本文關(guān)鍵詞：慢病毒介導BMPR Ⅱ基因沉默對人肝癌移植瘤生長的影響

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【摘要】：目的:探討B(tài)MPR II基因RNA干擾(RNAi)的重組慢病毒載體對人肝癌HepG2細胞裸鼠移植瘤BMPR II基因表達和移植瘤生長的影響。方法:1、前期研究已明確了具有下調(diào)BMPR II基因的siRNA干擾序列,設(shè)計并合成shRNA oligo,退火后構(gòu)建入干擾慢病毒載體p L/shRNA/F-BMPR II,用構(gòu)建的慢病毒載體p L/shRNA/F-BMPR II轉(zhuǎn)染293T細胞,包裝慢病毒,并用熒光法測定滴度,用包裝的pL/shRNA/F-BMPR II干擾慢病毒侵染HepG2細胞。2、通過實時定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)、蛋白印跡(Western Blot)技術(shù)檢測慢病毒轉(zhuǎn)染后各組細胞中BMPR II mRNA及蛋白水平表達的變化,明確處理后BMPR II沉默的效果。3、建立人肝癌HepG2細胞裸鼠移植瘤模型,隨機分成實驗組、陰性對照組和空白對照組。隔天1次向各組動物腫瘤內(nèi)分別注射BMPR II shRNA慢病毒顆粒、攜帶無效序列的慢病毒顆粒和0.9%氯化鈉溶液0.2 ml,共5次,測量各組腫瘤體積的大小,繪制腫瘤生長曲線,13天后處死裸鼠。4、應(yīng)用Western blot及免疫組化技術(shù)檢測移植瘤中BMPR II蛋白水平表達。結(jié)果:1、qRT-PCR及Western bolt檢測結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)染組與空白對照組及陰性對照組相比,BMPR II mRNA及蛋白表達水平明顯下調(diào),差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。2、繪制裸鼠移植瘤生長曲線顯示,與空白對照組和陰性對照組相比,實驗組腫瘤生長速度明顯減慢(P0.05);空白對照組和陰性對照組相比,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)�？瞻讓φ战M和陰性對照組剝脫的瘤體體積分別為(1274.6±133.02)mm3和(1255.2±130.05)mm3,而實驗組剝脫的瘤體體積為(328.6±87.72)mm33、Western blot及免疫組化技術(shù)檢測顯示:實驗組與空白對照組及陰性對照組相比,移植瘤組織BMPR II蛋白表達明顯下降,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),而空白對照組和陰性對照組移植瘤組織相比,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論:1、BMPR II shRNA慢病毒載體轉(zhuǎn)染入人肝癌HepG2細胞后,可有效抑制BMPR-ⅡmRNA及蛋白在細胞內(nèi)的表達。2、BMPR II shRNA慢病毒載體瘤內(nèi)注射可抑制人肝癌HepG2細胞裸鼠移植瘤的生長。
【關(guān)鍵詞】：慢病毒載體 RNA干擾 BMPR II 肝癌HepG2細胞 移植瘤
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-11
• 第1章 引言11-13
• 第2章 材料與方法13-32
• 2.1 研究所需材料13-17
• 2.1.1 細胞株13
• 2.1.2 裸鼠13
• 2.1.3 主要試劑13-14
• 2.1.4 自配試劑14-16
• 2.1.5 主要儀器設(shè)備16-17
• 2.2 實驗方法17-32
• 2.2.1 器材的準備17
• 2.2.2 細胞培養(yǎng)17-19
• 2.2.3 細胞轉(zhuǎn)染19-22
• 2.2.4 qRT-PCR分析轉(zhuǎn)染后目的基因的表達22-26
• 2.2.5 Western blot檢測轉(zhuǎn)染后各組細胞中BMPR Ⅱ蛋白的表達情況26-29
• 2.2.6 裸鼠移植瘤實驗29-30
• 2.2.7 Western bolt檢測裸鼠移植瘤中BMPR Ⅱ蛋白的表達情況30
• 2.2.8 免疫組化檢測裸鼠移植瘤中BMPR Ⅱ蛋白表達30-31
• 2.2.9 統(tǒng)計學分析31-32
• 第3章 結(jié)果32-37
• 3.1 穩(wěn)轉(zhuǎn)效率檢測32
• 3.2 定量qRT -PCR檢測慢病毒載體BMPR Ⅱ mRNA干擾效率32-33
• 3.3 Western blot檢測慢病毒載體BMPR Ⅱ蛋白干擾效率33-34
• 3.4 人肝癌G2細胞裸鼠移植瘤生長情況34-35
• 3.5 Western blot檢測裸鼠移植瘤組織內(nèi)BMPR Ⅱ蛋白的表達情況35
• 3.6 免疫組化結(jié)果35-37
• 第4章 討論37-42
• 第5章 結(jié)論與展望42-43
• 5.1 結(jié)論42
• 5.2 展望42-43
• 致謝43-44
• 參考文獻44-46
• 攻讀學位期間的研究成果46-47
• 綜述47-53
• 參考文獻51-53

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

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本文編號：1112609