本文關(guān)鍵詞：多功能脂質(zhì)體對(duì)前列腺癌骨轉(zhuǎn)移瘤的治療研究

  更多相關(guān)文章： 骨轉(zhuǎn)移瘤 RGD肽 脂質(zhì)體 藥物傳輸

【摘要】：目的通過(guò)環(huán)狀精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽(cRGDyk)與脂質(zhì)體傳輸系統(tǒng)的連接以及熱敏脂質(zhì)體的構(gòu)建,探討多功能脂質(zhì)體如何提高小鼠前列腺癌骨轉(zhuǎn)移瘤的治療效果。方法(1)透射電子顯微鏡(Transmission Electron Microscope,TEM)確定順鉑脂質(zhì)體(CIS-liposomes和RGD-CIS-liposomes)的形態(tài)的大小;動(dòng)態(tài)光散射儀(Dynamic Light Scattering,DLS)確定脂質(zhì)體的粒徑,PDI和zeta電位;高效液相色譜法(High Performance Liquid Chromatograph,HPLC)確定脂質(zhì)體的包封率,裝載率和釋放曲線;流式細(xì)胞儀(Flow Cytometry,FCM)和激光共聚焦顯微鏡(Confocal Laser Microscope,CLSM)檢測(cè)細(xì)胞對(duì)藥物的攝取;MTT法檢測(cè)不同濃度的藥物對(duì)RM-1細(xì)胞損傷;小鼠尾靜脈注射cisplatin,CIS-lipsomes和RGD-CIS-liposomes后,HPLC法檢測(cè)血液和組織中順鉑的含量;建立小鼠前列腺癌骨髓瘤模型后,通過(guò)小動(dòng)物活體成像系統(tǒng)成像系統(tǒng)(In Vivo Image System,IVIS)檢測(cè)脂質(zhì)體在腫瘤部位的聚集情況;小鼠造模后第4,6,8,10,12,14,16,18,20,22,24,26和28天檢測(cè)小鼠自發(fā)痛行為,并每天觀察體重的變化;在小鼠造模后的第22天,將小鼠用CT掃描儀檢測(cè)骨骼病變;尾靜脈注射PBS,cisplatin,CIS-lipsomes和RGD-CIS-liposomes 2天,7天和14天后,取出肝和脾進(jìn)行HE染色。(2)TEM確定熱敏脂質(zhì)體的形態(tài)和大小,DLS確定脂質(zhì)體的粒徑,PDI和zeta電位;熒光分光光度計(jì)確定脂質(zhì)體的包封率和釋放曲線;MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力;根據(jù)阿霉素(DOX)的自身熒光確定細(xì)胞對(duì)藥物的攝取;鈣黃綠素染活細(xì)胞法;尾靜脈注射藥物7天和14天后,取出心,肝和脾進(jìn)行HE染色。結(jié)果(1)順鉑脂質(zhì)體為大小均勻的球體;隨著脂質(zhì)體和順鉑比例的降低(順鉑濃度的上升),脂質(zhì)體的負(fù)載率(LE%)增加而包封率(EP%)降低;FCM和CLSM實(shí)驗(yàn)結(jié)果都表明,脂質(zhì)體可以被RM-1細(xì)胞內(nèi)化,且cRGDyk修飾的脂質(zhì)體更容易被細(xì)胞內(nèi)化;MTT結(jié)果表明RGD-CIS-liposomes具有更強(qiáng)的細(xì)胞毒性;Cisplatin的半衰期短,體內(nèi)清除率快,藥物在肝和脾中聚集的更多,24 h時(shí)各組織中cisplatin的含量比2 h低得多,而CIS-liposomes和RGD-CIS-liposomes的濃度幾乎沒(méi)有變化,所以脂質(zhì)體藥物在體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間較長(zhǎng);IVIS結(jié)果表明兩種藥物都開(kāi)始在腫瘤部位聚集,但RGD修飾的脂質(zhì)體在腫瘤部位聚集得更多;PBS,cisplatin,CIS-liposomes和cRGDyk四組之間行為學(xué)并沒(méi)有顯著性差異,而RGD-CIS-liposomes與其他四組在第18,20,22天都有顯著性差異,在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中各組小鼠體重沒(méi)有明顯的變化;CT結(jié)果表明RGD-CIS-liposomes可以抑制骨質(zhì)破壞;給藥14天后,cisplatin組的肝組織發(fā)生嚴(yán)重病變,CIS-liposomes和RGD-CIS-liposomes組并沒(méi)有明顯的毒性。(2)熱敏脂質(zhì)體在過(guò)熱的條件下(43℃)下會(huì)促進(jìn)藥物的釋放;MTT結(jié)果顯示將光熱療與化療結(jié)合后,對(duì)細(xì)胞的損傷最強(qiáng);細(xì)胞中藥物的釋放說(shuō)明了在過(guò)熱條件下可以促進(jìn)藥物的釋放;鈣黃綠素染活細(xì)胞法也進(jìn)一步證明了光熱療結(jié)合化療后對(duì)細(xì)胞的損傷最強(qiáng)。HE結(jié)果顯示14天后DOX組肝和心都有嚴(yán)重病變。結(jié)論(1)在治療前列腺癌骨轉(zhuǎn)移瘤的模型中,由于cRGDyk和順鉑的靶向性以及協(xié)同抗腫瘤效果,RGD連接的順鉑脂質(zhì)體能抑制腫瘤生長(zhǎng),緩解疼痛,提高生存率,從而提高其治療效果。(2)光熱療-化療能抑制前列腺癌細(xì)胞的增殖。
