本文關(guān)鍵詞：FANCD2 shRNA干擾對(duì)頭頸鱗癌頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移細(xì)胞HSC-4放療敏感性的影響和機(jī)制研究

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【摘要】：目的:頭頸部鱗狀細(xì)胞癌(Head and Neck Squamous Cell Carcinoma,HNSCC)是臨床上常見的惡性腫瘤。HNSCC特別是鼻咽癌(Nasopharyngeal Carcinoma,NPC)98%屬于低分化鱗狀細(xì)胞癌,首選放射治療。然而,對(duì)于局部復(fù)發(fā),遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和初次治療失敗的患者單純放療療效較差,特異性高、靶向性強(qiáng)的放療增敏技術(shù)及方法急需研發(fā)。課題組前期實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證明FANCD2 shRNA干擾沉默F(xiàn)ANCD2基因表達(dá)后可通過影響HNSCC頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移細(xì)胞HSC-4的體外生長增殖、凋亡、細(xì)胞周期及相關(guān)蛋白的表達(dá)提高HSC-4細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性。但關(guān)于FANCD2基因是否參與了HNSCC頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移細(xì)胞HSC-4對(duì)放射治療敏感性的調(diào)控尚不得而知。本研究以FANCD2 shRNA干擾獲得的FANCD2穩(wěn)定沉默HNSCC頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移細(xì)胞HSC-4為研究對(duì)象,研究HSC-4細(xì)胞放療后細(xì)胞體外增殖抑制效應(yīng)、凋亡率、細(xì)胞周期分布、存活率及相關(guān)蛋白表達(dá)的變化,探討沉默F(xiàn)ANCD2對(duì)HSC-4細(xì)胞放療敏感性的影響及可能機(jī)制。方法:以前期實(shí)驗(yàn)獲得FANCD2沉默效應(yīng)穩(wěn)定的HNSCC頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移細(xì)胞HSC-4為研究對(duì)象,將實(shí)驗(yàn)細(xì)胞分為三組,實(shí)驗(yàn)組:FANCD2-shRNA(轉(zhuǎn)染含F(xiàn)ANCD2有效干擾序列且FANCD2沉默效應(yīng)穩(wěn)定的HSC-4細(xì)胞),空白對(duì)照組:HSC-4(未經(jīng)轉(zhuǎn)染的HSC-4細(xì)胞),陰性對(duì)照組:FANCD2-shRNA-C(轉(zhuǎn)染FANCD2無效干擾序列的HSC-4細(xì)胞)。三組細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng),陰性對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)過程中以嘌呤霉素篩選。通過細(xì)胞增殖抑制試驗(yàn)(cellcountingkit-8,cck-8)檢測(cè)三組hsc-4細(xì)胞在不同劑量及不同作用時(shí)間鈷60照射后生長增殖的情況,流式細(xì)胞術(shù)(annexinv-fitc/pi染色法)測(cè)定三組hsc-4細(xì)胞鈷60照射后凋亡率和細(xì)胞周期改變,克隆形成法檢測(cè)三組hsc-4細(xì)胞放療后的存活率,以研究fancd2shrna干擾對(duì)hsc-4細(xì)胞放療敏感性的影響;通過westernblot法檢測(cè)fancd2shrna干擾以及放療后bax、bcl-2、p-38和p-p-38蛋白表達(dá)的變化,探討fancd2與bax、bcl-2、p-38和p-p-38蛋白表達(dá)的關(guān)系,研究fnacd2shrna干擾影響hsc-4細(xì)胞放療敏感性的可能機(jī)制。結(jié)果:(1)cck-8檢測(cè)結(jié)果顯示隨著放療劑量加大三組細(xì)胞增殖抑制率均提高,且實(shí)驗(yàn)組在各劑量照射后的增殖抑制效應(yīng)均強(qiáng)于對(duì)照組(p0.05),其中在放療劑量增加至8gy時(shí)實(shí)驗(yàn)組吸光度值(od)(0.256±0.027)明顯低于陰性對(duì)照組(0.362±0.008)和空白對(duì)照組(0.382±0.0213),增殖抑制作用最強(qiáng),組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(f=103.835,p0.05);照射劑量為5gy作用24、48、72小時(shí)后,三組細(xì)胞增殖水平均隨時(shí)間延長而降