發(fā)布時(shí)間：2017-12-15 13:14

  本文關(guān)鍵詞：HORMAD2在胃癌中的表達(dá)及對(duì)胃癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響

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【摘要】：目的：實(shí)驗(yàn)室前期工作已證實(shí)miR-133b在胃癌組織中下調(diào),且初步驗(yàn)證了HORMAD2可能是miR-133b的靶基因。本課題探討人胃癌組織及胃癌細(xì)胞系中HORMAD2的表達(dá)；研究下調(diào)HORMAD2對(duì)正常胃粘膜上皮細(xì)胞GES-1和胃癌細(xì)胞株SGC-7901、AGS、MGC-803和BGC-823增殖、凋亡以及細(xì)胞周期的影響。方法：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)54對(duì)人胃癌組織及癌旁組織(距離病灶5cm之外的組織)中HORMAD2的表達(dá)水平。培養(yǎng)正常胃粘膜上皮細(xì)胞GES-1以及胃癌細(xì)胞株SGC-7901、AGS、MGC-803和BGC-823,通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR和蛋白質(zhì)印跡法(western blot)檢測(cè)正常胃粘膜上皮細(xì)胞GES-1和分化程度不同的胃癌細(xì)胞中HORMAD2的相對(duì)表達(dá)水平。然后用針對(duì)HORMAD2合成的特異性的siRNA對(duì)細(xì)胞株GES-1和MGC-803、SGC-7901、BGC-823及AGS通過(guò)脂質(zhì)體進(jìn)行瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,并使用帶有綠色熒光蛋白的siRNA檢測(cè)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染細(xì)胞的有效性。轉(zhuǎn)染48 h和72h后,分別在mRNA和蛋白水平通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR及western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞株HORMAD2的表達(dá)情況。使用CCK-8檢測(cè)下調(diào)HORMAD2對(duì)正常胃粘膜上皮細(xì)胞GES-1和胃癌細(xì)胞株SGC-7901、 AGS、MGC-803和BGC-823增殖能力的影響。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞通過(guò)siRNA轉(zhuǎn)染48h后的細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡率。結(jié)果：實(shí)時(shí)熒光定量PCR得到HORMAD2在胃癌組織中的表達(dá)量高于癌旁組織(P0.05)；但HORMAD2的表達(dá)與患者的年齡、性別、腫瘤的分化程度、浸潤(rùn)深度以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移并沒(méi)有相關(guān)性(P0.05)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR和western blot結(jié)果表明HORMAD2在未分化的胃癌細(xì)胞株MGC-803中的表達(dá)水平比正常胃粘膜上皮細(xì)胞GES-1和其他分化類型的胃癌細(xì)胞株(SGC-7901、AGS和BGC-823)明顯增高(P0.05),而細(xì)胞株SGC-7901和AGS與GES-1相比HORMAD2的表達(dá)水平降低(P0.05)。siRNA轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞株和GES-1后,與對(duì)照組(siRNA_NC)相比,HORMAD2在mRNA和蛋白水平的表達(dá)明顯下調(diào)(P0.05),轉(zhuǎn)染有效。CCK-8檢測(cè)到HORMAD2表達(dá)下調(diào)后正常胃粘膜上皮細(xì)胞GES-1及胃癌細(xì)胞SGC-7901、AGS、MGC-803和BGC-823的增殖活性均受到抑制(P0.05)。而且,下調(diào)HORMAD2的表達(dá)后GES-1及胃癌細(xì)胞株SGC-7901、 AGS、MGC-803和BGC-823的細(xì)胞凋亡率明顯增高,這種效應(yīng)尤其在高表達(dá)HORMAD2的MGC-803細(xì)胞中尤為明顯；同時(shí)下調(diào)HORMAD2使得細(xì)胞周期阻滯在了S期,G2/M期停滯。結(jié)論：CT基因HORMAD2作為一種潛在的癌基因可能參與了胃癌的發(fā)生發(fā)展。
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.2

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本文編號(hào)：1292081