本文關(guān)鍵詞：電針足陽(yáng)明經(jīng)（穴）對(duì)大鼠胃黏膜細(xì)胞EGFR及其ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制的影響

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【摘要】：目的：以中醫(yī)經(jīng)絡(luò)學(xué)說(shuō)中經(jīng)脈-臟腑相關(guān)理論為指導(dǎo),觀察電針足陽(yáng)明經(jīng)(穴)對(duì)大鼠胃黏膜損傷的修復(fù)效應(yīng)、大鼠胃黏膜細(xì)胞表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)、細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(ERK)和c-myc表達(dá)的影響,從器官、細(xì)胞、分子水平多層次系統(tǒng)地探討“足陽(yáng)明經(jīng)與胃相關(guān)”的物質(zhì)基礎(chǔ)以及電針足陽(yáng)明經(jīng)(穴)參與胃黏膜損傷修復(fù)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。 方法：采用水浸束縛應(yīng)激法(WRS)制作應(yīng)激性大鼠胃黏膜損傷模型,以電針足陽(yáng)明經(jīng)“足三里”、“梁門(mén)”、“四白”穴為施治因素,按Guth等標(biāo)準(zhǔn)記錄大鼠胃黏膜損傷指數(shù),光鏡下觀察胃黏膜組織形態(tài)學(xué)變化；采用免疫組化和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法(RT-PCR)檢測(cè)胃黏膜細(xì)胞EGFR蛋白和基因的表達(dá)；免疫組化和免疫印跡法(Western blot)檢測(cè)胃黏膜細(xì)胞ERK磷酸化水平；RT-PCR法檢測(cè)胃黏膜細(xì)胞c-myc基因的表達(dá)。 結(jié)果：①經(jīng)造模后,模型組大鼠胃黏膜損傷指數(shù)最高,正常組大鼠胃黏膜損傷指數(shù)最低,兩組間差異有非常顯著性意義(p0.01),說(shuō)明造模是成功的；電針胃經(jīng)組和電針膽經(jīng)組大鼠胃黏膜損傷指數(shù)均明顯降低,與模型組比較有非常顯著性差異(P＜0.01),其中電針胃經(jīng)組大鼠胃黏膜損傷指數(shù)降低最為明顯,與電針膽經(jīng)組比較有非常顯著性差異(P＜0.01)； ②在電針足陽(yáng)明經(jīng)(穴)后提取的不同稀釋度血清對(duì)大鼠胃黏膜細(xì)胞EGFR表達(dá)差異影響中,1／10胃經(jīng)血清組大鼠胃黏膜細(xì)胞EGFR表達(dá)與1／2、1／5和1／20胃經(jīng)血清組比較均有非常顯著性差異(P0.01),大鼠胃黏膜細(xì)胞EGFR表達(dá)強(qiáng)弱依次為：1／10胃經(jīng)血清組1／20胃經(jīng)血清組1／5胃經(jīng)血清組1／2胃經(jīng)血清組； ③在與電針足陽(yáng)明經(jīng)(穴)或足少陽(yáng)經(jīng)(穴)提取的血清孵育后,胃經(jīng)組和膽經(jīng)組大鼠胃黏膜細(xì)胞EGFR及其基因的表達(dá)均明顯增強(qiáng),與正常組、模型組比較均有非常顯著性差異(P0.01)；其中胃經(jīng)組大鼠胃黏膜細(xì)胞EGFR及其基因的表達(dá)又最為明顯,與膽經(jīng)組比較有顯著性差異(P0.05)； ④在與電針足陽(yáng)明經(jīng)(穴)或電針足少陽(yáng)經(jīng)(穴)提取的血清孵育后,胃經(jīng)組和膽經(jīng)組大鼠胃黏膜細(xì)胞ERK磷酸化、c-myc基因表達(dá)均明顯升高,與正常組、模型組比較均有非常顯著性差異(P0.01)；胃經(jīng)組大鼠胃黏膜細(xì)胞ERK磷酸化、c-myc基因表達(dá)升高最為明顯,與膽經(jīng)組比較均有非常顯著性差異(P0.01)；當(dāng)用PD153035阻斷EGFR后,胃經(jīng)+PD153035組大鼠胃黏膜細(xì)胞ERK磷酸化、c-myc基因表達(dá)均明顯降低,與胃經(jīng)組比較均有非常顯著性差異(P0.01)。 