本文關(guān)鍵詞：GIPC2相互作用蛋白的研究

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【摘要】：研究背景與目的：GIPC2是一種天然的小分子蛋白,現(xiàn)發(fā)現(xiàn)其在多種腫瘤中存在表達(dá)量的變化,如GIPC2在胃癌中上調(diào),在腎癌、急性淋巴細(xì)胞白血病和腎上腺皮質(zhì)癌中卻下調(diào)。然而到目前為止GIPC2在腫瘤發(fā)生中的功能尚不清楚,研究報道GIPC2的相互作用蛋白也很少。因此,本研究旨在尋找GIPC2的相互作用蛋白,從而為研究GIPC2的生物學(xué)功能提供有價值的線索。研究方法：以酵母雙雜交(H2Y)和免疫沉淀-質(zhì)譜聯(lián)用兩種方法進(jìn)行GIPC2相互作用蛋白的初篩,主要從GIPC2 PDZ結(jié)構(gòu)域篩選PDZ配體文庫、GIPC2篩選cDNA文庫及GIPC2篩選293T細(xì)胞表達(dá)蛋白三條路線進(jìn)行研究。首先通過生物學(xué)功能對初篩結(jié)果進(jìn)行篩選得到候選蛋白,再根據(jù)蛋白表達(dá)的組織特異性和種屬特異性,在PC12和293T等細(xì)胞中通過熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)、免疫共沉淀(CO-IP)等方法進(jìn)行相互作用蛋白的驗證。研究結(jié)果：在酵母雙雜交系統(tǒng)中,通過GIPC2 PDZ結(jié)構(gòu)域篩選PDZ配體文庫的方法,得到14個GIPC2的候選配體蛋白；通過GIPC2篩選cDNA文庫的方法得到4個GIPC2的候選配體蛋白。利用免疫沉淀-質(zhì)譜聯(lián)用的方法在293T細(xì)胞中篩選到上百種可能的配體蛋白。將以上得到的所有候選蛋白從生物學(xué)功能和亞細(xì)胞定位等方面進(jìn)行進(jìn)一步篩選,共得到19個候選蛋白。在PCI2細(xì)胞中,利用FRET的方法對GIPC2和19個候選蛋白的相互作用進(jìn)行驗證,均呈陽性。在293T細(xì)胞中,通過CO-IP驗證,確定NONO為GIPC2的相互作用蛋白。研究結(jié)論：通過酵母雙雜交、免疫沉淀-質(zhì)譜聯(lián)用、熒光共振能量轉(zhuǎn)移、免疫共沉淀等方法,我們成功篩選并驗證得到GIPC2新的相互作用蛋白,為GIPC2相關(guān)生物學(xué)功能的研究提供重要的線索。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R730.2

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本文編號：1143202