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針刺促AD模型小鼠SAMP8海馬神經(jīng)元興奮性突觸傳遞效應(yīng)機(jī)制研究

發(fā)布時(shí)間:2017-09-11 18:06

  本文關(guān)鍵詞:針刺促AD模型小鼠SAMP8海馬神經(jīng)元興奮性突觸傳遞效應(yīng)機(jī)制研究


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【摘要】:目的: 研究針刺對(duì)阿爾茨海默病模型(快速老化小鼠)SAMP8的海馬長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)(LTP)的影響,肯定針刺對(duì)AD模型海馬學(xué)習(xí)記憶能力影響的電生理效應(yīng),同時(shí)觀察海馬神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)和鈣調(diào)蛋白酶的變化,揭示針刺介導(dǎo)AD神經(jīng)康復(fù)的相關(guān)機(jī)制。 方法: 1.確定不同品系小鼠LTP實(shí)驗(yàn)定位特點(diǎn); 2.建立了針刺實(shí)驗(yàn)條件下正常Balb/c小鼠模型,Balb/c小鼠體重20-30g。針刺“百會(huì)”、“涌泉”穴,每閂一次,7天一療程,療程間間隔2天。根據(jù)療程將動(dòng)物隨機(jī)分為空白2周組、對(duì)照2周組、針刺2周組以及空白4周組、對(duì)照4周組、針刺4周組。治療結(jié)束后,即刻將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物麻醉,觀察針刺對(duì)正常Balb/c小鼠的LTP影響; 3.選擇9月齡SAMP8小鼠為AD動(dòng)物模型,隨機(jī)分為模型對(duì)照P8組和針刺P8組。雄性同源同月齡SAMR1小鼠為正常對(duì)照R1組。同樣的針刺方法結(jié)束后,對(duì)小鼠海馬進(jìn)行在體LTP測(cè)試。以透射電鏡觀察動(dòng)物海馬CA1區(qū)神經(jīng)元突觸界面超微結(jié)構(gòu)突觸后致密帶(post synaptic density,PSD)厚度、突觸間隙寬度、突觸界面曲率變化。以免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)海馬p-CaMK Ⅱ表達(dá)。 結(jié)果: 1.確定了不同品系小鼠LTP的電極定位調(diào)整方法和不同品系小鼠LTP實(shí)驗(yàn)的電極定位坐標(biāo)特點(diǎn); 2.正常Balb/c小鼠不同療程組的LTP結(jié)果:LTP引發(fā)率以對(duì)照4周組最低;空白2周組、對(duì)照2周組、針刺2周組三組之間的LTP的群峰電位(PS)和潛伏期幅度變化沒有顯著性差異:空白4周組、對(duì)照4周組與針刺4周組組間比較PS增幅有顯著性差異(p0.05),潛伏期沒有差異;空白4周組和對(duì)照4周組的陌增幅比較有顯著性差異(p0.05),潛伏期降幅沒有差異;窄自4周組和針刺4周組的Ps增幅和潛伏期沒有顯著性差異;對(duì)照4周組和針刺4周組的PS增幅變化有娃著性謦肄(p0.05): 3. SAMP8與SAMR1的LTP結(jié)果:LTP引發(fā)率比較對(duì)照P8組和針刺P8組尢差異,正常Rl組較低;正常對(duì)照Rl組、模型對(duì)照p8組與針刺P8組組間比較PS增幅與潛伏期降幅有顯著性差異(p0.05);正常對(duì)照Rl針刺P8組比較,PS增幅和潛伏期降幅均有顯著性差異(p0.05):模型對(duì)照P8組與針刺P8組比較,潛伏期降幅均有顯著差異(P0.05);正常對(duì)照的Rl與模型對(duì)照P8組比較,PS增幅與潛伏期變化均無顯著性差異; 4.4療程后,與正常對(duì)照Rl組比較,模型對(duì)照P8組小鼠海馬CAl區(qū)神經(jīng)元PSD變薄(p0.05);突觸間隙增寬(p0.05):突觸界面曲率下降(p0.05)。與模型對(duì)照P8組比較,針刺P8組PSD增厚(p0.05);突觸間隙寬度下降(p0.05):突觸界面曲率增大(p0.05); 5.4療程后,正常對(duì)照Rl組、模型對(duì)照P8組、針刺P8組的海馬p-CaMK Ⅱ總量及亞區(qū)含量上勻未見差異(p0.05); 結(jié)論: 1.4周的針刺束縛實(shí)驗(yàn)條件可能對(duì)正常小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力產(chǎn)生非良性作用,針刺可以拮抗由不良刺激造成的學(xué)習(xí)記憶能力損傷; 2.針刺可以提高SAMP8小鼠的LTP,提示增強(qiáng)突觸可塑性刺改善SAMP8小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力的機(jī)制之一; 3.通過改善海馬神經(jīng)元的結(jié)構(gòu)參數(shù),進(jìn)而提高神經(jīng)元突觸興奮性傳遞功能,最終提高學(xué)習(xí)記憶能力,是針刺實(shí)現(xiàn)AD神經(jīng)康復(fù)的機(jī)制之一。
【關(guān)鍵詞】:針刺療法 陳爾茲海默病 海馬長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng) 快速老化小鼠 突觸結(jié)構(gòu)
【學(xué)位授予單位】:成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:博士
【學(xué)位授予年份】:2013
【分類號(hào)】:R245
【目錄】:
  • 中文摘要2-4
  • ABSTRACT4-7
  • 縮略詞7-9
  • 目錄9-12
  • 引言12-16
  • 第一部分 不同品系小鼠LTP實(shí)驗(yàn)定位特點(diǎn)及針刺實(shí)驗(yàn)條件對(duì)正常Balb/c小鼠的LTP影響16-42
  • 1. 不同品系小鼠LTP實(shí)驗(yàn)定位特點(diǎn)16-24
  • 1.1 材料和方法16-20
  • 1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物16
