本文關(guān)鍵詞：一株可應(yīng)用于嵌合體抗原受體基因修飾的細(xì)胞治療技術(shù)的CD19單克隆抗體的篩選與鑒定

  更多相關(guān)文章： 單克隆抗體 嵌合抗原受體 NK-92MI細(xì)胞 CD19 B細(xì)胞淋巴瘤

【摘要】：目的利用鼠雜交瘤技術(shù)篩選和制備治療性CD19單克隆抗體,并探討基于獲得的CD19 scFv序列構(gòu)建的CD19-CAR(pCD19-CAR)是否能特異性殺傷CD19陽(yáng)性B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞。方法利用偶聯(lián)多肽免疫小鼠制備CD19單克隆抗體,然后用基因測(cè)序的方法獲得抗體的序列。分析抗體序列,并通過(guò)基因合成和分子克隆技術(shù)構(gòu)建pCD19片段,而后將pCD19片段克隆到帶有CAR的慢病毒載體(PG1-CAR-pCDH)上,即pCD19-CAR-pCDH。病毒包裝制備后,將其轉(zhuǎn)染NK-92MI細(xì)胞。最后用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)被pCD19-CAR-pCDH瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的NK-92MI細(xì)胞對(duì)CD19陽(yáng)性細(xì)胞株的殺傷率。結(jié)果(1)成功篩出了特異性強(qiáng)的CD19單克隆抗體—pCD19;(2)用抗體檢測(cè)CD19陽(yáng)性細(xì)胞株Ramos和Raji,結(jié)果顯示Ramos的陽(yáng)性率為84.3%,Raji的陽(yáng)性率為85.6%,與商業(yè)化抗體結(jié)果相似;(3)殺傷結(jié)果顯示未被基因修飾的NK-92MI細(xì)胞對(duì)CD19陽(yáng)性細(xì)胞株Ramos和Raji細(xì)胞的基礎(chǔ)殺傷效率分別為27.6%和21.8%;被pCD19-CAR片段瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的、pCD19-CAR陽(yáng)性率為28.72%的NK-92MI細(xì)胞對(duì)上述兩種細(xì)胞的殺傷效率分別為48.6%和44.1%;對(duì)于CD19陰性細(xì)胞株Jurkat,不論是未被基因修飾的NK-92MI或者是被pCD19-CAR片段修飾過(guò)的NK-92MI,幾乎不存在特異性殺傷,殺傷效率分別為15.5%和17.8%。結(jié)論成功篩選出了具有高度特異性的CD19單克隆抗體,并利用其scFv序列成功構(gòu)建了pCD19-CAR。經(jīng)過(guò)pCD19-CAR片段修飾的NK-92MI細(xì)胞對(duì)CD19陽(yáng)性細(xì)胞株的殺傷明顯高于未被基因修飾過(guò)的NK-92MI細(xì)胞,說(shuō)明被pCD19-CAR修飾過(guò)的NK-92MI細(xì)胞能特異性的識(shí)別CD19抗原并殺傷CD19陽(yáng)性的腫瘤細(xì)胞株,顯示出其在對(duì)CD19陽(yáng)性的B細(xì)胞淋巴瘤的免疫治療中的潛力。
【關(guān)鍵詞】：單克隆抗體 嵌合抗原受體 NK-92MI細(xì)胞 CD19 B細(xì)胞淋巴瘤
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R733.1
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-7
• 引言7-10
• 實(shí)驗(yàn)材料10-14
• 1.1 實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞系10
• 1.2 主要試劑與材料10-11
• 1.3 主要儀器與設(shè)備11
• 1.4 主要試劑的配制11-14
• 實(shí)驗(yàn)方法14-26
• 2.1 CD19多肽設(shè)計(jì)14
• 2.2 多肽的偶聯(lián)14
• 2.3 CD19鼠源單克隆抗體的制備14-17
• 2.4 小鼠雜交瘤細(xì)胞的抗體基因測(cè)序17-21
• 2.5 構(gòu)建PCD19-CAR-PCDH21
• 2.6 細(xì)胞培養(yǎng)21-22
• 2.7 慢病毒包裝22-24
• 2.8 慢病毒轉(zhuǎn)染NK-92MI細(xì)胞24-25
• 2.9 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)NK-92MI細(xì)胞的GFP陽(yáng)性率25
• 2.10 細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)25-26
• 結(jié)果26-36
• 3.1 篩選獲得CD19單克隆抗體26-30
• 3.2 PCD19-CAR修飾的NK-92MI細(xì)胞對(duì)CD19陽(yáng)性的B淋巴細(xì)胞瘤細(xì)胞株的殺傷30-36
• 討論36-39
• 參考文獻(xiàn)39-43
• 綜述43-61
• 參考文獻(xiàn)54-61
• 碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文61-62
• 縮略詞表62-63
• 致謝63-65

