本文關鍵詞：MTSS1基因與宮頸癌相關性的實驗研究

  更多相關文章： 宮頸癌 轉(zhuǎn)移抑制基因1 臨床分期 Shh信號通路 細胞增殖

【摘要】：研究背景宮頸癌是婦科最常見的惡性腫瘤,發(fā)病率逐年增加,盡管早期發(fā)現(xiàn)并結(jié)合根治性手術(shù)可提高宮頸癌患者的預后,但仍有部分患者會出現(xiàn)局部復發(fā)或遠處轉(zhuǎn)移,因而了解宮頸癌發(fā)生發(fā)展的分子機制,參與指導臨床診斷與治療顯得尤為迫切。有研究指出轉(zhuǎn)移抑制基因1(Metastasis suppressor 1, MTSS1)與多種惡性腫瘤的發(fā)展及轉(zhuǎn)移有關,因此研究MTSS1基因在宮頸癌中的表達變化及其作用機制,有望為宮頸癌臨床診斷、治療、預后評估以及新藥研發(fā)應用提供理論依據(jù)。目的檢測正常及宮頸癌組織中MTSS1基因的表達情況,分析該基因在各組織中表達變化與臨床病理因素間的關系;探討宮頸癌中MTSS1基因與Shh信號通路的關系；檢測順鉑(cisplatin, DDP)對人宮頸癌Hela細胞中MTSS1基因與信號通路ERK和AKT表達的影響,探討MTSS1在宮頸癌發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程中的作用及分子機制。方法1.應用實時熒光定量PCR (q-PCR)和蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot)檢測不同宮頸組織中MTSS1基因及其蛋白的表達水平。2.應用q-PCR檢測不同分期的宮頸癌組織中MTSS1基因及Shh信號通路相關基因(Ptch、Smo及Gli1)的表達;Western跡法及免疫組化檢測MTSS1及Glil蛋白的表達情況。3.體外培養(yǎng)宮頸癌Hela細胞,分別用不同濃度的順鉑對Hela細胞進行24 h和48 h的處理,CCK-8法檢測藥物對細胞毒性的影響,q-PCR檢測藥物對各組細胞內(nèi)MTSS1基因的表達影響,并通過Western印跡法檢測MTSS1蛋白的表達改變以及ERK和AKT蛋白磷酸化水平以鑒定細胞增殖能力。結(jié)果1. q-PCR結(jié)果顯示,中晚期宮頸癌組織中MTSS1基因表達水平明顯高于正常宮頸組織及早期宮頸癌組織(P0.01),三組間有明顯統(tǒng)計學差異(P0.01)：Western印跡結(jié)果顯示,MTSS1蛋白的表達在宮頸癌組織中與病患年齡、癌組織分化程度以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無明顯相關性(P0.05),但與臨床分期相關(P0.01)。2q-PCR結(jié)果顯示,隨著臨床分期的升高,MTSS1、 Ptch、Smo及Glil基因表達水平逐漸升高,其中中晚期宮頸癌組中四個基因mRNA表達量均最高(P0.01)：Western印跡結(jié)果顯示,中晚期宮頸癌組中MTSS1及Gli1蛋白表達均高于早期宮頸癌組及正常宮頸組(P0.05),且各組間差異有統(tǒng)計學意義；免疫組化檢測MTSS1 及Gli1蛋白在宮頸癌組較正常組中的表達增強,其中中晚期宮頸癌組中兩者多為強陽性表達。3.不同濃度DDP處理Hela細胞24 h或48 h, CCK-8法測得DDP明顯抑制Hela細胞增殖(P0.05),細胞的半數(shù)抑制濃度(IC50)值分別為4.14 μmol·L-1和11.82μmol·L-1; q-PCR結(jié)果顯示,MTSS1勺基因表達水平與DDP間存在明顯的濃度效應關系(相關系數(shù)r24h=-0.965, P0.01;r48h=-0.953, P0.01); Western印跡法結(jié)果表明,p-ERK. p-AKT及胞內(nèi)MTSS1蛋白表達水平均隨DDP濃度增加顯著下降(P0.01)。結(jié)論1. MTSS1的表達水平與宮頸癌的臨床分期有相關性,該基因可能在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用。2.宮頸癌發(fā)生發(fā)展中MTSS1的表達與Shh信號調(diào)控相一致,均隨癌癥發(fā)展表達增強,可能同為預測宮頸癌發(fā)生發(fā)展的監(jiān)測指標與潛在的治療靶點。3.DDP可能通過下調(diào)MTSS1的表達水平并抑制ERK和AKT信號通路的激活而抑制宮頸癌Hela細胞的增殖。
【關鍵詞】：宮頸癌 轉(zhuǎn)移抑制基因1 臨床分期 Shh信號通路 細胞增殖
【學位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.33
【目錄】：