低,照射后24、48、72小時(shí)各細(xì)胞組間od值差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,統(tǒng)計(jì)值分別為(f=6.307,p0.05)、(f=9.007,p0.05)和(f=22.914,p0.05),且實(shí)驗(yàn)組增殖抑制效應(yīng)較對(duì)照組更強(qiáng);(2)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示8gy放射治療后細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)48小時(shí),實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡率(34.074±0.061)%明顯高于陰性對(duì)照組(5.926±0.038)%和空白對(duì)照組(14.241±0.047)%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(f=261.786,p0.05),即說明shrna干擾沉默fnacd2后hsc-4細(xì)胞由放療誘導(dǎo)的凋亡率增加;(3)shrna干擾沉默fancd2后,三組細(xì)胞放射治療后48小時(shí)實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞周期變化為進(jìn)入s期比例增加(f=160.778,p0.05),進(jìn)入g0/g1期細(xì)胞減少(f=224.974,p0.05),g2/m期比例無明顯差異(f=2.664,p0.05),與陰性對(duì)照組及空白對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。(4)克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示隨著放療劑量加大,各組細(xì)胞存活率均降低且各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),放療劑量增加至8gy時(shí)shrna干擾組細(xì)胞存活率(0.007±0.021)較空白對(duì)照組(0.039±0.013)和陰性對(duì)照組(0.037±0.016)明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(f=10.671,p0.05)。(5)westernblot結(jié)果表明shrna干擾沉默fancd2表達(dá)后,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞bax(f=931.591,p0.05)和p-p38(f=685.425,p0.05)蛋白表達(dá)較對(duì)照組增強(qiáng),p-38(f=1954.140,p0.05)和bcl-2(f=3219.791,p0.05)蛋白表達(dá)降低;各組細(xì)胞放射治療后,實(shí)驗(yàn)組bax(f=429.591,p0.05)和p-p38(f=214.974,p0.05)蛋白表達(dá)較對(duì)照組增強(qiáng),p-38(f=1027.974,p0.05)和bcl-2(f=285.974,p0.05)蛋白表達(dá)較對(duì)照組降低。結(jié)論:(1)fancd2shrna干擾能提高人hnscc頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移hsc-4細(xì)胞放療后的增殖抑制效應(yīng),促進(jìn)細(xì)胞由放療誘導(dǎo)的凋亡,導(dǎo)致細(xì)胞周期阻滯,降低細(xì)胞存活率,即shrna干擾沉默fancd2表達(dá)能提高人hnscc頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移細(xì)胞hsc-4對(duì)放射治療的敏感性;(2)fancd2基因沉默可能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡相關(guān)通路bax/bcl-2蛋白的表達(dá),促進(jìn)hsc-4細(xì)胞放療誘導(dǎo)的凋亡,并通過激活p-38mapk通路,導(dǎo)致p-p-38蛋白表達(dá)增強(qiáng),共同參與hsc-4細(xì)胞放射治療后細(xì)胞增殖,凋亡、細(xì)胞周期分布的調(diào)控從而提高人hnscc頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移細(xì)胞hsc-4對(duì)放射治療的敏感性。(3)沉默fancd2表達(dá)有望為hnscc尤其是晚期發(fā)生頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的治療帶來希望,同時(shí)為HNSCC患者的靶向治療提供新的思路。
【學(xué)位授予單位】：四川醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R739.91

