本文關(guān)鍵詞：TIPE1通過調(diào)控EMT抑制胃癌的侵襲和轉(zhuǎn)移

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【摘要】：目的：胃癌(gastric carcinoma,GC)在全世界范圍內(nèi)都有著較高的發(fā)病率和致死率。我國的胃癌發(fā)病率已經(jīng)躍居世界首位,占全世界胃癌發(fā)病率的42%。由于胃癌具有“發(fā)病率高、轉(zhuǎn)移率高、病死率高”、“早期診斷率低、手術(shù)根治率低和5年生存率低”的“三高、三低”的特點(diǎn),所以探索關(guān)鍵的胃癌標(biāo)志物以實現(xiàn)胃癌的早期臨床診斷,從而進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)胃癌治療的潛在靶點(diǎn)用于胃癌的治療,是胃癌研究領(lǐng)域近些年最大的熱點(diǎn)也是設(shè)計本課題的臨床意義所在。胃癌最大的特點(diǎn)是早期易發(fā)生組織和腹腔的轉(zhuǎn)移,也是影響胃癌預(yù)后的主要因素,因此研究胃癌轉(zhuǎn)移的機(jī)制,找到關(guān)鍵的靶基因是胃癌研究中迫切需要解決的問題。本課題主要研究的基因TIPE1 (tumor necrosis factor a-induced protein 8-like 1,TNFAIP8L1)是TNFAIP8 (tumor necrosis factor a-induced protein8,腫瘤壞死因子α-誘導(dǎo)蛋白8)家族中的一員,該家族目前為止發(fā)現(xiàn)了TIPE1、TIPE2、 TIPE3和TNFAIP8四個成員,這四個成員高度同源且其中TIPE1和TIPE2的同源性達(dá)到了86%。研究表明TNFAIP8家族與細(xì)胞凋亡、細(xì)胞間的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)以及腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān),其中TIPE2是在2008年發(fā)現(xiàn)的免疫負(fù)調(diào)控因子,也是目前該家族中研究最熱的分子。已經(jīng)有充分的證據(jù)表明TIPE2能夠顯著抑制由Ras介導(dǎo)的腫瘤發(fā)生和侵襲轉(zhuǎn)移,基于TIPE1和TIPE2的高度同源性,我們推測TIPE1在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中的也發(fā)揮了重要的作用。本課題擬通過臨床胃癌標(biāo)本、胃癌細(xì)胞系和裸鼠轉(zhuǎn)移模型三個方面對TIPE1在胃癌侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮的作用及機(jī)制進(jìn)行深入的探究,完善胃癌發(fā)生轉(zhuǎn)移的機(jī)制,用于胃癌的臨床診斷和治療。方法：1.檢測臨床胃癌標(biāo)本中TIPE1的表達(dá)變化1.1收集100例胃癌和癌旁組織,通過實時定量RT-PCR和免疫組化(IHC)的方法檢測TIPE1在胃癌組織中的表達(dá)變化情況。1.2查閱100例臨床胃癌患者的病理資料,統(tǒng)計分析TIPE1表達(dá)與臨床資料如病理分期以及組織和淋巴轉(zhuǎn)移情況間的相關(guān)性。2.探究TIPE1在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用及機(jī)制2.1本實驗選用SGC7901、BGC823、AGS三種常見胃癌細(xì)胞系作為研究對象。構(gòu)建穩(wěn)定過表達(dá)TIPE1的慢病毒和基因沉默TIPE1的RNAi用于轉(zhuǎn)染細(xì)胞。2.2體外實驗：通過劃痕、Transwell模擬胃癌侵襲轉(zhuǎn)移模型,觀察過表達(dá)TIPE1以后胃癌細(xì)胞侵襲和遷移能力的變化。2.3體內(nèi)實驗：選取5-6周齡的雄性裸鼠隨機(jī)分為實驗組和對照組,尾靜脈注射穩(wěn)定過表達(dá)TIPE1的胃癌細(xì)胞系SGC7901、BGC823建立體內(nèi)轉(zhuǎn)移模型。一個半月后取材,通過苦味酸染色、HE染色觀察過表達(dá)TIPE1對胃癌細(xì)胞體內(nèi)轉(zhuǎn)移的影響。