本文關(guān)鍵詞：沉默PRSS1對胃癌MGC803細(xì)胞遷移侵襲的影響

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【摘要】：[目的]通過沉默PRSS1基因的表達(dá),觀察對胃癌MGC803細(xì)胞遷移侵襲的影響,探討PRSS1影響胃癌細(xì)胞增殖、遷移侵襲的分子機(jī)制。[方法]1.采用免疫組織化學(xué)染色結(jié)合組織芯片(含正常胃粘膜、癌旁、高分化、中分化、低分化胃腺癌及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌組織)檢測胃癌組織中PRSS1蛋白的表達(dá),并分析其表達(dá)的意義。2.利用si RNA干擾技術(shù),構(gòu)建pc DNA6.2?-GW/Em GFP-mi Ri-PRSS1干擾質(zhì)粒,將其轉(zhuǎn)染MGC803細(xì)胞,經(jīng)殺稻瘟菌素Blasticidin S HCl篩選,建立PRSS1穩(wěn)定低表達(dá)的MGC803/mi Ri-PRSS1細(xì)胞系。利用RT-PCR和Western blot檢測MGC803/mi Ri-PRSS1細(xì)胞中PRSS1 m RNA和蛋白的表達(dá)。3.運(yùn)用MTT法、平皿克隆形成實(shí)驗(yàn)、劃痕愈合實(shí)驗(yàn)、Transwell遷移侵襲實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞術(shù)檢測PRSS1低表達(dá)對MGC803細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期和遷移侵襲的影響。[結(jié)果]1.免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示:高分化、中分化、低分化胃腺癌組織及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌組織中,PRSS1蛋白表達(dá)較正常胃粘膜組織、癌旁組織表達(dá)增加,且癌旁組織中的表達(dá)強(qiáng)于正常胃粘膜組織。2.構(gòu)建pc DNA6.2?-GW/Em GFP-mi Ri-PRSS1干擾質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染MGC803細(xì)胞,篩選后建立PRSS1穩(wěn)定低表達(dá)的MGC803/mi Ri-PRSS1細(xì)胞系。RT-PCR和Western blot檢測結(jié)果顯示,干擾組MGC803/mi Ri-PRSS1細(xì)胞中PRSS1 m RNA和蛋白表達(dá)量較空白組和載體對照組中m RNA和蛋白表達(dá)量均降低(P0.05)。3.PRSS1低表達(dá)對MGC803細(xì)胞增殖的影響:1)MTT結(jié)果顯示,空白組MGC803細(xì)胞的增殖率為0.814±0.003,干擾組MGC803/mi Ri-PRSS1細(xì)胞的增殖率為0.501±0.002,載體對照組MGC803/mi Ri細(xì)胞的增殖率為0.791±0.002。空白組MGC803細(xì)胞增殖率明顯高于干擾組MGC803/mi Ri-PRSS1細(xì)胞(P0.05),表明PRSS1低表達(dá)后MGC803細(xì)胞的增殖活性降低(P0.05)。2)平皿克隆形成實(shí)驗(yàn)顯示,干擾組MGC803/mi Ri-PRSS1細(xì)胞的克隆數(shù)為23±2個,空白組MGC803細(xì)胞和載體對照組MGC803/mi Ri細(xì)胞的克隆數(shù)分別為98±5個和89±3個,分別較干擾組MGC803/mi Ri-PRSS1細(xì)胞多75±3個和66±4個(P0.05),表明PRSS1低表達(dá)后MGC803細(xì)胞集落形成能力減弱(P0.05)。4.PRSS1低表達(dá)對MGC803細(xì)胞遷移侵襲的影響:1)劃痕愈合實(shí)驗(yàn)顯示,劃痕24h小時(shí)末空白組MGC803細(xì)胞的遷移距離為188±8um,干擾組MGC803/mi Ri-PRSS1細(xì)胞和載體對照組MGC803/mi Ri細(xì)胞的遷移距離分別為105±3um和179±6um�？瞻捉MMGC803細(xì)胞和載體對照組MGC803/mi Ri細(xì)胞遷移距離分別較干擾組MGC803/mi Ri-PRSS1細(xì)胞多83±5um和74±3um(P0.05),表明PRSS1低表達(dá)后MGC803細(xì)胞遷移能力減弱(P0.05)。2)Transwell遷移實(shí)驗(yàn)顯示,空白組MGC803細(xì)胞遷移數(shù)為267±36個,干擾組MGC803/mi Ri-PRSS1細(xì)胞遷移數(shù)為60±8個,載體對照組MGC803/mi Ri細(xì)胞遷移數(shù)為245±32個。與空白組MGC803和載體對照組MGC803/mi Ri細(xì)胞比較,干擾組MGC803/mi Ri-PRSS1細(xì)胞遷移數(shù)分別少207±28個和185±24個(P0.05),表明PRSS1低表達(dá)后MGC803細(xì)胞遷移能力降低(P0.05)。3)Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)顯示,空白組MGC803細(xì)胞和載體對照組MGC803/mi Ri細(xì)胞的穿膜細(xì)胞數(shù)分別為48±8個和40±7個,干擾組MGC803/mi Ri-PRSS1細(xì)胞穿膜細(xì)胞數(shù)為15±4個�？瞻捉MMGC803細(xì)胞和載體對照組MGC803/mi Ri細(xì)胞分別與干擾組MGC803/mi Ri-PRSS1細(xì)胞比較,其穿膜細(xì)胞數(shù)分別多33±4個和25±3個(P0.05),表明PRSS1低表達(dá)后MGC803細(xì)胞侵襲能力降低(P0.05)。5.PRSS1低表達(dá)對MGC803細(xì)胞周期的影響:流式細(xì)胞術(shù)顯示,與空白組MGC803細(xì)胞和載體對照組MGC803/mi Ri細(xì)胞比較,干擾組MGC803/mi Ri-PRSS1細(xì)胞G0/G1期比率增加,而S期比率則降低(P0.05),表明PRSS1低表達(dá)后MGC803細(xì)胞的發(fā)生周期阻滯。[結(jié)論]1.PRSS1蛋白在胃癌組織中高表達(dá),與胃癌的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期密切相關(guān)。2.沉默PRSS1表達(dá)MGC803細(xì)胞的增殖與遷移侵襲能力降低。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 Dong Yi Kim;Jae Kyoon Joo;Seong Yeob Ryu;Young Jin Kim;Shin Kon Kim;;Factors related to lymph node metastasis and surgical strategy used to treat early gastric carcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2004年05期

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本文編號：1284055