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1 張玉勤;;細(xì)胞分化再活化治療腫瘤[J];國外醫(yī)學(xué)情報(bào);1991年01期

2 David　Tenenbaum,饒新華;細(xì)胞之源[J];世界科學(xué);2000年11期

3 閆貴新;干細(xì)胞研究的重大進(jìn)展[J];畜牧獸醫(yī)科技信息;2000年11期

4 趙志力;付小兵;;正常與異常的細(xì)胞分化[J];感染.炎癥.修復(fù);2001年03期

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6 趙志力;修復(fù)細(xì)胞分化的調(diào)控機(jī)制與鑒別[J];中國危重病急救醫(yī)學(xué);2002年02期

7 趙志力;付小兵;;不同發(fā)育階段細(xì)胞的分化與調(diào)控機(jī)制[J];感染.炎癥.修復(fù);2002年01期

8 戴新貴;姚詠明;艾宇航;;輔助性T細(xì)胞17的研究進(jìn)展[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2008年04期

9 ;細(xì)胞分化:一個(gè)兩階段的過程[J];中華婦幼臨床醫(yī)學(xué)雜志;2009年02期

10 黃紹勤;曹惠珍;;生命的基本單位——細(xì)胞[J];廣醫(yī)通訊;1980年03期

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1 徐志彥;;《細(xì)胞分化》教學(xué)案例(教學(xué)內(nèi)容安排1課時(shí))[A];河北省教師教育學(xué)會(huì)第二屆中小學(xué)教師教學(xué)案例展論文集[C];2013年

2 尹青;張雷;李莉;謝丹丹;龔淼;;體外心肌樣環(huán)境對(duì)P19細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化的誘導(dǎo)作用[A];中國解剖學(xué)會(huì)2012年年會(huì)論文文摘匯編[C];2012年

3 丁建東;;圖案化表面與干細(xì)胞分化[A];2013年全國高分子學(xué)術(shù)論文報(bào)告會(huì)論文摘要集——大會(huì)邀請(qǐng)報(bào)告[C];2013年

4 陳思;黃欣;陳少華;楊力建;鄭海濤;李揚(yáng)秋;;BCL11B基因在T細(xì)胞分化和增殖中調(diào)節(jié)作用的研究[A];中國病理生理學(xué)會(huì)第九屆全國代表大會(huì)及學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2010年

5 江鍵;崔黎麗;宋誠榮;王小平;宋茂海;;負(fù)極性駐極體誘導(dǎo)3T3細(xì)胞表面電荷和游離鈣濃度的變化[A];第四屆中國功能材料及其應(yīng)用學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2001年

6 梁冀;于會(huì)梅;傅繼東;郭昂;楊黃恬;;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣離子釋放受體對(duì)干細(xì)胞分化的調(diào)控[A];中國病理生理學(xué)會(huì)受體、腫瘤和免疫專業(yè)委員會(huì)聯(lián)合學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

7 羅家江;;TH17細(xì)胞的研究進(jìn)展[A];全國中西醫(yī)結(jié)合血液學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

8 項(xiàng)盈;金潔;沈丹;鄭強(qiáng);謝純剛;賈冰冰;黃國平;王金福;;復(fù)蘇的人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及向多系細(xì)胞分化的誘導(dǎo)[A];第10屆全國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要匯編[C];2005年

9 汪洋;朱椰凡;余華軍;符竣惠;徐啟綱;曾其強(qiáng);吳建波;張啟瑜;;三種全肝臟去細(xì)胞化流程對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)的影響及細(xì)胞組分殘留量的研究[A];2013年浙江省外科學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2013年

10 常平安;陳瑞;李薇;伍一軍;;神經(jīng)病靶標(biāo)酯酶的增強(qiáng)表達(dá)抑制哺乳動(dòng)物細(xì)胞的增殖[A];中國環(huán)境誘變劑學(xué)會(huì)抗誘變劑和抗癌劑專業(yè)委員會(huì)第三次全國學(xué)術(shù)會(huì)議、中國毒理學(xué)會(huì)生化與分子毒理專業(yè)委員會(huì)第五屆學(xué)術(shù)交流會(huì)、貴州省環(huán)境誘變劑學(xué)會(huì)成立大會(huì)暨首屆學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2004年

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1 徐榮祥;人類生命細(xì)胞 再生物質(zhì)的發(fā)現(xiàn)與研究[N];健康報(bào);2007年

