本文關(guān)鍵詞：Carfilzomib聯(lián)合z-VAD-fmk對腫瘤惡病質(zhì)的防治作用及其分子機(jī)制研究

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【摘要】：目的本實(shí)驗(yàn)通過構(gòu)建腫瘤惡病質(zhì)小鼠模型,評(píng)估聯(lián)合蛋白酶體抑制劑Carfilzomib與caspase抑制劑z-VAD-fink在不同時(shí)間點(diǎn)開始單獨(dú)給藥或聯(lián)合給藥對腫瘤惡病質(zhì)的防治作用,并初步探討其作用的分子機(jī)制,旨在為預(yù)防腫瘤惡病質(zhì)提供實(shí)驗(yàn)與理論依據(jù)。方法185只BALB/c雄性小鼠隨機(jī)分為8組：健康對照組(HC=10只)；CFZ預(yù)防組(CP=25只)、z-VAD-fink預(yù)防組(ZP=25只)、CFZ和z-VAD-fink聯(lián)合預(yù)防組(UP=25只)；CFZ治療組(CT=25只)、z-VAD-fink治療組(ZT=25只)、CFZ和z-VAD-fink聯(lián)合治療組(UT=25只)；腫瘤惡病質(zhì)組(CC=25只)。’荷瘤鼠于前腋皮下接種CT26細(xì)胞O.1ml(約1×106個(gè)),構(gòu)建腫瘤惡病質(zhì)模型；HC注射等量PBS。每天定時(shí)觀察各組小鼠惡病質(zhì)發(fā)生發(fā)展進(jìn)程(小鼠體質(zhì)量、毛發(fā)、精神狀態(tài)、攝食量等),采用紅外監(jiān)控系統(tǒng)(Tokyo, Japan)測量小鼠自發(fā)性生理活動(dòng)。接種后第5天預(yù)防組開始單獨(dú)或聯(lián)合給予CFZ和z-VAD-fmk用藥,治療組和陰性對照組給予等體積生理鹽水；第12天,小鼠呈惡病質(zhì)狀態(tài),治療組開始單獨(dú)或聯(lián)合給予CFZ和z-VAD-fink用藥,其余組繼續(xù)原處理；第19天每組隨機(jī)抽取10只小鼠,測血清葡萄糖,甘油三酯,白蛋白和總蛋白的含量；ELISA法檢測血清中腎素和ANGII含量：real-timePCR檢測腓腸肌ATF2,Caspase3,Bax,Bcl-xl,MuRFl和MAFbx的mRNA表達(dá)水平,Western blot檢測腓腸肌ATF2,pATF2, Caspase3, Bax和Bcl-xl蛋白表達(dá)水平。荷瘤組剩余小鼠繼續(xù)原處理至死亡,記錄每只小鼠死亡時(shí)間。采用SPSS19.0軟件分析數(shù)據(jù)。結(jié)果1小鼠模型構(gòu)建成功接種CT26細(xì)胞后第5天,所有荷瘤小鼠前腋皮下均可捫及腫瘤結(jié)節(jié)；第12天治療組和惡病質(zhì)組提前進(jìn)入惡病質(zhì)期,攝食量顯著降低,毛發(fā)變暗、無光澤、倒立,精神不振,自發(fā)性生理活動(dòng)明顯減少,體重顯著下降；預(yù)防組明顯延緩進(jìn)入惡病質(zhì)時(shí)間(P0.05)；第19天,與CC比較,預(yù)防組和治療組小鼠的惡病質(zhì)癥狀有所改善,以聯(lián)合預(yù)防組改善最為明顯。2荷瘤小鼠體質(zhì)量和腫瘤負(fù)荷變化接種CT26細(xì)胞后第5天各組間小鼠體質(zhì)量無差異(P0.05)；第12天,荷瘤鼠體質(zhì)量均有不同程度降低,但治療組和惡病質(zhì)組明顯低于預(yù)防組(P0.05)；第19天,藥物干預(yù)組體質(zhì)量均小于健康對照組(P0.05)、大于惡病質(zhì)組(P0.05),單獨(dú)干預(yù)組體質(zhì)量低于聯(lián)合干預(yù)組(P0.05),單獨(dú)預(yù)防和治療組之間體質(zhì)量無差異(P0.05)。CFZ抑制腫瘤生長顯著優(yōu)于z-VAD-fink(P0.05),除此之外,腓腸肌質(zhì)量、腓腸肌橫切面積、腫瘤質(zhì)量和腫瘤體積變化趨勢均與體質(zhì)量變化相同。3荷瘤小鼠自發(fā)性生理活動(dòng)和生存時(shí)間變化與HC比較,CC小鼠顯著降低了自發(fā)性生理活動(dòng)(P0.05),CFZ與z-VAD-fmk預(yù)防可以提高荷瘤小鼠的自發(fā)性活動(dòng)量,且CFZ的作用明顯好于z-VAD-fmk(P0.05),CFZ與z-VAD-fmk聯(lián)合作用明顯強(qiáng)于單獨(dú)用藥(P0.05),而當(dāng)惡病質(zhì)已經(jīng)形成后再治療,效果顯著降低。