結(jié)論：①電針足陽(yáng)明經(jīng)(穴)可促進(jìn)大鼠胃黏膜損傷的修復(fù),足陽(yáng)明經(jīng)與胃具有相對(duì)的特異性聯(lián)系； ②電針足陽(yáng)明經(jīng)(穴)后提取的不同稀釋度血清皆能使大鼠胃黏膜細(xì)胞EGFR蛋白的表達(dá)增強(qiáng),但存在一定的濃度效應(yīng)相關(guān)性,1／10稀釋度血清的效應(yīng)最為明顯； ③電針足陽(yáng)明經(jīng)(穴)后提取的血清可提高大鼠胃黏膜細(xì)胞EGFR及其基因的表達(dá),EGFR是足陽(yáng)明經(jīng)與胃相關(guān)的重要物質(zhì)基礎(chǔ)； ④電針足陽(yáng)明經(jīng)(穴)后提取的血清可提高大鼠胃黏膜細(xì)胞ERK磷酸化和c-myc基因表達(dá)水平,并且上述效應(yīng)可隨EGFR被阻斷而減弱,EGFR是電針足陽(yáng)明經(jīng)(穴)對(duì)胃黏膜損傷修復(fù)的調(diào)節(jié)位點(diǎn),ERK和c-myc是足陽(yáng)明經(jīng)與胃相關(guān)的重要物質(zhì)基礎(chǔ)； ⑤電針足陽(yáng)明經(jīng)(穴)對(duì)胃黏膜損傷修復(fù)的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)可能是通過(guò)激活EGFR及其ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑而實(shí)現(xiàn)的； ⑥利用針刺穴位后所提取的血清與離體器官、組織、細(xì)胞相互作用,以探討針刺效應(yīng)及其作用機(jī)制,值得做進(jìn)一步更深入的研究。
【關(guān)鍵詞】：足陽(yáng)明經(jīng) 電針 胃黏膜細(xì)胞 血清 表皮生長(zhǎng)因子受體 細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶 c-myc 細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)
【學(xué)位授予單位】：湖南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類(lèi)號(hào)】：R245.399
【目錄】：

• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-14
• 英文縮略語(yǔ)14-15
• 引言15-17
• 第一部分 電針足陽(yáng)明經(jīng)(穴)對(duì)大鼠胃黏膜損傷修復(fù)的組織形態(tài)學(xué)影響17-25
• 1.材料與方法17-21
• 1.1 動(dòng)物來(lái)源、分組與造模方法17-18
• 1.2 穴位定位與電針?lè)椒?/span>18-19
• 1.3 主要儀器19
• 1.4 實(shí)驗(yàn)試劑19-20
• 1.5 胃黏膜損傷指數(shù)計(jì)分20
• 1.6 光鏡標(biāo)本制作程序20
• 1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法20-21
• 2.結(jié)果與分析21-25
• 2.1 電針足陽(yáng)明經(jīng)(穴)對(duì)大鼠胃黏膜損傷修復(fù)的肉眼觀察結(jié)果21-22
• 2.2 電針足陽(yáng)明經(jīng)(穴)對(duì)大鼠胃黏膜損傷指數(shù)的影響22-23
• 2.3 電針足陽(yáng)明經(jīng)(穴)對(duì)大鼠胃黏膜損傷修復(fù)的光鏡觀察結(jié)果23-25
• 第二部分 電針足陽(yáng)明經(jīng)(穴)血清對(duì)大鼠胃黏膜細(xì)胞EGFR表達(dá)的濃度效應(yīng)相關(guān)性研究25-34
• 1.材料與方法25-30
• 1.1 動(dòng)物來(lái)源、分組與造模方法25-26
• 1.2 穴位定位與電針?lè)椒?/span>26
• 1.3 主要儀器26-27
• 1.4 實(shí)驗(yàn)試劑27
• 1.5 正常大鼠胃黏膜細(xì)胞的分離方法27-29
• 1.6 大鼠血清的提取及與正常大鼠胃黏膜細(xì)胞的作用方法29
• 1.7 大鼠胃黏膜細(xì)胞EGFR表達(dá)檢測(cè)方法29-30
• 1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法30
• 2.結(jié)果與分析30-34
• 2.1 正常大鼠胃黏膜細(xì)胞的分離結(jié)果30-31
• 2.2 電針足陽(yáng)明經(jīng)(穴)血清對(duì)大鼠胃黏膜細(xì)胞EGFR表達(dá)的濃度效應(yīng)相關(guān)性結(jié)果31-34