• 中英文縮略詞表5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-15
• 第一部分 宮頸組織中MTSS1基因的表達15-26
• 一、材料15-16
• 二、實驗方法16-22
• 三、結(jié)果22-24
• 四、討論24-26
• 第二部分 宮頸癌組織MTSS1基因與Shh信號通路的關系26-33
• 一、材料26
• 二、實驗方法26-28
• 三、結(jié)果28-31
• 四、討論31-33
• 第三部分 順鉑對Hela細胞中MTSS1基因及信號通路ERK、AKT表達的影響33-43
• 一、材料33-35
• 二、實驗方法35-37
• 三、結(jié)果37-41
• 四、討論41-43
• 全文總結(jié)43-44
• 參考文獻44-48
• 文獻綜述48-59
• 參考文獻53-59
• 攻讀學位期間發(fā)表文章情況59-60
• 致謝60

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1 徐艷紅;;宮頸癌的致病因素及預防的研究綜述[J];中國實用醫(yī)藥;2009年25期

2 畢建軍;楊慧蘭;;單純皰疹病毒2型與宮頸癌相關性的研究進展[J];實用醫(yī)學雜志;2011年03期

3 孟斐;;組織因子途徑抑制物-2在宮頸癌中表達情況的研究分析[J];中國實用醫(yī)藥;2013年05期

4 劉威;高文霞;;宮頸癌患者組織及血清血管內(nèi)皮生長因子的變化研究[J];中國藥物經(jīng)濟學;2013年04期

5 拉萊·蘇祖克;表皮生長因子受體和轉(zhuǎn)化生長因子-α在宮頸癌中的表達[J];診斷病理學雜志;2000年04期

6 許爭峰,胡婭莉,王迅美,戴魯琴,韓克,束澤寶;宮頸組織標本中端粒酶活性檢測及臨床意義[J];江蘇醫(yī)藥;2001年05期

7 鄒紅燕,姚安梅,楊栓雀,趙西俠;青年宮頸癌相關因素分析[J];陜西腫瘤醫(yī)學;2001年03期

8 張忠福,李輝;宮頸癌合并妊娠的診斷與治療[J];中國實用婦科與產(chǎn)科雜志;2004年07期

9 小松;;宮頸癌已成女性殺手[J];中國醫(yī)藥指南;2004年03期

10 李隆玉,李誠信;宮頸癌的預防及普查[J];繼續(xù)醫(yī)學教育;2005年05期

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1 譚文福;吳緒峰;陳惠禎;;年輕宮頸癌的臨床特征及防治[A];全國子宮頸癌暨湖北省婦科腫瘤專業(yè)委員會第五次婦科腫瘤學術(shù)會議論文匯編[C];2006年

2 王勒渝;;宮頸Ⅰ號栓阻斷宮頸癌發(fā)生的組織病理學、超微結(jié)構(gòu)及免疫組織化學的研究[A];第八屆全國中西醫(yī)結(jié)合腫瘤學術(shù)會議論文集[C];2000年

3 段微;;超高頻無線電波刀治療宮頸癌前病變的研究[A];2000全國腫瘤學術(shù)大會論文集[C];2000年

4 黃妙玲;陳R，

本文編號：1093578