荷瘤小鼠Kaplan-Meier生存曲線可見CFZ與z-VAD-fmk早期預(yù)防作用可以顯著提高中位數(shù)生存時(shí)間,且單獨(dú)用CFZ的作用優(yōu)于z-VAD-fmk(P0.05).4荷瘤小鼠血清生化代謝變化與HC比較,接種后第19天荷瘤小鼠均降低了血清葡萄糖、白蛋白、總蛋白水平(P0.05),升高了甘油三酯水平(P0.05)；與CC比較,CFZ聯(lián)合z-VAD-fmk作用升高了血清葡萄糖、白蛋白、總蛋白水平(P0.05),降低了甘油三酯水平(P0.05)；預(yù)防組效果明顯好于治療組(P0.05),CFZ與z-VAD-fmk聯(lián)合作用優(yōu)于單獨(dú)用藥(P0.05),且CFZ作用顯著優(yōu)于z-VAD-fmk(P0.05)。5荷瘤小鼠RAS變化與HC比較,所有荷瘤小鼠血清腎素和ANG II水平均增高(P0.05)；CFZ聯(lián)合z-VAD-fmk作用明顯低于單獨(dú)用藥(P0.05),且CFZ作用明顯優(yōu)于z-VAD-fmk(P0.05)；CFZ預(yù)防作用優(yōu)于治療作用(P0.05),z-VAD-fmk沒有此變化(P0.05)。與HC比較,所有荷瘤組小鼠腓腸肌ATF2的mRNA和蛋白表達(dá)水平均增高(P0.05),且給藥組ATF2表達(dá)水平均低于CC(P0.05),但是預(yù)防組之間與治療組之間表達(dá)水平差異較小(P0.05)；CFZ組pATF2水平高于z-VAD-fink組(P0.05),且pATF2/ATF2比值增高(P0.05)。6荷瘤小鼠骨骼肌凋亡和泛素蛋白酶體系統(tǒng)變化與CC比較,CFZ聯(lián)合z-VAD-fink作用,荷瘤鼠BAX和caspase3的mRNA和蛋白表達(dá)水平均降低(P0.05),BCL-xL的mRNA和蛋白表達(dá)水平均增加(P0.05),BAX/BCL-xL比值降低(P0.05)；CFZ聯(lián)合z-VAD-fmk作用明顯優(yōu)于單獨(dú)作用(P0.05),預(yù)防作用明顯優(yōu)于治療作用(P0.05),CFZ與z-VAD-fink組間沒有顯著差別(P0.05)。同樣,與CC比較,CFZ聯(lián)合z-VAD-fink均可抑制荷瘤組MuRF1和MAFbx的mRNA表達(dá)(P0.05),CFZ抑制作用明顯強(qiáng)于z-VAD-fmk(P0.05)。結(jié)論BALB/c雄性小鼠接種CT26細(xì)胞,可以誘導(dǎo)源于惡性腫瘤的惡病質(zhì)綜合癥,動(dòng)物模型構(gòu)建成功。CFZ聯(lián)合z-VAD-fmk作用可以有效延緩腫瘤惡病質(zhì)進(jìn)程,且聯(lián)合用藥效果優(yōu)于單獨(dú)用藥,早期預(yù)防用藥作用效果優(yōu)于治療作用,CFZ作用優(yōu)于z-VAD-fink作用。CFZ聯(lián)合z-VAD-fink作用緩解腫瘤惡病質(zhì)可能通過抑制pATF2降解,以致pATF2/ATF2比值增高,進(jìn)而抑制RAS；同時(shí)促進(jìn)抗凋亡因子如BCL-xL表達(dá)水平增高,促凋亡因子如BAX、caspase3表達(dá)水平降低。共同抑制蛋白質(zhì)降解通路和腫瘤自身生長以緩解腫瘤惡病質(zhì)。
【關(guān)鍵詞】：腫瘤惡病質(zhì) Carfilzomib z-VAD-fmk RAs 泛素蛋白酶體系統(tǒng)
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R73-36
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-6
• 中文摘要6-11
• 英文摘要11-18
• 前言18-20
• 第一部分 Carfilzomib聯(lián)合Z-VAD-fmk對腫瘤惡病質(zhì)的防治作用20-28
• 1 材料與方法20-21
• 2 結(jié)果21-25
• 3 討論25-28
• 第二部分 Carfildzomib聯(lián)合Z-VAD-fmk緩解腫瘤惡病質(zhì)的分子機(jī)制28-40
• 1 材料與方法28-29
• 2 結(jié)果29-35
• 3 討論35-40
• 全文總結(jié)40-41
• 參考文獻(xiàn)41-44
• 文獻(xiàn)綜述：腫瘤惡病質(zhì)研究進(jìn)展44-52
• 參考文獻(xiàn)48-52
• 致謝52-53
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文53

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本文編號(hào)：1096041