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 段薇,張健,鄭劍玲,蘇丹,王美慧;抗呼吸道合胞病毒單克隆抗體的研制[J];微生物學(xué)雜志;2004年05期

2 張唯敏;;新單克隆抗體已應(yīng)用于臨床[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(腫瘤學(xué)分冊(cè));1986年04期

3 遲素敏;;單克隆抗體的制備和鑒定[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;1986年Z1期

4 張明杰;單克隆抗體在農(nóng)業(yè)中有何用途?[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;1991年02期

5 孫國(guó)鳳;;單克隆抗體藥品在日本通過(guò)調(diào)查會(huì)[J];生物技術(shù)通報(bào);1991年09期

6 ;一種制備單克隆抗體的更有效而經(jīng)濟(jì)的方法[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊(cè));1998年05期

7 任新玲,沈麗英,金伯泉,井曉梅,王睿;表皮生長(zhǎng)因子受體單克隆抗體抗肺癌作用的研究[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2000年03期

8 章波,陳惠鵬,范國(guó)才,陳吉中,王清明;抗人肝再生增強(qiáng)因子單克隆抗體的研制[J];免疫學(xué)雜志;2000年06期

9 李鳳英,陳名道,顧衛(wèi)瓊,陳春榮,唐金鳳;人瘦素單克隆抗體的鑒定[J];放射免疫學(xué)雜志;2000年02期

10 陳志南,蔣建利;單克隆抗體——從鼠到人[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊(cè));2000年03期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 徐爽;安萬(wàn)新;胡榮花;葉萍;孟祥昱;;不同方法收集單克隆抗體濃縮后的比較[A];中國(guó)輸血1999年年會(huì)暨紀(jì)念A(yù)BO血型發(fā)現(xiàn)100周年學(xué)術(shù)交流論文專輯[C];1999年

2 劉大維;高斌;;狂犬病毒單克隆抗體的研制[A];2010年中國(guó)科學(xué)院微生物研究所博士后學(xué)術(shù)年會(huì)暨第二屆博誼論壇論文摘要集[C];2011年

3 陳炅;;治療性單克隆抗體的作用靶點(diǎn)及臨床應(yīng)用[A];2013年中國(guó)臨床藥學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)暨第九屆臨床藥師論壇論文集[C];2013年

4 徐爽;徐焱;;單克隆抗體在輸血領(lǐng)域的應(yīng)用探討[A];中國(guó)輸血1999年年會(huì)暨紀(jì)念A(yù)BO血型發(fā)現(xiàn)100周年學(xué)術(shù)交流論文專輯[C];1999年

5 彭虹;舒翠麗;劉永全;王華;高杰英;;抗人α4單克隆抗體的制備和鑒定[A];中國(guó)免疫學(xué)會(huì)第四屆學(xué)術(shù)大會(huì)會(huì)議議程及論文摘要集[C];2002年

6 祭芳;史建榮;陳正賢;徐劍宏;陸瓊嫻;;抗脫氧雪腐鐮刀菌烯醇單克隆抗體的制備[A];中國(guó)植物病理學(xué)會(huì)2008年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2008年

7 張光波;董秋明;於葛華;李文香;張學(xué)光;;一株鼠抗人4-1BB單克隆抗體的研制及其生物學(xué)功能的鑒定[A];第六屆全國(guó)免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2008年

8 張錦超;楊金菊;吳瓊;李戩;陳勇;李輝;宋穎博;羅曉彤;任飛;高媛;杜雪梅;鞠艷芳;王兆卿;王京蘭;徐菡;柳曉蘭;崔玉芳;錢小紅;賀福初;高建恩;孫啟鴻;;高效鑒定單克隆抗體所識(shí)別未知抗原技術(shù)平臺(tái)的建立及應(yīng)用[A];中國(guó)蛋白質(zhì)組學(xué)第二屆學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要論文集[C];2004年

9 楊永昌;王北寧;賴春寧;黎燕;;抗血小板單克隆抗體重組質(zhì)粒的構(gòu)建及其在大腸桿菌中的表達(dá)[A];第五次全國(guó)中青年檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

