本文關(guān)鍵詞：胃癌組織中人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶與Gli1、Gli2表達(dá)的相關(guān)性及分子機(jī)制研究

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【摘要】：【研究背景和目的】胃癌是我國(guó)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,其早期診斷困難,一旦確診,多為中晚期患者。盡管胃癌的診斷和治療取得了較大進(jìn)展,但其死亡率仍居高不下,五年生存率仍無(wú)明顯改善。侵襲和轉(zhuǎn)移是胃癌患者預(yù)后差的主要原因,甚至一些早期胃癌都可以發(fā)生鄰近組織或遠(yuǎn)處組織的轉(zhuǎn)移。因此,探索胃癌侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制,對(duì)胃癌的治療具有重要的臨床意義。人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(human telomerase reverse enzyme,h TERT)是端粒酶的一個(gè)亞單位,其表達(dá)直接決定了端粒酶的活性。過(guò)去有關(guān)h TERT的研究大多集中在延長(zhǎng)和維持端粒長(zhǎng)度以及促進(jìn)細(xì)胞增殖等功能上,而少有文獻(xiàn)報(bào)道其與細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系。課題組前期的研究發(fā)現(xiàn),抑制胃癌端粒酶活性可以明顯降低胃癌細(xì)胞的體外侵襲能力;而在端粒酶陰性的U2OS骨肉瘤細(xì)胞中過(guò)表達(dá)hTERT,可以促進(jìn)該細(xì)胞的體內(nèi)外侵襲及轉(zhuǎn)移能力。Meta分析表明,端粒酶及其hTERT亞單位的活化與胃癌患者的淋巴結(jié)遷移以及遠(yuǎn)處遷移密切相關(guān)。以上研究提示,端粒酶及其h TERT亞單位的異�；罨c胃癌的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。但h TERT參與調(diào)控胃癌侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制并不十分清楚。Wnt信號(hào)通路在胃癌的侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中具有重要作用。有研究表明,在胃癌細(xì)胞中,h TERT能夠與β-catenin相互作用,促進(jìn)其入核并增強(qiáng)其轉(zhuǎn)錄活性,從而活化經(jīng)典Wnt信號(hào)通路,促進(jìn)胃癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移。然而本課題組研究發(fā)現(xiàn),在Wnt信號(hào)不活化的HCT116結(jié)腸癌細(xì)胞中過(guò)表達(dá)h TERT,仍能增強(qiáng)其侵襲轉(zhuǎn)移的能力,提示h TERT還有可能通過(guò)其他途徑促進(jìn)胃瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程。Hedgehog(Hh)信號(hào)通路在胚胎發(fā)育、組織分化、維持組織穩(wěn)態(tài)有著重要作用,當(dāng)它被異�；罨瘯r(shí),參與了腫瘤的發(fā)生發(fā)展全過(guò)程。經(jīng)典的Hh信號(hào)通路主要由配體Hedgehog、跨膜蛋白受體Patched(Ptch)和Smoothened(Smo)以及轉(zhuǎn)錄因子Gli家族構(gòu)成。Gli家族是Hh信號(hào)通路的核心,Gli的激活將導(dǎo)致其下游一系列分子的轉(zhuǎn)錄,進(jìn)而完成Hh信號(hào)通路對(duì)生命的各個(gè)進(jìn)程的調(diào)控作用。有研究表明,Hh信號(hào)通路的活化參與了包括胃癌在內(nèi)的多種腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移過(guò)程。關(guān)于Hh/Gli信號(hào)通路是否也參與了htert對(duì)胃癌侵襲轉(zhuǎn)移的調(diào)控及其分子機(jī)制,目前尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道。因此,本課題擬從胃癌臨床標(biāo)本入手,研究胃癌組織中htert、gli1、gli2表達(dá)以及與胃癌患者臨床病理之間的關(guān)系,并探討htert與gli1和gli2是否存在相互關(guān)聯(lián);然后進(jìn)一步從細(xì)胞學(xué)水平研究htert轉(zhuǎn)染是否可能促進(jìn)gli1和gli2的表達(dá),在胃癌的侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用,為基于htert的胃癌治療提供理論依據(jù)。