本文關(guān)鍵詞：SIRT1在宮頸癌發(fā)生中作用的初步研究

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【摘要】：目的:第Ⅲ類組蛋白去乙�；敢喾Q為Sirtuins,即沉默信息調(diào)節(jié)因子2(silent information regulator 2,Sir2)的同源蛋白,研究表明SIRT1與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),有望成為腫瘤治療的新靶點(diǎn)。本研究擬通過在組織水平檢測宮頸癌SIRT1的表達(dá)及其與臨床病理特征之間的關(guān)系;在細(xì)胞水平研究SIRT1對(duì)宮頸癌Si Ha細(xì)胞增殖、遷移、侵襲、凋亡及其Notch信號(hào)通路相關(guān)蛋白的影響,探討SIRTl在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展中的作用機(jī)制及其與Notch-Hes信號(hào)通路的關(guān)系。方法:收集2012年9月-2014年3月青島大學(xué)附屬醫(yī)院病理科宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌組織石蠟標(biāo)本,選取臨床病理資料完整者221例(包括CIN I級(jí),CIN II-CIN III級(jí),宮頸鱗癌及正常宮頸組織)。免疫組織化學(xué)方法檢測SIRT1蛋白的表達(dá),分析其表達(dá)與臨床指標(biāo)的相關(guān)性;化學(xué)合成靶向SIRT1基因的小干擾RNA(si RNA),以Lipofectamine RNAi MAX脂質(zhì)體為載體轉(zhuǎn)染Si Ha細(xì)胞,轉(zhuǎn)染72h后,提取各組總RNA及總蛋白。RT-PCR檢測Si Ha細(xì)胞SIRT1 m RNA的表達(dá),免疫印跡法檢測Si Ha細(xì)胞中SIRT1、Notch1、Hes1及cyclin D1蛋白的表達(dá),細(xì)胞毒性檢測試劑盒(CCK-8)檢測細(xì)胞增殖抑制率,遷移侵襲實(shí)驗(yàn)檢測Si Ha細(xì)胞的遷移侵襲能力,分別應(yīng)用Annexin V-PE雙染法及Hoechst33258染色法檢測細(xì)胞凋亡。結(jié)果:免疫組化結(jié)果顯示:SIRT1在正常宮頸組織及程度較輕的宮頸上皮內(nèi)瘤變(CINI級(jí))中未見陽性表達(dá);67例CINII-III組織中有16例SIRT1陽性(23.9%);而54例宮頸癌組織中29例SIRT1表達(dá)陽性(53.7%)。RT-PCR結(jié)果表明:與空白細(xì)胞對(duì)照組、轉(zhuǎn)染試劑對(duì)照組、SIRT1陰性對(duì)照組相比,si RNA-SIRT1干擾組細(xì)胞SIRT1 m RNA表達(dá)明顯下調(diào)(P0.05)。Western blot顯示:與對(duì)照組相比,si RNA-SIRT1干擾組細(xì)胞SIRT1蛋白表達(dá)量明顯下調(diào)(P0.05),cyclin D1、Notch1和Hes1蛋白的表達(dá)明顯上調(diào)(P0.05)。CCK-8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:si RNA-SIRTl轉(zhuǎn)染組抑制率為37%,SIRT1陰性對(duì)照組抑制率為8.7%,轉(zhuǎn)染試劑對(duì)照組抑制率7.3%,轉(zhuǎn)染組抑制率明顯高于其他組。Transwell遷移及侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比,si RNA-SIRT1干擾組穿過人工基底膜細(xì)胞數(shù)明顯減少。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果表明:si RNA-SIRT1干擾組凋亡率為16%而SIRT1陰性對(duì)照組凋亡率僅為2.6%。Hoechst33258染色顯示:si RNA-SIRT1干擾組Si Ha細(xì)胞核明顯變小,其染色質(zhì)濃縮,并可見凋亡小體,而SIRT1陰性對(duì)照組、轉(zhuǎn)染試劑對(duì)照組和空白細(xì)胞對(duì)照組細(xì)胞核呈均勻淡藍(lán)色。結(jié)論:靶向SIRT1基因的si RNA能有效抑制Si Ha細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,si RNA-SIRT1誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡與Notch-Hes信號(hào)通路密切相關(guān),有可能通過Notch-Hes信號(hào)通路參與高程度CIN向?qū)m頸浸潤性癌的轉(zhuǎn)化過程。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.33

【參考文獻(xiàn)】

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王林;Notch信號(hào)途徑在宮頸癌腫瘤發(fā)生中的作用及其機(jī)制的初步研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2006年

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本文編號(hào)：1223843