• 第三部分 電針足陽(yáng)明經(jīng)(穴)對(duì)大鼠胃黏膜細(xì)胞EGFR及其基因表達(dá)的影響34-42
• 1.材料與方法34-37
• 1.1 動(dòng)物來(lái)源、分組與造模方法34-35
• 1.2 穴位定位與電針?lè)椒?/span>35
• 1.3 主要儀器35
• 1.4 實(shí)驗(yàn)試劑35-36
• 1.5 正常大鼠胃黏膜細(xì)胞的分離方法36
• 1.6 大鼠血清的提取及與正常大鼠胃黏膜細(xì)胞的作用方法36
• 1.7 大鼠胃黏膜細(xì)胞EGFR表達(dá)的檢測(cè)方法36
• 1.8 大鼠胃黏膜細(xì)胞EGFR基因表達(dá)的檢測(cè)方法36-37
• 1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法37
• 2.結(jié)果與分析37-42
• 2.1 電針足陽(yáng)明經(jīng)(穴)對(duì)大鼠胃黏膜細(xì)胞EGFR表達(dá)的影響38-40
• 2.2 電針足陽(yáng)明經(jīng)(穴)對(duì)大鼠胃黏膜細(xì)胞EGFR基因表達(dá)的影響40-42
• 第四部分 電針足陽(yáng)明經(jīng)(穴)對(duì)大鼠胃黏膜細(xì)胞EGFR阻斷前后ERK和c-myc基因的影響42-58
• 1.材料與方法42-48
• 1.1 動(dòng)物來(lái)源、分組與造模方法42-43
• 1.2 穴位定位與電針?lè)椒?/span>43-44
• 1.3 主要儀器44
• 1.4 實(shí)驗(yàn)試劑44
• 1.5 正常大鼠胃黏膜細(xì)胞的分離方法44
• 1.6 大鼠血清的提取、胃黏膜細(xì)胞EGFR阻斷途徑及與血清的作用方法44-45
• 1.7 大鼠胃黏膜細(xì)胞ERK磷酸化的檢測(cè)方法45-46
• 1.8 大鼠胃黏膜細(xì)胞c-myc基因表達(dá)的檢測(cè)方法46-48
• 1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法48
• 2.結(jié)果與分析48-58
• 2.1 電針足陽(yáng)明經(jīng)(穴)對(duì)大鼠胃黏膜細(xì)胞ERK的影響48-51
• 2.2 電針足陽(yáng)明經(jīng)(穴)對(duì)大鼠胃黏膜細(xì)胞EGFR阻斷前后ERK的影響51-54
• 2.3 電針足陽(yáng)明經(jīng)(穴)對(duì)大鼠胃黏膜細(xì)胞c-myc基因的影響54-55
• 2.4 電針足陽(yáng)明經(jīng)(穴)對(duì)大鼠胃黏膜細(xì)胞EGFR阻斷前后c-myc基因的影響55-58
• 討論58-81
• 一、祖國(guó)醫(yī)學(xué)對(duì)足陽(yáng)明經(jīng)與胃相關(guān)規(guī)律的認(rèn)識(shí)58-61
• 二、現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)胃黏膜損傷修復(fù)機(jī)制的認(rèn)識(shí)61-64
• 三、電針足陽(yáng)明經(jīng)(穴)對(duì)胃黏膜損傷的修復(fù)效應(yīng)64-67
• 四、電針足陽(yáng)明經(jīng)(穴)對(duì)胃黏膜損傷修復(fù)影響與EGFR的關(guān)系67-71
• 五、電針足陽(yáng)明經(jīng)(穴)對(duì)胃黏膜損傷修復(fù)影響與ERK、c-myc的關(guān)系71-74
• 六、電針足陽(yáng)明經(jīng)(穴)調(diào)節(jié)胃黏膜損傷修復(fù)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制探討74-77
• 七、電針足陽(yáng)明經(jīng)(穴)與電針足少陽(yáng)經(jīng)(穴)效應(yīng)差異分析77
• 八、針灸血清學(xué)方法的探討77-80
• 九、問(wèn)題與展望80-81
• 結(jié)論81-82
• 致謝82-83
• 參考文獻(xiàn)83-90
• 附錄90-110
• 1.綜述90-108
• 2.攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的論文、科研、交流學(xué)習(xí)及獲獎(jiǎng)情況108-110

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：905741