發(fā)布時(shí)間：2017-10-25 03:13

  本文關(guān)鍵詞：TRPV5、TRPV6對(duì)結(jié)腸癌SW480細(xì)胞生物學(xué)行為的影響

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【摘要】：目的:在TRP超家族中,TRPV5和TRPV6是唯一已知的鈣離子高選擇性通道,因此,本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀(guān)察結(jié)腸癌SW480細(xì)胞TRPV5和TRPV6通道蛋白的表達(dá),并改變TRPV5和TRPV6通道的功能狀態(tài),以觀(guān)察對(duì)結(jié)腸癌SW480細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度及SW480細(xì)胞生長(zhǎng)、凋亡的調(diào)節(jié)作用。旨在研究TRPV5、TRPV6對(duì)結(jié)腸癌SW480細(xì)胞生物學(xué)行為的影響,為進(jìn)一步研究TRPV5、TRPV6在結(jié)腸癌的診斷和治療提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法:(1)采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)、Western-Bolt技術(shù)及細(xì)胞免疫組化技術(shù),檢測(cè)TRPV5/TRPV6激動(dòng)劑1,25(OH)2D3(10-8mol/l)和Ca Cl2(10mmol/l)以及其抑制劑Cu Cl2(100μmol/l)對(duì)結(jié)腸癌SW480細(xì)胞中TRPV5m RNA、TRPV6m RNA及蛋白含量表達(dá)的比較。(2)通過(guò)激動(dòng)劑及抑制劑改變TRPV5和TRPV6通道的功能狀態(tài)后,用高速離子成像系統(tǒng)觀(guān)察TRPV5/TRPV6對(duì)結(jié)腸癌SW480細(xì)胞內(nèi)Ca2+的濃度變化;(3)對(duì)結(jié)腸癌SW480細(xì)胞進(jìn)行同步化處理后,采用細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)(MTT比色法)、細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)(劃痕修復(fù)法)及細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)(生化檢測(cè)Tunel法),觀(guān)察激動(dòng)劑1,25(OH)2D3和Ca Cl2以及抑制劑Cu Cl2對(duì)結(jié)腸癌SW480細(xì)胞增殖、遷移、凋亡的影響。結(jié)果:(1)TRPV5m RNA、TRPV6m RNA及蛋白含量在激動(dòng)劑1,25(OH)2D3組及Ca Cl2組較對(duì)照組表達(dá)明顯增高(P0.05);抑制劑Cu Cl2組較對(duì)照組表達(dá)明顯降低(P0.05);激動(dòng)劑1,25(OH)2D3組與Ca Cl2組比較無(wú)明顯差異(P0.05);激動(dòng)劑1,25(OH)2D3組和Ca Cl2組TRPV5m RNA、TRPV6m RNA及蛋白含量明顯增高,與抑制劑Cu Cl2組比較差異有顯著性(P0.01);(2)在激動(dòng)劑1,25(OH)2D3作用下,結(jié)腸癌SW480細(xì)胞內(nèi)Ca2+的濃度較對(duì)照組增加(P0.05);在抑制劑Cu Cl2作用下,結(jié)腸癌SW480細(xì)胞內(nèi)Ca2+的濃度較對(duì)照組降低(P0.05);(3)激動(dòng)劑1,25(OH)2D3和Ca Cl2對(duì)結(jié)腸癌SW480細(xì)胞有促增殖、遷移及抑制凋亡作用(P0.05),并呈濃度時(shí)間依賴(lài)性;抑制劑Cu Cl2對(duì)結(jié)腸癌SW480細(xì)胞有抑制增殖、遷移及誘導(dǎo)凋亡作用(P0.05),并呈濃度時(shí)間依賴(lài)性。結(jié)論:(1)激動(dòng)劑1,25(OH)2D3和Ca Cl2能使結(jié)腸癌SW480細(xì)胞中TRPV5m RNA、TRPV6m RNA及蛋白的表達(dá)上調(diào);使結(jié)腸癌SW480細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度增加,促進(jìn)結(jié)腸癌SW480細(xì)胞增殖、遷移及抑制其凋亡。(2)抑制劑Cu Cl2能使結(jié)腸癌SW480細(xì)胞中TRPV5 m RNA、TRPV6m RNA及蛋白的表達(dá)下調(diào);使結(jié)腸癌SW480細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度降低;抑制結(jié)腸癌SW480細(xì)胞增殖、遷移及誘導(dǎo)其凋亡。(3)TRPV5、TRPV6在結(jié)腸癌SW480細(xì)胞中均有表達(dá),但以TRPV6較明顯。TRPV5、TRPV6通道蛋白表達(dá)的變化,可能通過(guò)增加或降低細(xì)胞內(nèi)Ca2+含量,進(jìn)一步調(diào)節(jié)結(jié)腸癌SW480細(xì)胞生物學(xué)行為。
【關(guān)鍵詞】：鈣離子通道 TRPV5 TRPV6 細(xì)胞內(nèi)鈣 結(jié)腸癌SW480細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R735.35
【目錄】：

• 中英縮略詞對(duì)照表4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-11
• 材料與方法11-26
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-41
• 討論41-45
• 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-50
• 綜述50-60
• 參考文獻(xiàn)56-60
• 致謝60-61
• 作者簡(jiǎn)介61

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 賈勇圣;魏曉莉;趙杰;鄭建全;;離子通道與腫瘤[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2007年03期

2 林麗瓊;黃維甄;陳健鵬;;TRPV6對(duì)人卵巢癌細(xì)胞株HO-8910PM遷移的影響[J];山東醫(yī)藥;2012年01期

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本文編號(hào)：1091800