本文關(guān)鍵詞：新型AMPK激活劑Hh-009誘導(dǎo)的抗膠質(zhì)瘤作用及其機制研究

  更多相關(guān)文章： 神經(jīng)膠質(zhì)瘤 Hh-009 磷酸腺苷活化的蛋白激酶(AMPK) 新型AMPK激活劑

【摘要】：研究目的:神經(jīng)膠質(zhì)瘤(簡稱膠質(zhì)瘤)是一種常見的原發(fā)性顱內(nèi)惡性腫瘤,其特點是發(fā)病率和死亡率高。目前膠質(zhì)瘤的常規(guī)治療方法效果較差,患者的五年生存率低�，F(xiàn)有的膠質(zhì)瘤化療藥物(替莫唑胺等)由于毒性較大,且容易產(chǎn)生化療抗性。因此,開發(fā)一種更加有效的膠質(zhì)瘤化療藥物迫在眉睫。本項目旨在觀察我們開發(fā)的新型磷酸腺苷活化的蛋白激酶(AMPK)激活劑Hh-009體內(nèi)、外抗膠質(zhì)瘤細胞的作用,解析作用的分子機制。研究方法:a)利用MTT分析檢測Hh-009對膠質(zhì)瘤細胞增殖和存活的影響,集落形成實驗檢測Hh-009對膠質(zhì)瘤細胞增殖的作用。b)Trypan Blue染色分析檢測細胞死亡,Annexin V/PI雙染法對細胞進行染色,用流式細胞儀檢測細胞凋亡。用碘化丙啶對細胞染色,流式細胞儀檢測細胞周期。c)Western blotting檢測AMPK、AKT-m TOR、EGFR/PDGFR等信號通路活化水平的改變,同時檢測腫瘤細胞自噬相關(guān)蛋白。通過熒光顯微鏡檢測LC3B-GFP表達。d)構(gòu)建裸鼠U87細胞移植瘤模型,腹腔注射給予不同濃度的Hh-009,電子天平稱量小鼠體重、用游標(biāo)卡尺測量腫瘤大小。分離腫瘤組織及腫瘤周圍正常組織,通過免疫組化檢測PDGFR表達水平。研究結(jié)果:a)細胞活性實驗結(jié)果表明Hh-009濃度依賴性地抑制膠質(zhì)瘤細胞存活;集落形成實驗證明Hh-009濃度依賴性地抑制膠質(zhì)瘤細胞增殖。b)實驗結(jié)果證明Hh-009誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細胞死亡、細胞凋亡。此外,還能將周期阻滯在有絲分裂S期。c)Western blotting結(jié)果揭示Hh-009介導(dǎo)膠質(zhì)瘤細胞AMPK活化、誘導(dǎo)細胞發(fā)生自噬,阻斷膠質(zhì)瘤細胞AKT-m TOR信號通路,導(dǎo)致膠質(zhì)瘤細胞PDGFR、EGFR等生長因子受體表達下調(diào)。d)裸鼠移植瘤實驗證明Hh-009顯著抑制在體膠質(zhì)瘤生長,且隨著Hh-009的使用濃度增加,腫瘤抑制率升高。結(jié)論:Hh-009是一個新型的AMPK激活劑,激活A(yù)MPK的同時,阻斷AKT-m TOR信號通路、下調(diào)生長因子受體PDGFR、EGFR表達。我們體內(nèi)、外實驗證明Hh-009對神經(jīng)膠質(zhì)瘤有明顯的抑制作用。
【關(guān)鍵詞】：神經(jīng)膠質(zhì)瘤 Hh-009 磷酸腺苷活化的蛋白激酶(AMPK) 新型AMPK激活劑
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R739.4
【目錄】：

• 中文提要4-6
• Abstract6-10
• 前言10-14
• 材料與方法14-25
• 材料14-17
• 細胞系14
• 主要實驗藥物14
• 主要試劑14-15
• 主要儀器15-16
• 主要抗體16-17
• 實驗動物17
• 方法17-25
• 1. 主要試劑配方17-19
• 2．主要實驗方法19-25
• 結(jié)果25-41
• 1 Hh-009濃度依賴性地抑制膠質(zhì)瘤細胞存活，，增殖25-27
• 1.1 Hh-009濃度依賴性地抑U87、U251細胞存活25-26
• 1.2 Hh-009對小鼠星形膠質(zhì)細胞存活沒有顯著影響26
• 1.3 Hh-009對膠質(zhì)瘤細胞增殖的抑制作用26-27
• 2. Hh-009誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細胞死亡27-30
• 2.1 Hh-009誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細胞死亡27-28
• 2.2 Hh-009誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細胞發(fā)生凋亡28-29
• 2.3 Hh-009誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細胞發(fā)生細胞有絲分裂周期阻滯29-30
• 3. Hh-009抑制膠質(zhì)瘤的機制研究30-37
• 3.1 Hh-009誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細胞AMPK激活31-32
• 3.2 Hh-009誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細胞發(fā)生自噬32-34
• 3.3 Hh-009誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細胞AKT-mTOR信號通路阻斷34-35
• 3.4 Hh-009誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細胞PDGFR/EGFR等生長因子受體表達下調(diào)35-37
• 4. 裸鼠移植瘤模型研究Hh-009抗膠質(zhì)瘤作用37-41
• 4.1 Hh-009裸鼠實驗抗膠質(zhì)瘤研究37-41
• 結(jié)論41-42
• 討論42-45
• 參考文獻45-53
• 惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤治療的分子機制53-67
• 參考文獻60-67
• 中英文縮寫詞表67-68
• 致謝68-70

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