本文關(guān)鍵詞：MTSS1基因與宮頸癌相關(guān)性的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：研究背景宮頸癌是婦科最常見的惡性腫瘤,發(fā)病率逐年增加,盡管早期發(fā)現(xiàn)并結(jié)合根治性手術(shù)可提高宮頸癌患者的預(yù)后,但仍有部分患者會(huì)出現(xiàn)局部復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,因而了解宮頸癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制,參與指導(dǎo)臨床診斷與治療顯得尤為迫切。有研究指出轉(zhuǎn)移抑制基因1(Metastasis suppressor 1, MTSS1)與多種惡性腫瘤的發(fā)展及轉(zhuǎn)移有關(guān),因此研究MTSS1基因在宮頸癌中的表達(dá)變化及其作用機(jī)制,有望為宮頸癌臨床診斷、治療、預(yù)后評(píng)估以及新藥研發(fā)應(yīng)用提供理論依據(jù)。目的檢測(cè)正常及宮頸癌組織中MTSS1基因的表達(dá)情況,分析該基因在各組織中表達(dá)變化與臨床病理因素間的關(guān)系;探討宮頸癌中MTSS1基因與Shh信號(hào)通路的關(guān)系；檢測(cè)順鉑(cisplatin, DDP)對(duì)人宮頸癌Hela細(xì)胞中MTSS1基因與信號(hào)通路ERK和AKT表達(dá)的影響,探討MTSS1在宮頸癌發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程中的作用及分子機(jī)制。方法1.應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR (q-PCR)和蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot)檢測(cè)不同宮頸組織中MTSS1基因及其蛋白的表達(dá)水平。2.應(yīng)用q-PCR檢測(cè)不同分期的宮頸癌組織中MTSS1基因及Shh信號(hào)通路相關(guān)基因(Ptch、Smo及Gli1)的表達(dá);Western跡法及免疫組化檢測(cè)MTSS1及Glil蛋白的表達(dá)情況。3.體外培養(yǎng)宮頸癌Hela細(xì)胞,分別用不同濃度的順鉑對(duì)Hela細(xì)胞進(jìn)行24 h和48 h的處理,CCK-8法檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞毒性的影響,q-PCR檢測(cè)藥物對(duì)各組細(xì)胞內(nèi)MTSS1基因的表達(dá)影響,并通過Western印跡法檢測(cè)MTSS1蛋白的表達(dá)改變以及ERK和AKT蛋白磷酸化水平以鑒定細(xì)胞增殖能力。結(jié)果1. q-PCR結(jié)果顯示,中晚期宮頸癌組織中MTSS1基因表達(dá)水平明顯高于正常宮頸組織及早期宮頸癌組織(P0.01),三組間有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)：Western印跡結(jié)果顯示,MTSS1蛋白的表達(dá)在宮頸癌組織中與病患年齡、癌組織分化程度以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無明顯相關(guān)性(P0.05),但與臨床分期相關(guān)(P0.01)。2q-PCR結(jié)果顯示,隨著臨床分期的升高,MTSS1、 Ptch、Smo及Glil基因表達(dá)水平逐漸升高,其中中晚期宮頸癌組中四個(gè)基因mRNA表達(dá)量均最高(P0.01)：Western印跡結(jié)果顯示,中晚期宮頸癌組中MTSS1及Gli1蛋白表達(dá)均高于早期宮頸癌組及正常宮頸組(P0.05),且各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；免疫組化檢測(cè)MTSS1 及Gli1蛋白在宮頸癌組較正常組中的表達(dá)增強(qiáng),其中中晚期宮頸癌組中兩者多為強(qiáng)陽性表達(dá)。3.不同濃度DDP處理Hela細(xì)胞24 h或48 h, CCK-8法測(cè)得DDP明顯抑制Hela細(xì)胞增殖(P0.05),細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC50)值分別為4.14 μmol·L-1和11.82μmol·L-1; q-PCR結(jié)果顯示,MTSS1勺基因表達(dá)水平與DDP間存在明顯的濃度效應(yīng)關(guān)系(相關(guān)系數(shù)r24h=-0.965, P0.01;r48h=-0.953, P0.01); Western印跡法結(jié)果表明,p-ERK. p-AKT及胞內(nèi)MTSS1蛋白表達(dá)水平均隨DDP濃度增加顯著下降(P0.01)。結(jié)論1. MTSS1的表達(dá)水平與宮頸癌的臨床分期有相關(guān)性,該基因可能在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用。2.宮頸癌發(fā)生發(fā)展中MTSS1的表達(dá)與Shh信號(hào)調(diào)控相一致,均隨癌癥發(fā)展表達(dá)增強(qiáng),可能同為預(yù)測(cè)宮頸癌發(fā)生發(fā)展的監(jiān)測(cè)指標(biāo)與潛在的治療靶點(diǎn)。3.DDP可能通過下調(diào)MTSS1的表達(dá)水平并抑制ERK和AKT信號(hào)通路的激活而抑制宮頸癌Hela細(xì)胞的增殖。
【關(guān)鍵詞】：宮頸癌 轉(zhuǎn)移抑制基因1 臨床分期 Shh信號(hào)通路 細(xì)胞增殖
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.33
【目錄】：

• 中英文縮略詞表5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-15
• 第一部分 宮頸組織中MTSS1基因的表達(dá)15-26
• 一、材料15-16
• 二、實(shí)驗(yàn)方法16-22
• 三、結(jié)果22-24
• 四、討論24-26
• 第二部分 宮頸癌組織MTSS1基因與Shh信號(hào)通路的關(guān)系26-33
• 一、材料26
• 二、實(shí)驗(yàn)方法26-28
• 三、結(jié)果28-31
• 四、討論31-33
• 第三部分 順鉑對(duì)Hela細(xì)胞中MTSS1基因及信號(hào)通路ERK、AKT表達(dá)的影響33-43
• 一、材料33-35
• 二、實(shí)驗(yàn)方法35-37
• 三、結(jié)果37-41
• 四、討論41-43
• 全文總結(jié)43-44
• 參考文獻(xiàn)44-48
• 文獻(xiàn)綜述48-59
• 參考文獻(xiàn)53-59
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況59-60
• 致謝60

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本文編號(hào)：1093578