本文關鍵詞：胃癌組織中人端粒酶逆轉錄酶與Gli1、Gli2表達的相關性及分子機制研究

  更多相關文章： 人端粒酶逆轉錄酶 Gli1 Gli2 胃癌

【摘要】：【研究背景和目的】胃癌是我國最常見的惡性腫瘤之一,其早期診斷困難,一旦確診,多為中晚期患者。盡管胃癌的診斷和治療取得了較大進展,但其死亡率仍居高不下,五年生存率仍無明顯改善。侵襲和轉移是胃癌患者預后差的主要原因,甚至一些早期胃癌都可以發(fā)生鄰近組織或遠處組織的轉移。因此,探索胃癌侵襲轉移的分子機制,對胃癌的治療具有重要的臨床意義。人端粒酶逆轉錄酶(human telomerase reverse enzyme,h TERT)是端粒酶的一個亞單位,其表達直接決定了端粒酶的活性。過去有關h TERT的研究大多集中在延長和維持端粒長度以及促進細胞增殖等功能上,而少有文獻報道其與細胞侵襲轉移的關系。課題組前期的研究發(fā)現(xiàn),抑制胃癌端粒酶活性可以明顯降低胃癌細胞的體外侵襲能力;而在端粒酶陰性的U2OS骨肉瘤細胞中過表達hTERT,可以促進該細胞的體內(nèi)外侵襲及轉移能力。Meta分析表明,端粒酶及其hTERT亞單位的活化與胃癌患者的淋巴結遷移以及遠處遷移密切相關。以上研究提示,端粒酶及其h TERT亞單位的異�；罨c胃癌的侵襲轉移密切相關。但h TERT參與調(diào)控胃癌侵襲轉移的機制并不十分清楚。Wnt信號通路在胃癌的侵襲轉移過程中具有重要作用。有研究表明,在胃癌細胞中,h TERT能夠與β-catenin相互作用,促進其入核并增強其轉錄活性,從而活化經(jīng)典Wnt信號通路,促進胃癌細胞的侵襲轉移。然而本課題組研究發(fā)現(xiàn),在Wnt信號不活化的HCT116結腸癌細胞中過表達h TERT,仍能增強其侵襲轉移的能力,提示h TERT還有可能通過其他途徑促進胃瘤細胞的侵襲轉移過程。Hedgehog(Hh)信號通路在胚胎發(fā)育、組織分化、維持組織穩(wěn)態(tài)有著重要作用,當它被異常活化時,參與了腫瘤的發(fā)生發(fā)展全過程。經(jīng)典的Hh信號通路主要由配體Hedgehog、跨膜蛋白受體Patched(Ptch)和Smoothened(Smo)以及轉錄因子Gli家族構成。Gli家族是Hh信號通路的核心,Gli的激活將導致其下游一系列分子的轉錄,進而完成Hh信號通路對生命的各個進程的調(diào)控作用。有研究表明,Hh信號通路的活化參與了包括胃癌在內(nèi)的多種腫瘤的侵襲、轉移過程。關于Hh/Gli信號通路是否也參與了htert對胃癌侵襲轉移的調(diào)控及其分子機制,目前尚無文獻報道。因此,本課題擬從胃癌臨床標本入手,研究胃癌組織中htert、gli1、gli2表達以及與胃癌患者臨床病理之間的關系,并探討htert與gli1和gli2是否存在相互關聯(lián);然后進一步從細胞學水平研究htert轉染是否可能促進gli1和gli2的表達,在胃癌的侵襲轉移中發(fā)揮作用,為基于htert的胃癌治療提供理論依據(jù)�！狙芯糠椒ā康谝徊糠�:胃癌組織中人端粒酶逆轉錄酶與gli1、gli2表達相關性的研究1.采用免疫組化方法檢測72例胃癌患者的胃癌及其癌旁組織中htert、gli1、gli2的表達;2.根據(jù)72例胃癌標本中htert和gli1、gli2表達,分別統(tǒng)計分析htert和gli1、htert與gli2之間的關系;3.根據(jù)72例胃癌標本中htert和gli1、gli2表達,分別統(tǒng)計分析三者與胃癌患者臨床病理之間的關系;4.根據(jù)72例胃癌標本中htert和gli1、gli2表達,分別統(tǒng)計分析三者與胃癌患者預后之間的關系。第二部分:htert促進胃癌gli1表達的分子機制研究1.采用western-blot檢測7株胃癌細胞中htert、gli1的基礎表達;2.采用實時熒光pcr檢測bgc-823、sgc-7901轉染htert24小時后gli1mrna的表達情況;3.采用western-blot檢測bgc-823、sgc-7901轉染htert24小時后gli1蛋白表達情況�！狙芯拷Y果】第一部分:胃癌組織中人端粒酶逆轉錄酶與gli1、gli2表達相關性的研究1.免疫組化結果表明,htert、gli1、gli2三者在胃癌組織中的表達較癌旁組織均明顯升高(p0.01);2.72例胃癌相關性分析得到htert與gli1,htert與gli2之間均存在正相關性,其相關系數(shù)分別為r=0.502(p0.01)、r=0.6246(p0.01);3.72例胃癌htert、gli1、gli2高表達均與淋巴結轉移密切相關(p0.05),且gli1高表達還與胃癌患者遠處轉移有關(p0.05);4.h TERT、Gli1均高表達組和hTERT、Gli2均高表達組預后較差(p0.05、p0.05),三者均高表達組預后最差(p0.01)。第二部分:hTERT促進胃癌Gli1表達的分子機制研究1.Western-blot篩選出h TERT表達量相對較低的細胞系,即BGC-823、SGC-7901;2.BGC-823、SGC-7901轉染了hTERT質(zhì)粒24小時后,實時熒光PCR檢測得到BGC-823、SGC-7901中Gli1 m RNA水平升高;3.BGC-823、SGC-7901轉染了h TERT質(zhì)粒24小時后,western-blot檢測得到BGC-823、SGC-7901中Gli1蛋白水平升高�！狙芯拷Y論】1.臨床研究提示,hTERT和Gli1、Gli2在胃癌中均高表達且具有正相關性,三者高表達與淋巴結轉移均相關,h TERT、Gli1均高表達組和h TERT、Gli2均高表達組預后較差,三者均高表達組預后最差;2.體外實驗證實過表達h TERT后,可明顯上調(diào)胃癌細胞Gli1的m RNA和蛋白表達水平,從而促進胃癌細胞的侵襲轉移過程。綜上,胃癌中h TERT還有可能通過促進Gli1的表達,活化Hh信號通路,從而促進胃癌細胞的侵襲轉移過程。
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 Alexander E Sherman;Yana Zavros;;Role of Sonic Hedgehog signaling during progression from inflammation to cancer in the stomach[J];World Journal of Gastrointestinal Pathophysiology;2011年06期

，

本文編號：1284062