本文關(guān)鍵詞：α-GalCer負(fù)載DC激活CIK細(xì)胞對(duì)肝癌細(xì)胞的殺傷效應(yīng)研究

  更多相關(guān)文章： α-GalCer DC CIK細(xì)胞 NKT細(xì)胞 腫瘤殺傷活性

【摘要】：研究背景：樹突狀細(xì)胞是迄今體內(nèi)功能最強(qiáng)大的抗原提呈細(xì)胞,在免疫應(yīng)答誘導(dǎo)中有獨(dú)特的地位。CIK細(xì)胞是新型的免疫活性細(xì)胞,是由多種細(xì)胞因子誘導(dǎo)產(chǎn)生的殺傷細(xì)胞,具有T細(xì)胞的抗瘤活性和MHC限制性殺瘤的特點(diǎn)。CIK細(xì)胞和DC細(xì)胞是目前應(yīng)用較多的過繼免疫治療的有效方法。α-半乳糖神經(jīng)酰胺在臨床試驗(yàn)中作為一種抗癌劑,對(duì)很多實(shí)體腫瘤均有效。腫瘤的臨床實(shí)驗(yàn)表明,注射α-GalCer負(fù)載的DC比單獨(dú)注射α-GalCer呈現(xiàn)出更大的抗腫瘤活性。但荷載α-GalCer的成熟DC對(duì)CIK細(xì)胞的功能活化還尚未見研究。本研究在以往研究的基礎(chǔ)上,探索α-GalCer負(fù)載DC對(duì)CIK細(xì)胞的激活作用及殺傷活性的影響,為DC-CIK在腫瘤免疫治療中的應(yīng)用提供依據(jù)。目的：探討α-GalCer負(fù)載對(duì)人外周血樹突狀細(xì)胞(DC)的激活作用及功能的影響；研究負(fù)載α-GalCer的DC能否在體外激活乙肝患者外周血中的NKT細(xì)胞；探討α-GalCer-DC與CIK共培養(yǎng)對(duì)CIK細(xì)胞表型、增殖活性及殺傷肝癌細(xì)胞效率的影響。方法：(一)采用密度梯度離心法從人外周血中分離出單個(gè)核細(xì)胞,懸浮細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)CIK細(xì)胞,貼壁細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)DC細(xì)胞,在光鏡下觀察其形態(tài)和生物學(xué)特征；流式細(xì)胞儀檢測(cè)DC與CIK細(xì)胞的免疫表型。(二)流式細(xì)胞儀檢測(cè)α-GalCer負(fù)載的DC細(xì)胞表型,qRT-PCR檢測(cè)DC細(xì)胞相關(guān)基因的mRNA水平。 (三)采用DC和α-GalCer來誘導(dǎo)培養(yǎng)患者外周血NKT細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測(cè)NKT的免疫表型和細(xì)胞因子的表達(dá)水平。 (四)將α-GalCer-DC細(xì)胞與CIK細(xì)胞共培養(yǎng),流式細(xì)胞儀檢測(cè)DC與各組CIK細(xì)胞表面標(biāo)志物；臺(tái)盼藍(lán)染色法檢測(cè)各組CIK細(xì)胞的增殖倍數(shù)；qRT-PCR檢測(cè)CIK細(xì)胞功能相關(guān)基因的表達(dá)情況；CCK-8試劑盒檢測(cè)α-GalCer-DC對(duì)CIK細(xì)胞殺傷HepG2的影響。結(jié)果：1.經(jīng)過多種細(xì)胞因子誘導(dǎo),可獲得CIK細(xì)胞和成熟的DC細(xì)胞。CIK細(xì)胞高表達(dá)CD3+CD8+和CD3+CD56+,成熟DC細(xì)胞高表達(dá)CD86, CD80, CD83和CDllc,低表達(dá)CD14。2.α-GalCer負(fù)載可促進(jìn)DC細(xì)胞成熟,細(xì)胞表面標(biāo)志物CD80, CD86, CD83, CD11c的陽性率均升高,表面趨化因子受體CCR-7、IL-12、IL-10的mRNA水平升高。3.DC和α-GalCer聯(lián)合誘導(dǎo)培養(yǎng)患者外周血NKT細(xì)胞,可以獲得高表達(dá)TCRVa24 TCRVβ11的雙陽性NKT細(xì)胞,并使NKT分泌高水平的IL-4和INF-γ。4. α-GalCer-DC與CIK共培養(yǎng),可顯著提高CIK細(xì)胞CD3+CD56+的表達(dá)和增殖活性；可顯著提高INF-γ、IL-12、穿孔素和顆粒酶素B的mRNA表達(dá)水平。CCK-8法檢測(cè)各組CIK細(xì)胞的殺傷活性,在同一效靶比時(shí),α-GalCer-DC-CIK細(xì)胞組對(duì)靶細(xì)胞的殺傷作用最強(qiáng),明顯高于CIK、DC-CIK細(xì)胞組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。 CCK-8法檢測(cè)結(jié)果顯示：CIK細(xì)胞對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2細(xì)胞有明顯的細(xì)胞毒作用,其抑制率隨著效靶比的增高而增高,并且具有顯著性差異(p0.05)。結(jié)論：α-GalCer可以在DC表面有效遞呈,提高DC的成熟度和活性；α-GalCer和DC可在體外激活NKT細(xì)胞；α-GalCer負(fù)載DC對(duì)CIK細(xì)胞增殖、表型及殺傷能力具有提升作用,能顯著增強(qiáng)其對(duì)肝癌細(xì)胞的殺傷活性。
【關(guān)鍵詞】：α-GalCer DC CIK細(xì)胞 NKT細(xì)胞 腫瘤殺傷活性
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 符號(hào)說明10-11
• 前言11-17
• 第一節(jié) α-GalCer負(fù)載對(duì)人外周血樹突狀細(xì)胞的激活作用17-25
• 一、試劑和儀器17-19
• 二、實(shí)驗(yàn)方法19-21
• 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果21-23
• 四、討論23-25
• 第二節(jié) α-GalCer負(fù)載DC對(duì)體外擴(kuò)增慢性乙型肝炎患者外周血NKT細(xì)胞的影響25-32
• 一、試劑和儀器25-26
• 二、實(shí)驗(yàn)方法26-28
• 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果28-29
• 四、討論29-32
• 第三節(jié) α-GalCer負(fù)載DC對(duì)CIK細(xì)胞的激活作用及殺傷活性的影響32-42
• 一、試劑和儀器32-34
• 二、實(shí)驗(yàn)方法34-36
• 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果36-40
• 四、討論40-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-49
• 致謝49-50
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)位論文50-51
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表51

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