本文關鍵詞：胰島素樣生長因子結合蛋白-2（IGFBP-2）在胰腺癌組織中的表達及臨床意義

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【摘要】：目的:胰腺癌(pancreatic carcinoma,PC)是一種早期診斷困難、惡性程度極高、治療困難、預后差的消化道腫瘤�，F有的腫瘤標志物:糖鏈抗原19-9(CA19-9)、糖鏈抗原242(CA242)、糖鏈抗原50(CA50)等,在胰腺癌的診斷中普遍都存在著敏感性低、特異性差、假陽性率高等缺陷。因此臨床上需尋找新的、特異性更高的胰腺癌相關腫瘤標記物來提高胰腺癌的早期診斷。本研究利用前期實驗中“同位素標記相對和絕對定量(i TRAQ)技術結合納升級反相液相色譜-串聯質譜(nano RPLC-MS/MS)”,篩選出了胰腺癌、胰腺良性腫瘤以及健康對照組在外周血清中差異表達的蛋白,并鑒定出了診斷胰腺癌的候選血清標記物:胰島素樣生長因子結合蛋白-2(IGFBP-2)、腱生蛋白-X(Tenascin-X)、α-HS-糖蛋白(AHSR)、聚免疫球蛋白受體(PIGR)、載脂蛋白A-Ⅱ(Apo A-Ⅱ)、血清淀粉樣蛋A-4(SSA-4)、組織蛋白酶D(Cathepsin D)這7種差異性蛋白。通過比較分析從中篩選出胰島素樣生長因子結合蛋白-2(IGFBP-2),從基因和蛋白質水平分析其在胰腺癌組織、胰腺癌旁組織、胰腺良性病變及正常胰腺中表達的特點,并探討該蛋白與胰腺癌的臨床病理因素的相關性和在胰腺癌的診斷、治療中存在的潛在價值。方法:1、實驗研究對象分為三個組,即胰腺癌組、胰腺良性病變組(包括胰管結石、胰腺假性囊腫、胰島素瘤手術時切除的胰腺標本)各8例及正常胰腺組8例(胰腺外傷行胰腺部分切除2例、壺腹部腫瘤、膽總管下段腫瘤行胰十二指腸切除時所切除標本中的正常胰腺組織6例)。標本采集均經倫理委員會批準授權,患方知情同意后,術中采集切除的胰腺組織,標本采集后均放入預分裝含有RNA保存液的凍存管中,并立即放入-80℃冰箱凍存?zhèn)溆谩?、胰腺組織中IGFBP-2 m RNA的測定:采用逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)法,以β-actin為內參,檢測標本中胰島素樣生長因子結合蛋白-2(IGFBP-2)基因m RNA的相對表達量。其中IGFBP-2 5’Primer:GTTGCAGACAATGGCGATGAC,IGFBP-2 5’Reverser:GTTCCTGTTGGCAGGGAGTC;β-actin 5’Primer:CACCGAGC ATGGCTATAGGT,β-actin 5’Reverser:AACCGCTCGTTGCCGATG。根據樣本標準曲線和PCR反應Ct值,用Bio-Rad IQ5軟件分析,利用相對定量的2-△△Ct分析法來進行IGFBP-2 m RNA表達量的檢測。3、運用En Vision免疫組織化學法檢測胰島素樣生長因子結合蛋白-2(IGFBP-2)的表達。免疫組化的標本來源于瀘州醫(yī)學院附屬醫(yī)院肝膽外科2009年1月至2014年9月期間手術切除且均經病理學證實的胰腺癌標本40例,患者術前均未進行放、化療治療,并獲得40例對應胰腺癌、癌旁組織的石蠟標本及完整病歷資料,以正常胰腺作為對照。根據臨床病歷資料分別按照胰腺癌患者的年齡、性別、腫瘤分化程度、腫瘤的大小、合并淋巴結轉移與否、TNM分期等統(tǒng)計IGFBP-2陽性的表達情況。此外還根據這40例胰腺癌患者的臨床病歷資料,統(tǒng)計了術前血清CA19-937u/ml時,IGFBP-2陽性表達的情況。所有統(tǒng)計學數據均用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計學分析,分析IGFBP-2在胰腺癌組織中的陽性表達與臨床病理因素的關系,采用卡方檢驗或秩和檢驗,兩者相關性采用Spearman相關性分析,以P0.05認為差異具有統(tǒng)計學意義。結果:1、RT-PCR結果示:IGFBP-2m RNA基因的相對表達量在胰腺癌組中(4.18±0.18)明顯高于胰腺良性腫瘤組(2.10±0.18)及正常胰腺組(1.0±0.08)。2、免疫組化結果示:IGFBP-2表達部位在胰腺癌組織的胞漿中且胰腺癌組織中IGFBP-2的陽性表達率92.5%,高于癌旁組織40%,而在正常胰腺組織中不表達,胰腺癌和癌旁組織相比(X2=30.386,p=0.004)差異具有統(tǒng)計學意義。3、IGFBP-2陽性表達與胰腺癌臨床病理的關系:胰腺癌組織中IGFBP-2的表達與胰腺癌組織的分化程度有關,中低分化胰腺癌組明顯高于高分化胰腺癌組,兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(X2=10.321,p=0.001);并且與淋巴結的轉移相關,淋巴結轉移組高于不轉移組,兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(X2=26.694,p=0.000);與胰腺癌TNM分期相關,分期越晚IGFBP-2的表達量越高,差異有統(tǒng)計學意義(秩和檢驗,p=0.002);而與年齡、性別及腫瘤大小無關。4、術前血清CA19-9水平與IGFBP-2的陽性表達存在相關性,即術前血清CA19-937u/ml的胰腺癌中IGFBP-2的陽性表達明顯高于CA19-9≤37u/ml組,差異具有統(tǒng)計學意義。(X2=6.323,p=0.012)。結論:1、胰島素樣生長因子結合蛋白-2(IGFBP-2)m RNA在胰腺癌組織中存在表達,且明顯高于胰腺良性腫瘤組織及正常胰腺組織,差異具有統(tǒng)計學意義。2、胰島素樣生長因子結合蛋白-2(IGFBP-2)與臨床病理特征間存在相關性,即分化程度愈差,TNM分期越晚,出現淋巴結轉移者,IGFBP-2的表達愈高,而與年齡、性別及腫瘤大小無關。3、IGFBP-2在胰腺癌的診斷中有一定的價值,當與胰腺癌的腫瘤標志物(如CA19-9)聯合檢測時,可能為提高胰腺癌的診斷率提供重要的信息。
【學位授予單位】：四川醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.9

【參考文獻】

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1 李曉明;胡嵩;朱毅;龔國富;;血清VEGF、CA19-9、CA242及CEA檢測在胰腺癌診斷中的應用價值[J];國際檢驗醫(yī)學雜志;2013年06期

2 楊帆;;胰島素樣生長因子結合蛋白-2水平與肝癌關系的研究[J];臨床外科雜志;2007年07期

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本文編號：1229919