10 孫效;高新;尚明美;宋海峰;湯仲明;;抗胰高血糖素樣肽單克隆抗體的制備[A];第八次全國(guó)藥物與化學(xué)異物代謝學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2006年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 記者 尹暉;單克隆抗體研發(fā)進(jìn)入新階段[N];無(wú)錫日?qǐng)?bào);2010年

2 編譯 李勇;單克隆抗體：生物類似藥開(kāi)發(fā)的秘鑰[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2014年

3 廣凱;單克隆抗體藥物將有大發(fā)展[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2000年

4 ;單克隆抗體應(yīng)用前景看好[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2002年

5 黃東臨;羅氏叱咤單克隆抗體市場(chǎng)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2005年

6 ;單克隆抗體異軍突起[N];中國(guó)高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2003年

7 尹暉;全球最大單克隆抗體研制基地落戶無(wú)錫[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2010年

8 尹暉;最大單克隆抗體研制項(xiàng)目在馬山奠基[N];無(wú)錫日?qǐng)?bào);2010年

9 數(shù)文;羅氏買進(jìn)抗癌單克隆抗體[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2008年

10 毛文波;單克隆抗體：征服癌癥的新方法[N];科技日?qǐng)?bào);2004年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 魏德強(qiáng);以植物病毒為載體建立新型的載體—半抗原免疫體系[D];東北林業(yè)大學(xué);2014年

2 王璞;以CD146為靶點(diǎn)的胃癌早期診斷多功能納米探針的相關(guān)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

3 張瀟;抗EV71病毒單克隆抗體及柯薩奇病毒病毒樣顆粒的制備研究[D];北京工業(yè)大學(xué);2015年

4 鄒年莉;雞傳染性支氣管炎病毒Sczy3 S1蛋白中和性單克隆抗體的制備及其抗原表位的鑒定[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

5 程林;人△42PD1特異性單克隆抗體的制備及其免疫功能的初步探討[D];南京大學(xué);2014年

6 王海;直腸癌上調(diào)表達(dá)蛋白eEF2單克隆抗體制備及臨床應(yīng)用[D];吉林大學(xué);2016年

7 孫佳善;禽流感、新城疫和犬瘟熱病毒單克隆抗體篩選策略比較及應(yīng)用研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

8 胡新韜;HIV-1B'和CRF07_BC慢性感染者中和抗體應(yīng)答特征及CD4bs抗原特異性單克隆抗體分離鑒定初步研究[D];中國(guó)疾病預(yù)防控制中心;2012年

9 白宇;馬γ-干擾素單克隆抗體的制備及細(xì)胞免疫評(píng)價(jià)方法的研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2008年

10 余自強(qiáng);抗血小板膠原受體糖蛋白VI單克隆抗體的制備和功能研究[D];蘇州大學(xué);2005年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王曉磊;流行性乙型腦炎病毒單克隆抗體的制備與prM-E蛋白抗原捕獲ELISA檢測(cè)方法的建立[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2015年

2 葛新杰;NT-proBNP單克隆抗體的研制及ELISA定量檢測(cè)方法的建立[D];鄭州大學(xué);2015年

3 張標(biāo);鼠抗人B7-H4受體單克隆抗體的研制及其生物學(xué)功能的初步研究[D];蘇州大學(xué);2015年

4 鄭瑩;CD123在兒童B系急性淋巴細(xì)胞性白血病中的表達(dá)與抗人CD123單克隆抗體的制備[D];蘇州大學(xué);2015年

5 董倩;JEV NS2B蛋白單克隆抗體的制備及其應(yīng)用[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

6 薛翼鵬;豬CR1-like單克隆抗體的制備及CR1-like在豬紅細(xì)胞膜表面分布狀態(tài)的研究[D];山西農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

7 繆歡;JEV PrM/M蛋白單克隆抗體的制備及JEV P3感染U251細(xì)胞蛋白質(zhì)組學(xué)分析[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

8 仲曉麗;犬副流感病毒單克隆抗體的制備及單鏈抗體蛋白的表達(dá)和活性鑒定[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

9 劉靜靜;綿羊早孕因子單克隆抗體的制備及鑒定[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

10 安蓮;B型流感嗜血桿菌寡糖綴合物疫苗的免疫活性研究相關(guān)單克隆抗體的制備[D];山東大學(xué);2015年

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本文編號(hào)：1106172