2 張佳星;干細(xì)胞分化路徑存在差異性[N];中國礦業(yè)報(bào);2008年

3 史軍;剝開黏合的細(xì)胞之書[N];健康報(bào);2012年

4 常麗君;美生物學(xué)家打造出“細(xì)胞黑客”[N];科技日?qǐng)?bào);2010年

5 張佳星;分化之路 殊途同歸[N];科技日?qǐng)?bào);2008年

6 記者 施嘉奇　通訊員 王姿英;探索中藥對(duì)干細(xì)胞分化的作用[N];文匯報(bào);2009年

7 記者陳超;日開發(fā)細(xì)胞間隔離培養(yǎng)技術(shù)[N];科技日?qǐng)?bào);2003年

8 陳超;科學(xué)家發(fā)現(xiàn)引發(fā)細(xì)胞分化的分子通道[N];科技日?qǐng)?bào);2010年

9 記者 白毅;我國科學(xué)家用iPS細(xì)胞首獲克隆豬[N];中國醫(yī)藥報(bào);2013年

10 記者 錢錚;日本用人類iPS細(xì)胞首次制成血小板[N];新華每日電訊;2009年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 唐紹燦;IL-27、Th1及Th17細(xì)胞在MS中的表達(dá)及其作用機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

2 常凱凱;子宮內(nèi)膜異位灶微環(huán)境IL-10~+Th17細(xì)胞的形成及作用機(jī)制[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

3 高華嵩;細(xì)胞重編程技術(shù)和移植治療視神經(jīng)損傷的實(shí)驗(yàn)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

4 李艷明;Hsa-miR-200a調(diào)控紅細(xì)胞分化的功能及分子機(jī)制研究[D];中國科學(xué)院北京基因組研究所;2015年

5 張林;C-反應(yīng)蛋白通過對(duì)T細(xì)胞分化的直接調(diào)控參與后天免疫應(yīng)答[D];蘭州大學(xué);2015年

6 蔣云秋;樹突狀細(xì)胞Notch信號(hào)在1，，25-二羥維生素D3調(diào)節(jié)Th17分化中的作用研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

7 史莉瑾;急性腦出血患者外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與腦相關(guān)抗原的特征及其相關(guān)性研究[D];鄭州大學(xué);2015年

8 王玲玲;重組家蠶素Ⅱ?qū)Σ溉榧?xì)胞胰島素樣作用及其機(jī)制的體外研究[D];吉林大學(xué);2012年

9 仇子龍;細(xì)胞分裂與細(xì)胞分化的關(guān)系及分化表達(dá)基因的染色體定位分析[D];中國科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院）;2003年

10 王小平;天然抗癌藥物誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡及細(xì)胞表面受體識(shí)別的可視化研究[D];暨南大學(xué);2008年

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1 丁佳敏;芪藍(lán)制劑對(duì)人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞的抗增殖和促凋亡作用的機(jī)制研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 張卓亞;間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)B6.MRL-Fas~(lpr)小鼠濾泡輔助T細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用及機(jī)制研究[D];南京大學(xué);2015年

3 周明;As_2O_3聯(lián)合γ分泌酶抑制劑影響肝癌HepG_2細(xì)胞耐藥性的研究[D];石河子大學(xué);2015年

4 劉冰慧;凋亡細(xì)胞對(duì)巨噬細(xì)胞IL-12家族細(xì)胞因子調(diào)控的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

5 韓青青;Th22細(xì)胞及其效應(yīng)因子IL-22與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎及合并間質(zhì)性肺病相關(guān)性的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

6 張騰飛;吉西他濱與AMD3100聯(lián)合應(yīng)用于膽管癌RBE細(xì)胞株對(duì)CXCR4/CXCL12軸的作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

7 王們X ;EAAL細(xì)胞聯(lián)合全反式維甲酸對(duì)人肺腺癌細(xì)胞株A549體內(nèi)外作用的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

8 李超楠;兩種典型OPFRs對(duì)PC12細(xì)胞的神經(jīng)毒性及其機(jī)制探究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2015年

9 楊明;促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子1型受體經(jīng)cAMP/PKA信號(hào)通路對(duì)U87MG細(xì)胞凋亡機(jī)制的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

10 李廣康;RNAi沉默Rap2B基因?qū)盒赞D(zhuǎn)化BEAS-2B細(xì)胞的作用[D];鄭州大學(xué);2015年

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