;張春明;;單鏈抗體研究進(jìn)展及其在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用[J];國外醫(yī)學(xué)(放射醫(yī)學(xué)核醫(yī)學(xué)分冊(cè));2005年06期

4 譚文慶;單鏈抗體的研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(放射醫(yī)學(xué)核醫(yī)學(xué)分冊(cè));2001年02期

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本文編號(hào)：1330307