本文關(guān)鍵詞：慢性淋巴細(xì)胞白血病自噬相關(guān)基因的表達(dá)及西達(dá)本胺的作用

  更多相關(guān)文章： 慢性淋巴細(xì)胞白血病 BECN1 ATG5 RT-PCR 西達(dá)本胺 凋亡 自噬 慢性淋巴細(xì)胞白血病

【摘要】：目的：BECN1及ATG5基因在細(xì)胞自噬中起重要的調(diào)節(jié)作用。本研究探討B(tài)ECN1及ATG5基因在慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)的表達(dá)及其臨床意義。方法：收集100例初診或6個月未治療的CLL患者和50例健康正常人標(biāo)本,采用SYBR Green熒光染料實(shí)時定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測兩組BECN1及ATG5 mRNA表達(dá)水平,運(yùn)用循環(huán)閾值(Ct)比較法進(jìn)行分析。采用PCR以及DNA序列測定CLL患者p53和免疫球蛋白重鏈可變區(qū)(IGHV)突變；流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測CD38及ZAP-70表達(dá)；間期熒光原位雜交(FISH)技術(shù)檢測細(xì)胞遺傳學(xué)異常。分析BECN1及ATG5基因表達(dá)與血清乳酸脫氫酶(LDH)、β2-1微球蛋白(β2-MG)及其他預(yù)后因素的關(guān)系。統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS17.0軟件及GraphPad Prism 5.0軟件進(jìn)行,以P0.05代表有統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)果：1BECN1 mRNA在CLL患者和健康正常對照組的中位表達(dá)水平分別為0.108和0.035,具有統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.002)。ATG5 mRNA在CLL患者和健康正常對照組的中位表達(dá)水平分別為為0.084和0.066,具有統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.048)。2. BECN1 mRNA的表達(dá)水平與Binet分期相關(guān)。臨床分期較晚(Binet B期、C期)的患者BECN1表達(dá)水平明顯低于臨床分期較早(Binet A期)的患者(P=0.047)。 ATG5 mRNA的表達(dá)水平與Binet分期、p53突變狀態(tài)、ZAP-70、CD38等指標(biāo)相關(guān)。臨床分期較早(Binet A期)的患者ATG5表達(dá)水平明顯高于臨床分期較晚(Binet B期、C期)的患者(P=0.001)；無p53突變者ATG5表達(dá)水平要明顯高于有p53突變者(P=0.014); ZAP-70陰性患者ATG5表達(dá)水平明顯高于ZAP-70陽性者(P=0.008)；CD38陰性患者ATG5表達(dá)水平明顯高于CD38陽性者(P=0.007)。3.利用ROC曲線以Binet分期為參照求得ATG5分界值0.090(AUC:0.699; 95% CI:0.595～0.804;敏感性71.0%,特異性69.1%),可將患者分為兩組,其中ATG5高表達(dá)組的首次治療時間(TTT)明顯長于低表達(dá)組(P=0.020)。但Cox多因素生存分析顯示只有Binet分期是TTT的獨(dú)立預(yù)后因素(P=0.001)。結(jié)論：自噬相關(guān)基因BECN1和ATG5 mRNA在CLL細(xì)胞表達(dá)上調(diào),提示CLL細(xì)胞自噬水平增高。TG5 mRNA表達(dá)水平與CLL的不良預(yù)后因素,如ZAP-70、 p53突變狀態(tài)等相關(guān)。目的：本實(shí)驗(yàn)旨在研究自噬和凋亡在西達(dá)本胺治療慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)的作用,為西達(dá)本胺單藥及聯(lián)合用藥治療CLL提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：體外培養(yǎng)CLL原代細(xì)胞,應(yīng)用CCK8法檢測細(xì)胞活性。應(yīng)用蛋白免疫印跡雜交(WB)檢測微管相關(guān)蛋白1輕鏈3-Ⅱ (LC3-Ⅱ)表達(dá)水平。流式細(xì)胞術(shù)(FCM) Annexin-Ⅴ FITC/PI雙染檢測西達(dá)本胺對細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用。最后用實(shí)時定量逆轉(zhuǎn)錄PCR (RT-PCR)檢測凋亡相關(guān)基因BECN1和ATG5的mRNA表達(dá)水平。FCM檢測CLL細(xì)胞中CD38和ZAP-70表達(dá)水平,PCR聯(lián)合DNA序列分析測定p53突變和免疫球蛋白重鏈可變區(qū)(IGHV)突變狀態(tài),間期熒光原位雜交(FISH)技術(shù)檢測細(xì)胞遺傳學(xué)異常。采用SPSS 17.0及GraphPad Prism5.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。以P0.05代表其差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果：1.不同濃度的西達(dá)本胺干預(yù)CLL細(xì)胞24 h和48 h后發(fā)現(xiàn),西達(dá)本胺以時間劑量依賴性抑制CLL細(xì)胞的活性。2.CLL細(xì)胞陰性對照(NC)組的24 h中位凋亡率為20.97%(7.75%～36.8%)。而3-甲基腺嘌呤(3-MA)、氯喹(CQ)、西達(dá)本胺、西達(dá)本胺聯(lián)合CQ組的中位凋亡率分別為29.83%(13.55%～55.1%)、25.33%(9.03%～65.1%)、37.47%(12.18～70.1%)和44.37%(13.36～69.4%)。西達(dá)本胺誘導(dǎo)CLL細(xì)胞凋亡增加(P0.001)。與單獨(dú)的西達(dá)本胺干預(yù)相比,CQ聯(lián)合西達(dá)本胺顯著增加CLL細(xì)胞凋亡率(P=0.001)。3.西達(dá)本胺下調(diào)CLL細(xì)胞LC3-Ⅱ的表達(dá)水平(P=0.001)。 LC3-Ⅱ表達(dá)下降是由于西達(dá)本胺降低細(xì)胞的自噬活性,而非自噬體降解增多所導(dǎo)致的。4.西達(dá)本胺下調(diào)CLL細(xì)胞BECN1 mRNA表達(dá)水平。3-MA、CQ、西達(dá)本胺、西達(dá)本胺聯(lián)合CQ組BECN1 mRNA中位表達(dá)量分別為0.062(0.008～0.668)、0.054(0.006～0.445)、0.051(0.005～0.348)、0.055(0.004～0.425)。而NC組中位表達(dá)量0.078(0.006～1.000)。西達(dá)本胺、西達(dá)本胺聯(lián)合CQ組的BECN1 mRNA與NC組相比,統(tǒng)計學(xué)上存在顯著性差異(P=0.004和P=0.004)。藥物處理組各組的ATG5 mRNA水平與NC組統(tǒng)計學(xué)上無差異(P0.05)。結(jié)論：西達(dá)本胺具有顯著的抗CLL細(xì)胞腫瘤活性的作用,西達(dá)本胺通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和抑制細(xì)胞自噬來促進(jìn)CLL細(xì)胞死亡。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R733.72

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 PaolaGallinari;StefaniaDiMarco;PhillipJones;MichelePallaoro;ChristianSteinkühler;;HDACs,histone deacetylation and gene transcription: from molecular biology to cancer therapeutics[J];Cell Research;2007年03期

，

本文編號：1232949