  • 1.1.2 主要試劑16
  • 1.1.3 小鼠在體LTP實(shí)驗(yàn)方法16-20
  • 1.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果20-24
  • 1.2.1 小鼠顱骨固定的調(diào)節(jié)方法20-21
  • 1.2.2 不同品系小鼠LTP的電極定位調(diào)整方法21
  • 1.2.3 電極深度全范圍調(diào)節(jié)方法21-22
  • 1.2.4 不同品系小鼠LTP實(shí)驗(yàn)的電極定位坐標(biāo)22-24
  • 2. 針刺實(shí)驗(yàn)條件對(duì)正常Balb/c小鼠的LTP影響24-42
  • 2.1 材料和方法24-26
  • 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組24
  • 2.1.2 實(shí)驗(yàn)材料24
  • 2.1.3 動(dòng)物處理24-25
  • 2.1.4 小鼠在體LTP檢測(cè)25
  • 2.1.5 技術(shù)路線25-26
  • 2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-42
  • 2.2.1 Balb/c不同療程LTP引發(fā)率26-27
  • 2.2.2 不同療程組小鼠體重分階段比較27-29
  • 2.2.3 各組LTP的PS增幅和潛伏期降幅比較29-42
  • 第二部分 針刺促SAMP8海馬神經(jīng)元興奮性突觸傳遞效應(yīng)研究42-52
  • 1. 材料與方法42-44
  • 1.1 實(shí)驗(yàn)材料42
  • 1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物42
  • 1.1.2 主要試劑42
  • 1.1.3 主要儀器42
  • 1.2 動(dòng)物分組42
  • 1.3 動(dòng)物處理42-43
  • 1.4 小鼠在體LTP檢測(cè)43
  • 1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理43
  • 1.6 研究路線圖43-44
  • 2. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果44-52
  • 2.1 LTP引發(fā)率44
  • 2.2 各組小鼠體重隨時(shí)間變化比較44-45
  • 2.3 各組LTP的PS增幅和LA降幅比較45-52
  • 第三部分 針刺影響SAMP8小鼠海馬長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)(LTP)機(jī)制研究52-63
  • 1. 材料與方法52-59
  • 1.1 材料和方法52-54
  • 1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物52
  • 1.1.2 主要試劑52-53
  • 1.1.3 主要儀器53-54
  • 1.2 實(shí)驗(yàn)方法54-58
  • 1.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組54
  • 1.2.2 免疫組化檢測(cè)54-55
  • 1.2.3 圖像采集和分析55-58
  • 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理58
  • 1.4 研究路線58-59
  • 2. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果59-63
  • 2.1 針刺對(duì)海馬CA1區(qū)突觸結(jié)構(gòu)的影響59-61
  • 2.2 針刺對(duì)海馬亞區(qū)p-CaMKⅡ含量的影響61-63
  • 討論63-81
  • 1 LTP是理想的學(xué)習(xí)記憶評(píng)價(jià)電生理模型63
  • 2 小鼠在體LTP技術(shù)研究概況63-64
  • 3 針刺實(shí)驗(yàn)條件對(duì)正常小鼠LTP的影響64-68
  • 3.1 針刺實(shí)驗(yàn)可能存在的應(yīng)激因素64-66
  • 3.2 針刺實(shí)驗(yàn)條件對(duì)小鼠體重的影響66-67
  • 3.3 針刺對(duì)正常小鼠LTP的影響67-68
  • 4 針灸對(duì)AD模型SAMP8小鼠LTP的影響68-73
  • 4.1 針灸治療老年癡呆的依據(jù)68-70
  • 4.2 本實(shí)驗(yàn)中AD模型SAMP8的應(yīng)用情況和選擇依據(jù)70
  • 4.3 針刺能夠改善SAMP8的LTP70-73
  • 5 針刺改變神經(jīng)突觸結(jié)構(gòu)是影響LTP的重要形態(tài)學(xué)機(jī)制73-77
  • 5.1 針刺對(duì)突觸結(jié)構(gòu)的影響73-74
  • 5.2 海馬學(xué)習(xí)記憶與突觸結(jié)構(gòu)變化的相關(guān)性74-76
  • 5.3 針刺影響海馬突觸形態(tài)進(jìn)而促進(jìn)學(xué)習(xí)記憶功能改善76-77
  • 6 針刺影響LTP依賴CaMKⅡ的變化77-81
  • 6.1 CaMKⅡ是產(chǎn)生LTP的重要細(xì)胞因子78
  • 6.2 CaMKⅡ在LTP維持階段的作用78-79
  • 6.3 針刺對(duì)正常小鼠LTP的影響79
  • 6.4 針刺通過影響CaMK Ⅱ的變化改變老年大鼠學(xué)習(xí)記憶能力79-81
  • 全文結(jié)論81-82
  • 問題與展望82-84
  • 參考文獻(xiàn)84-91
  • 致謝91-92
  • 附件1:綜述92-102
  • 附件2:博士在讀期間公開發(fā)表的學(xué)術(shù)論文102-103

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào):832245

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