本文關(guān)鍵詞：MTA1參與化療應(yīng)激反應(yīng)促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的作用研究

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【摘要】：研究背景:乳腺癌是目前女性中發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤。隨著乳腺癌研究的深入和治療手段的發(fā)展,該病的預(yù)后正不斷改善。多數(shù)乳腺癌患者在治療后可獲得明顯緩解,即使Ⅲ期乳腺癌患者五年生存率亦可達(dá)到70%左右。但即便如此,患者的長期生存依然很難做到,而導(dǎo)致乳腺癌患者死亡的首要因素就是腫瘤的轉(zhuǎn)移。因此控制腫瘤轉(zhuǎn)移是乳腺癌治療相關(guān)的研究中亟待解決的問題�；熓侨橄侔┲委煹某Ｒ�(guī)手段之一,在臨床上有著廣泛的應(yīng)用�；熕幬锿ㄟ^其細(xì)胞毒性作用殺傷腫瘤細(xì)胞,通常用作乳腺癌患者手術(shù)前后的輔助治療,或者作為保守治療方法應(yīng)用于不能接受手術(shù)的患者。但既往有研究表明,化療具有潛在的促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移的效應(yīng)。我們認(rèn)為損傷性的環(huán)境因素可以引起腫瘤的應(yīng)激反應(yīng),促使腫瘤轉(zhuǎn)移以逃避不利環(huán)境�；熥鳛橐环N強烈的損傷因素,對于腫瘤來說顯然是一種強烈的應(yīng)激信號,是否具有刺激腫瘤轉(zhuǎn)移的效應(yīng),值得探討。轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白1(Metastasis-associated protein 1,MTA1)是一個與乳腺癌轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的重要分子,其過表達(dá)常見于包括乳腺癌在內(nèi)的多種人類惡性腫瘤,且往往預(yù)示著腫瘤的高級別、高轉(zhuǎn)移傾向和不良預(yù)后。更重要的是,MTA1是一種應(yīng)激反應(yīng)蛋白,其表達(dá)明顯受到環(huán)境因素的調(diào)控。損傷性條件如缺氧、紫外線、電離輻射和炎癥等均可誘導(dǎo)MTA1的表達(dá),而化療對乳腺癌細(xì)胞中MTA1表達(dá)水平的影響,尚未見文獻(xiàn)報道。因此我們希望通過實驗,觀察化療對乳腺癌轉(zhuǎn)移潛能的影響,分析在此過程中MTA1表達(dá)水平的變化及其發(fā)揮的作用,將MTA1與化療后乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的改變聯(lián)系起來。目的通過觀察化療藥物表柔比星處理前后乳腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力,分析化療對乳腺癌轉(zhuǎn)移潛能的影響。通過比較表柔比星處理前后乳腺癌細(xì)胞中MTA1的表達(dá)水平,以及在抑制MTA1表達(dá)后觀察表柔比星處理效應(yīng)的變化,分析MTA1在化療造成的乳腺癌細(xì)胞的生物學(xué)行為改變中發(fā)揮的作用。通過對乳腺癌小鼠模型給予表柔比星處理,觀察體內(nèi)化療對乳腺癌肺轉(zhuǎn)移的影響。方法1.對乳腺癌細(xì)胞MCF-7和MDA-MB-231給予半數(shù)抑制劑量的表柔比星處理6h或12h,用劃痕實驗和transwell實驗分析化療對乳腺癌細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響。2.提取表柔比星處理組和未處理組細(xì)胞的總RNA和蛋白,通過Real-time PCR和Western blot分析表柔比星處理對乳腺癌細(xì)胞中MTA1表達(dá)水平的影響。3.用無意義的NC si RNA或MTA1特異性si RNA轉(zhuǎn)染MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞,通過Real-time PCR和Western blot分析轉(zhuǎn)染si RNA對細(xì)胞內(nèi)MTA1表達(dá)水平的影響。4.將MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞各分為四組,Control組為正常對照,Epi組接受6h表柔比星處理,Epi+NC si RNA組預(yù)轉(zhuǎn)染NC si RNA后接受6h表柔比星處理,Epi+MTA1 si RNA組預(yù)轉(zhuǎn)染MTA1特異性si RNA后接受6h表柔比星處理。通過劃痕實驗和transwell實驗觀察細(xì)胞的遷移和侵襲能力,觀察MTA1抑制后表柔比星對乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移潛能的影響是否發(fā)生改變。5.建立小鼠4T1乳腺癌模型,實驗組小鼠給予3mg/kg較低劑量表柔比星化療,對照組小鼠給予生理鹽水,每周給藥1次,持續(xù)3周。比較兩組小鼠肺表面轉(zhuǎn)移灶數(shù)量,分析動物體內(nèi)化療對乳腺癌轉(zhuǎn)移潛能的影響。結(jié)果:1.劃痕實驗中,表柔比星6h處理組的MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞,與對照組相比劃痕愈合距離顯著增加。Transwell實驗中,6h處理組的MDA-MB-231細(xì)胞與對照組相比穿膜細(xì)胞數(shù)顯著增加。12h處理組細(xì)胞中沒有觀察到這些效應(yīng)。MCF-7細(xì)胞難以有效穿膜,transwell實驗并未取得有意義的結(jié)果,后續(xù)實驗不再考察MCF-7細(xì)胞的侵襲性。2.表柔比星處理后的MCF-7細(xì)胞和MDA-MB-231細(xì)胞均表現(xiàn)出MTA1 m RNA水平和蛋白水平的增高。3.與對照組和無意義NC si RNA組細(xì)胞相比,轉(zhuǎn)染MTA1特異性si RNA可以顯著降低MCF-7細(xì)胞和MDA-MB-231細(xì)胞中MTA1的m RNA水平和蛋白水平。4.在MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞的劃痕實驗中,與Control組細(xì)胞相比,Epi組/Epi+NC si RNA組細(xì)胞的劃痕愈合距離顯著增加;與Epi組細(xì)胞相比,Epi+MTA1si RNA組的劃痕愈合距離顯著減少。在MDA-MB-231細(xì)胞的transwell實驗中,Epi組/Epi+NC si RNA組穿膜細(xì)胞數(shù)顯著多于Control組,Epi+MTA1 si RNA組穿膜細(xì)胞數(shù)顯著少于Epi組。5.在4T1乳腺癌小鼠的體內(nèi)實驗中,相比于對照組,給予表柔比星化療的實驗組小鼠有更多的肺表面轉(zhuǎn)移灶形成。結(jié)論1.表柔比星處理可以在體外實驗中增加乳腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力,這一效應(yīng)受到藥物處理時間的制約。處理時間過長會導(dǎo)致細(xì)胞嚴(yán)重?fù)p傷,無法觀察到該效應(yīng)。2.表柔比星處理可以顯著提高乳腺癌細(xì)胞中MTA1的表達(dá),而MTA1特異性si RNA可以有效抑制乳腺癌細(xì)胞中MTA1的表達(dá)。3.抑制MTA1可以部分抑制表柔比星處理引起的乳腺癌細(xì)胞遷移和侵襲能力的增加。提示MTA1是表柔比星處理后腫瘤應(yīng)激反應(yīng)過程中的一個效應(yīng)分子。4.小鼠體內(nèi)低劑量表柔比星化療可以促進(jìn)4T1乳腺癌的肺轉(zhuǎn)移。
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9

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本文編號：1182731