本文關(guān)鍵詞：消癌平注射液聯(lián)合氟尿嘧啶及絲裂霉素對肺癌A549細胞周期、凋亡及相應基因表達的影響

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【摘要】：目的:通過消癌平聯(lián)合特異性細胞周期藥物對肺癌A549細胞生長、細胞周期、凋亡的影響,并檢測Cyclin D1、Cyclin E及P53等相關(guān)基因表達,初步探討其可能機制。方法:采用MTT檢測消癌平聯(lián)合氟尿嘧啶及絲裂霉素對肺癌A549的抑制作用。流式細胞術(shù)檢測各組對藥物細胞周期及凋亡的影響。RT-PCR檢測各組cyclin D1、Cyclin E及P53基因表達。結(jié)果:1 MTT檢測各組藥物對肺癌A549細胞的生存影響,結(jié)果顯示,在一定濃度范圍內(nèi),消癌平組、氟尿嘧啶組及絲裂霉素組對肺癌A549的生長抑制與時間、劑量成正相關(guān),具有時間劑量依賴性,消癌平組、氟尿嘧啶組及絲裂霉素組各組藥物的24h、48h、72h的IC50(半數(shù)抑瘤率)別為72.40 ul/ml、17.93 ul/ml、7.98ul/ml,57.56ug/ml、15.02ug/ml、2.09 ug/ml,1195.23 ug/ml、182.26 ug/ml、24.99 ug/ml。在不同時間段,消癌平(2ul/ml、8ul/ml、32ul/ml)聯(lián)合絲裂霉素組(2.00 ug/ml)的OD(光密度)比單藥消癌組及絲裂霉素組高,(P0.05),其OD值隨濃度的增高而增大(P0.05)。同樣,在不同時間段,消癌平(2ul/ml、8ul/ml、32ul/ml)聯(lián)合氟尿嘧啶組的OD值均比單藥消癌組及氟尿嘧啶組高,(P0.05),其OD值隨濃度的增高而增大(P0.05)。2通過流式細胞術(shù)檢測消癌平聯(lián)合氟尿嘧啶組、絲裂霉素組對肺癌A549細胞周期及凋亡的影響,結(jié)果顯示消癌平組組和絲裂霉素組與對照組相比,肺癌A549細胞G0/G1期細胞百分比均明顯高于對照組,分別為48.43%VS 34.99%、50.69%VS 34.99%,P0.05,有統(tǒng)計學意義。氟尿嘧啶組與對照組相比,肺癌A549細胞S期細胞百分比均明顯高于對照組,為50.40%VS 40.86%,P0.05,有顯著性差異,消癌平與絲裂霉素兩種藥物聯(lián)合用藥,其對肺癌A549細胞G0/G1期細胞百分比與消癌平組、絲裂霉素組相比明顯增高,62.69%VS 48.43%VS 50.69%,P0.05。消癌平與氟尿嘧啶兩種藥物聯(lián)合用藥,其對肺癌A549細胞S期細胞百分比與氟尿嘧啶組相比明顯增高,60.7%VS 50.40%,P0.05。消癌平組、絲裂霉素組及氟尿嘧啶組與對照組相比,肺癌A549細胞凋亡率明顯高于對照組,分別為1.99%、4.68%、4.56%,與對照組0.45%相比具有統(tǒng)計學差異(P0.05)。消癌平與絲裂霉素及氟尿嘧啶兩種藥物聯(lián)合用藥,肺癌A549細胞凋亡率明顯增高,分別由原來4.68%、4.56%提升到9.56%、13.45%,具有顯著性差異(P0.05)。3通過RT-PCR檢查各組細胞cycline D1、Cycline E、P53等m RNA表達,結(jié)果顯示消癌平組、氟尿嘧啶組及絲裂霉素組與對照組相比均能提高p53m RNA表達(0.25、0.45、0.53 VS 0.09),且消癌平聯(lián)合氟尿嘧啶或絲裂霉素的p53m RNA表達均高于氟尿嘧啶組及絲裂霉素組,0.80 VS 0.45、0.83 VS 0.53,相比有顯著性差異(P0.05)。對Cyclin D1基因表達,結(jié)果顯示消癌平組、絲裂霉素組、氟尿嘧啶組與對照組相比均能降低Cyclin D1基因的表達(0.51、0.46、0.59 VS 0.88,P0.05)。消癌平聯(lián)合絲裂霉素組可顯著減低Cyclin D1基因的表達(0.26 VS 0.46,P=0.0150.05),但消癌平聯(lián)合氟尿嘧啶組對Cyclin D1基因表達的影響與單藥氟尿嘧啶組未見明顯差異(0.53 VS 0.59,P=0.3140.05)。對Cyclin E基因表達的影響,結(jié)果顯示消癌平組、絲裂霉素組、消癌平與絲裂霉素聯(lián)合用藥組與對照組相比,均未能降低Cyclin E基因的表達(0.81、0.79、0.88 VS 0.85,P0.05)。氟尿嘧啶組與對照組相比,可降低肺癌A549細胞Cyclin E基因的表達(0.49 VS 0.85 P0.05),但消癌平聯(lián)合氟尿嘧啶組顯示其下調(diào)肺癌A549細胞Cyclin E基因表達與單藥氟尿嘧啶組未見明顯差異0.56 VS 0.49 P=0.1360.05)。結(jié)論:1消癌平、氟尿嘧啶、絲裂霉素對肺癌A549細胞的均有抑制作用,在一定范圍內(nèi)呈時間-劑量依賴性,消癌平聯(lián)合氟尿嘧啶、絲裂霉素可以提高對肺癌A549細胞的抑制效應。2消癌平、氟尿嘧啶、絲裂霉素均可誘導肺癌A549細胞凋亡,消癌平聯(lián)合氟尿嘧啶、絲裂霉素可以提高對肺癌A549細胞凋亡作用,其機制可能與上調(diào)P53 m RNA表達有關(guān)。3消癌平、氟尿嘧啶、絲裂霉素分別阻滯肺癌A549細胞的周期于G0/G1、S、G0/G1。消癌平聯(lián)合絲裂霉素可提高肺癌A549細胞周期G0/G1期阻滯效應,作用機制可能與下調(diào)Cyclin D1 m RNA有關(guān)。氟尿嘧啶阻滯肺癌A549細胞的周期S期可能與下調(diào)Cyclin D1、Cyclin E有關(guān)。消癌平聯(lián)合氟尿嘧啶能夠提高其對肺癌A549細胞周期S期阻滯效應,尚不能明確其作用機制與下調(diào)Cyclin D1、Cyclin E基因表達有關(guān)。
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2

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