發(fā)布時(shí)間：2017-12-12 01:01

  本文關(guān)鍵詞：MS-275對p53突變型胃癌細(xì)胞SGC-7901的作用及相關(guān)機(jī)制研究

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【摘要】：背景:胃癌是世界第四大常見腫瘤,其死亡率在腫瘤相關(guān)死亡原因中居第二位,我國的胃癌發(fā)病率和死亡率均居世界前三位。目前常見的胃癌治療手段主要包括手術(shù)切除和輔助全身化療等,對于中晚期胃癌,特別是復(fù)發(fā)性、難治性胃癌,采用傳統(tǒng)的方法治療效果并不理想,而且還易引起多種并發(fā)癥。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,更多的研究致力于尋找一種分子靶向治療藥物,以期達(dá)到對胃癌更好的治療效果和更小的毒副作用。近年來的研究發(fā)現(xiàn),組蛋白乙�；腿ヒ阴；诟淖�?nèi)旧w結(jié)構(gòu)和調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄方面具有重要作用,組蛋白的過度乙�；c腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。組蛋白去乙�；敢种苿�(histone deacetylase inhibitors,HDACIs)可抑制組蛋白的過度乙�；�,并具有抑制腫瘤細(xì)胞的生長和誘導(dǎo)凋亡的作用,而對正常的細(xì)胞無毒性作用。HDACIs對腫瘤細(xì)胞的選擇性殺傷作用使其成為分子靶向藥物的研究熱點(diǎn)。MS-275作為苯甲酰胺類的HDACIs,其對很多實(shí)體腫瘤細(xì)胞和血液系統(tǒng)惡性腫瘤細(xì)胞均具有殺傷作用。我們課題組前期的研究表明,MS-275能選擇性殺傷含野生型p53的胃癌細(xì)胞MKN-45。然而高達(dá)50%的胃癌細(xì)胞為p53突變型,MS-275對該類型胃癌細(xì)胞的作用及其作用機(jī)理尚不明確。目的:1.研究MS-275對p53突變型胃癌細(xì)胞SGC-7901的選擇性殺傷作用;2.進(jìn)一步研究MS-275體外選擇性殺傷SGC-7901細(xì)胞的分子機(jī)制。方法:1.WST-1檢測細(xì)胞存活率:不同濃度MS-275分別處理SGC-7901細(xì)胞和GES-1細(xì)胞后,WST-1法檢測細(xì)胞存活率;2.細(xì)胞毒性分析:使用乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)檢測試劑盒,檢測不同濃度MS-275處理SGC-7901細(xì)胞和GES-1細(xì)胞后,LDH釋放量的改變;3.JC-1檢測線粒體膜電位:利用JC-1檢測MS-275處理后的SGC-7901細(xì)胞內(nèi)線粒體膜電位的變化;4.流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)釋放量:不同濃度MS-275單獨(dú)處理及加入ROS抑制劑過氧化氫酶后,流式細(xì)胞儀檢測SGC-7901細(xì)胞內(nèi)ROS的釋放量;5.Western blotting檢測不同濃度MS-275處理后,SGC-7901細(xì)胞內(nèi)Trx基因在蛋白水平的表達(dá)變化;6.Western blotting和q PCR分別檢測不同濃度MS-275處理后,SGC-7901細(xì)胞內(nèi)周期相關(guān)基因p21、p27、p57、Cyclin B1、Cyclin D1在蛋白和m RNA水平的表達(dá)變化。結(jié)果:1.不同濃度MS-275分別處理SGC-7901細(xì)胞和GES-1細(xì)胞后,SGC-7901細(xì)胞的存活率明顯下降,LDH釋放量明顯升高,且均呈濃度依賴性;而GES-1細(xì)胞的存活率及LDH釋放量均沒有受到顯著影響。2.MS-275處理后的SGC-7901細(xì)胞,其內(nèi)的線粒體膜電位降低,ROS釋放量增加,且變化呈濃度依賴性,使用抑制劑后ROS的釋放量顯著降低。3.MS-275可下調(diào)SGC-7901細(xì)胞內(nèi)硫氧還蛋白Trx的蛋白表達(dá)水平,且呈濃度依賴性。4.Western Blotting和q PCR結(jié)果表明,MS-275可上調(diào)細(xì)胞周期抑制因子p21、p27和p57的表達(dá),同時(shí)下調(diào)細(xì)胞周期蛋白Cyclin B1、Cyclin D1的表達(dá)。結(jié)論:MS-275在體外具有選擇性殺傷p53突變型胃癌細(xì)胞SGC-7901的作用,而對正常胃粘膜細(xì)胞無明顯影響。MS-275發(fā)揮選擇性殺傷作用的機(jī)制,一是通過氧化應(yīng)激誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡,包括增加ROS釋放量,下調(diào)Trx的表達(dá),從而達(dá)到損傷線粒體內(nèi)膜,降低線粒體膜電位,誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡的作用;二是通過調(diào)控細(xì)胞周期相關(guān)因子p21、p27、p57、Cyclin B1和Cyclin D1的表達(dá),阻滯細(xì)胞周期的進(jìn)程,從而達(dá)到抑制腫瘤細(xì)胞增殖的目的。
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 黃辭;吳智群;宮衛(wèi)東;何志;;MS-275通過上調(diào)ROS釋放選擇性殺傷胃癌細(xì)胞[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2014年09期

2 劉瑾;任亞嬋;吳智群;;組蛋白去乙�；敢种苿㎝S-275在體外抑制胃癌細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國癌癥雜志;2011年08期

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本文編號：1280552