2.4通過實時定量RT-PCR、Western blot以及免疫熒光的方法檢測過表達(dá)TIPE1或沉默TIPE1后EMT相關(guān)蛋白E-cadherin、Vimentin、Slug、Snail、Twist以及MMP2、MMP9和β-catenin的表達(dá)變化情況。結(jié)果：1.相比于癌旁組織TIPE1在胃癌組織中的表達(dá)顯著降低mRNA(實時定量RT-PCR)和蛋白檢測結(jié)果(IHC)顯示,相對于正常癌旁組織,胃癌組織中的TIPE1表達(dá)量顯著降低,并且這種降低趨勢與胃癌的分化程度、局域淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān),即隨著胃癌分化程度的降低,TIPE1的表達(dá)也隨之進(jìn)一步降低,在發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移時TIPE1的表達(dá)最低。2.過表達(dá)TIPE1能夠顯著抑制胃癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和侵襲2.1用穩(wěn)定過表達(dá)TIPE1的細(xì)胞系SGC7901和BGC823進(jìn)行劃痕實驗,觀察Oh,6h,12h和24h遷移距離,統(tǒng)計結(jié)果顯示從6h開始過表達(dá)TIPE1組的遷移距離就顯著小于對照組。體外Transwell和侵襲實驗結(jié)果與劃痕實驗結(jié)果一致,表明過表達(dá)TIPE1體外能夠顯著抑制胃癌細(xì)胞系SGC7901和BGC823的遷移和侵襲。2.2裸鼠轉(zhuǎn)移模型取材進(jìn)行苦味酸和HE染色發(fā)現(xiàn)尾靜脈注射的胃癌細(xì)胞系主要轉(zhuǎn)移至肺,且過表達(dá)TIPE1組肺部轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)明顯少于對照組。3.過表達(dá)TIPE1能夠顯著抑制EMT3.1實時定量RT-PCR發(fā)現(xiàn)過表達(dá)TIPE1后能夠顯著抑制EMT相關(guān)基因Vimentin、Slug、Snail和Twist的表達(dá),同時使EMT最重要的標(biāo)志物E-cadherin表達(dá)升高。沉默TIPE1后結(jié)果與之相反,從正反兩方面表明TIPE1明顯抑制EMT相關(guān)的標(biāo)記物及轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá),提示在EMT中發(fā)揮重要作用。3.2 Western blot和免疫熒光實驗結(jié)果進(jìn)一步驗證了TIPE1抑制EMT的結(jié)果。同時發(fā)現(xiàn)過表達(dá)TIPE1能夠抑制基質(zhì)金屬蛋白酶MMP2和MMP9的表達(dá),并且顯著抑制β-catenin的表達(dá)。結(jié)論：1.TIPE1在胃癌組織中的表達(dá)與正常癌旁組織相比顯著降低,并且伴隨胃癌分化程度的降低,TIPE1的表達(dá)量也隨之進(jìn)一步降低。2.體內(nèi)和體外實驗充分表明TIPE1能夠顯著抑制胃癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。3.TIPE1主要通過上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化途徑抑制胃癌的侵襲轉(zhuǎn)移。
【關(guān)鍵詞】：胃癌 TIPE1 遷移與侵襲 EMT
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.2
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 符號說明13-15
• 前言15-19
• 實驗材料19-26
• 實驗方法26-41
• 實驗結(jié)果41-57
• 討論57-60
• 結(jié)論60-61
• 參考文獻(xiàn)61-68
• 致謝68-69
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文69-70
• 學(xué)位論文評閱及答辯情況表70

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1 劉文文;TIPE1通過調(diào)控EMT抑制胃癌的侵襲和轉(zhuǎn)移[D];山東大學(xué);2016年

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本文編號：1069627