【研究方法】第一部分:胃癌組織中人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶與gli1、gli2表達(dá)相關(guān)性的研究1.采用免疫組化方法檢測(cè)72例胃癌患者的胃癌及其癌旁組織中htert、gli1、gli2的表達(dá);2.根據(jù)72例胃癌標(biāo)本中htert和gli1、gli2表達(dá),分別統(tǒng)計(jì)分析htert和gli1、htert與gli2之間的關(guān)系;3.根據(jù)72例胃癌標(biāo)本中htert和gli1、gli2表達(dá),分別統(tǒng)計(jì)分析三者與胃癌患者臨床病理之間的關(guān)系;4.根據(jù)72例胃癌標(biāo)本中htert和gli1、gli2表達(dá),分別統(tǒng)計(jì)分析三者與胃癌患者預(yù)后之間的關(guān)系。第二部分:htert促進(jìn)胃癌gli1表達(dá)的分子機(jī)制研究1.采用western-blot檢測(cè)7株胃癌細(xì)胞中htert、gli1的基礎(chǔ)表達(dá);2.采用實(shí)時(shí)熒光pcr檢測(cè)bgc-823、sgc-7901轉(zhuǎn)染htert24小時(shí)后gli1mrna的表達(dá)情況;3.采用western-blot檢測(cè)bgc-823、sgc-7901轉(zhuǎn)染htert24小時(shí)后gli1蛋白表達(dá)情況。【研究結(jié)果】第一部分:胃癌組織中人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶與gli1、gli2表達(dá)相關(guān)性的研究1.免疫組化結(jié)果表明,htert、gli1、gli2三者在胃癌組織中的表達(dá)較癌旁組織均明顯升高(p0.01);2.72例胃癌相關(guān)性分析得到htert與gli1,htert與gli2之間均存在正相關(guān)性,其相關(guān)系數(shù)分別為r=0.502(p0.01)、r=0.6246(p0.01);3.72例胃癌htert、gli1、gli2高表達(dá)均與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(p0.05),且gli1高表達(dá)還與胃癌患者遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)(p0.05);4.h TERT、Gli1均高表達(dá)組和hTERT、Gli2均高表達(dá)組預(yù)后較差(p0.05、p0.05),三者均高表達(dá)組預(yù)后最差(p0.01)。第二部分:hTERT促進(jìn)胃癌Gli1表達(dá)的分子機(jī)制研究1.Western-blot篩選出h TERT表達(dá)量相對(duì)較低的細(xì)胞系,即BGC-823、SGC-7901;2.BGC-823、SGC-7901轉(zhuǎn)染了hTERT質(zhì)粒24小時(shí)后,實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)得到BGC-823、SGC-7901中Gli1 m RNA水平升高;3.BGC-823、SGC-7901轉(zhuǎn)染了h TERT質(zhì)粒24小時(shí)后,western-blot檢測(cè)得到BGC-823、SGC-7901中Gli1蛋白水平升高�！狙芯拷Y(jié)論】1.臨床研究提示,hTERT和Gli1、Gli2在胃癌中均高表達(dá)且具有正相關(guān)性,三者高表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均相關(guān),h TERT、Gli1均高表達(dá)組和h TERT、Gli2均高表達(dá)組預(yù)后較差,三者均高表達(dá)組預(yù)后最差;2.體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)過(guò)表達(dá)h TERT后,可明顯上調(diào)胃癌細(xì)胞Gli1的m RNA和蛋白表達(dá)水平,從而促進(jìn)胃癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程。綜上,胃癌中h TERT還有可能通過(guò)促進(jìn)Gli1的表達(dá),活化Hh信號(hào)通路,從而促進(jìn)胃癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程。
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.2

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 Alexander E Sherman;Yana Zavros;;Role of Sonic Hedgehog signaling during progression from inflammation to cancer in the stomach[J];World Journal of Gastrointestinal Pathophysiology;2011年06期

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本文編號(hào)：1284062