【關(guān)鍵詞】：骨轉(zhuǎn)移瘤 RGD肽 脂質(zhì)體 藥物傳輸
【學(xué)位授予單位】：南通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R737.25
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-12
• 第一章 緒論12-15
• 第二章：材料與方法15-27
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料15-18
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物15
• 2.1.2 細(xì)胞株15
• 2.1.3 試劑15-16
• 2.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器16-17
• 2.1.5 溶液的配制17-18
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法18-27
• 2.2.1 RGD修飾的順鉑脂質(zhì)體對(duì)骨轉(zhuǎn)移瘤的治療作用18-24
• 2.2.1.1 脂質(zhì)體的制備18-19
• 2.2.1.2 脂質(zhì)體的表征19-20
• 2.2.1.3 細(xì)胞培養(yǎng)20-21
• 2.2.1.4 細(xì)胞攝取以及脂質(zhì)體的靶向性能21
• 2.2.1.5 MTT檢測(cè)細(xì)胞活力21-22
• 2.2.1.6 骨轉(zhuǎn)移瘤動(dòng)物模型22
• 2.2.1.7 藥代動(dòng)力學(xué)和組織分布22
• 2.2.1.8 體內(nèi)近紅外熒光成像22-23
• 2.2.1.9 疼痛行為檢測(cè)23
• 2.2.1.10 計(jì)算機(jī)斷層掃描（CT）評(píng)估23
• 2.2.1.11 安全性評(píng)估23-24
• 2.2.1.12 數(shù)據(jù)分析24
• 2.2.2 熱敏脂質(zhì)體對(duì)骨轉(zhuǎn)移瘤的光熱療-化療的協(xié)同治療效果24-27
• 2.2.2.1 DOX-TSL的制備24
• 2.2.2.2 Au NR的制備24
• 2.2.2.3 DOX-TSL和AuNPs的表征24
• 2.2.2.4 DOX-TSL的包封率和釋放曲線24-25
• 2.2.2.5 MTT檢測(cè)細(xì)胞活性25
• 2.2.2.6 細(xì)胞在不同條件對(duì)DOX的攝取25
• 2.2.2.7 鈣黃綠素染活細(xì)胞法25-26
• 2.2.2.8 安全性評(píng)估26
• 2.2.2.9 數(shù)據(jù)處理與分析26-27
• 第三章 結(jié)果27-48
• 3.1 RGD修飾的順鉑脂質(zhì)體對(duì)骨轉(zhuǎn)移瘤的治療作用27-42
• 3.1.1 脂質(zhì)體的表征27-30
• 3.1.2 RGD修飾提高脂質(zhì)體的靶向性30-32
• 3.1.3 cRGDyk修飾能增加脂質(zhì)體對(duì)RM-1 細(xì)胞的毒性作用32-33
• 3.1.4 不同藥物對(duì)藥代動(dòng)力學(xué)和組織分布的影響33-36
• 3.1.5 RGD修飾能提高脂質(zhì)體的體內(nèi)靶向性36-37
• 3.1.6 不同藥物傳輸系統(tǒng)對(duì)前列腺癌骨轉(zhuǎn)移瘤小鼠行為及存活的影響37-40
• 3.1.7 安全性評(píng)估40-42
• 3.2 熱敏脂質(zhì)體在細(xì)胞水平上能抑制前列腺癌細(xì)胞的增殖42-48
• 3.2.1 熱敏脂質(zhì)體的表征42
• 3.2.2 阿霉素脂質(zhì)體的釋放42-43
• 3.2.3 光熱療-化療能加劇對(duì)RM-1 細(xì)胞的毒性43-44
• 3.2.4 藥物在不同時(shí)間點(diǎn)的釋放44-45
• 3.2.5 光熱療-化療能抑制RM-1 細(xì)胞的增殖45-46
• 3.2.6 安全性評(píng)估46-48
• 第四章 討論48-51
• 第五章 結(jié)論51-52
• 參考文獻(xiàn)52-55
• 英文縮詞詞表55-56
• 綜述56-69
• 綜述參考文獻(xiàn)65-69
• 在攻讀碩士學(xué)位期間公開(kāi)發(fā)表的論文69-70
• 致謝70

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本文編號(hào)：1134718