本文關(guān)鍵詞：同種異體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞穴位注射零天與七天治療急性心肌梗死兔的對比研究

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【摘要】： 目的:探討兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)穴位注射對缺血心肌細(xì)胞的修復(fù)重建能力,同時進(jìn)行兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)穴位注射零天與七天對梗死區(qū)心肌細(xì)胞凋亡的對比研究。采用脫氧核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)原位缺口標(biāo)記(TUNEL法)確定細(xì)胞凋亡數(shù),免疫組化SABC方法及RT-PCR和蛋白印跡法觀察心肌細(xì)胞中Fas、FasL、Bcl-2蛋白及mRNA的表達(dá)。 方法: 1.將已建立心肌梗死模型的日本大耳白兔隨機(jī)分為3組,模型組、穴位注射干細(xì)胞零天組、穴位注射干細(xì)胞七天組。用開胸結(jié)扎冠狀動脈左室支的方法建立急性心肌梗死模型,對梗死后的兔分兩組分別在零天與七天穴位注射相同數(shù)量的已經(jīng)分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增、標(biāo)記后的MSCs懸液。在梗死后五周分別對各組兔心肌梗死區(qū)及周邊區(qū)進(jìn)行Brdu免疫組化染色以觀察穴位注射MSCs是否遷移至梗死區(qū),對Brdu染色陽性的細(xì)胞復(fù)染心肌特異性肌鈣蛋白T染色以觀察遷移的細(xì)胞是否分化及分化的性質(zhì)。 2.采用脫氧核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)原位缺口標(biāo)記(TUNEL法)確定細(xì)胞凋亡數(shù),免疫組化SABC方法及RT-PCR和蛋白印跡法觀察心肌細(xì)胞中Fas、FasL、Bcl-2蛋白及mRNA的表達(dá)。 結(jié)果: 1.穴位注射MSCs各組梗死區(qū)組織免疫組化Brdu染色陽性;心肌特異性肌鈣蛋白T染色陽性。 2.免疫組化示:梗死區(qū)凋亡細(xì)胞的表達(dá),模型組高于正常組、穴位注射干細(xì)胞零天組和穴位注射干細(xì)胞七天組(P＜0.05),穴位注射干細(xì)胞七天組低于穴位注射干細(xì)胞零天組,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);Fas蛋白的表達(dá),模型組高于正常組、穴位注射干細(xì)胞零天組和穴位注射干細(xì)胞七天組,穴位注射干細(xì)胞七天組低于穴位注射干細(xì)胞零天組(P＜0.05);FasL蛋白的表達(dá),穴位注射干細(xì)胞零天組高于正常組、模型組、穴位注射干細(xì)胞七天組(P＜0.05);Bcl-2蛋白的表達(dá),模型組低于正常組、穴位注射干細(xì)胞零天組和穴位注射干細(xì)胞七天組(P＜0.05),穴位注射干細(xì)胞七天組高于穴位注射干細(xì)胞零天組,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。 3.RT-PCR與Western Blot顯示:與正常組比較,Fas mRNA水平:模型組和穴位注射干細(xì)胞的兩組明顯升高(P＜0.05);FasL mRNA水平:模型組和穴位注射干細(xì)胞的兩組明顯升高(P＜0.05);Bcl-2 mRNA水平:模型組明顯下降(P＜0.05),穴位注射干細(xì)胞的兩組有所升高,但升高程度不同,穴位注射零天組明顯升高(P＜0.05),穴位注射七天組雖有升高但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。與模型組比較,Fas mRNA水平:穴位注射干細(xì)胞的兩組明顯下降(P＜0.05);FasL mRNA水平:穴位注射干細(xì)胞的兩組明顯下降(P＜0.01);Bcl-2 mRNA:穴位注射干細(xì)胞的兩組明顯升高(P＜0.05)。與穴位注射干細(xì)胞零天比較,Fas mRNA水平:穴位注射干細(xì)胞七天組明顯下降(P＜0.05);FASL mRNA水平:穴位注射干細(xì)胞七天組明顯下降(P＜0.05);Bcl-2 mRNA水平:穴位注射干細(xì)胞七天組也明顯下降(P＜0.05)。與正常組比較,Fas與FasL蛋白水平:模型組和穴位注射干細(xì)胞的兩組明顯升高(P＜0.05);Bcl-2蛋白水平:模型組明顯下降(P＜0.05),穴位注射干細(xì)胞的兩組有所升高,但升高程度不同,穴位注射零天組明顯升高(P＜0.05),穴位注射七天組明顯升高(P＜0.05)。與模型組比較,Fas蛋白:穴位注射干細(xì)胞的兩組明顯下降(P＜0.05);FasL蛋白:穴位注射干細(xì)胞的兩組明顯下降(P＜0.05);Bcl-2蛋白:穴位注射干細(xì)胞的兩組明顯升高(P＜0.05)。與穴位注射干細(xì)胞零天比較,Fas蛋白:穴位注射干細(xì)胞七天組明顯下降(P＜0.05);FASL蛋白:穴位注射干細(xì)胞七天組明顯下降(P＜0.05);Bcl-2蛋白:穴位注射干細(xì)胞七天組也明顯下降(P＜0.05)。 結(jié)論: 1.穴位注射兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可遷移至梗死區(qū),并可以在梗死區(qū)分化為類心肌樣細(xì)胞。 2.穴位注射骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可使梗死及周圍區(qū)心肌細(xì)胞凋亡數(shù)減少,其機(jī)制可能是通過Fas、FasL蛋白的減少、Bcl-2蛋白的增多來調(diào)節(jié)的。 3.穴位注射骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞七天較穴位注射骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞零天更能減少凋亡細(xì)胞的數(shù)量。
【關(guān)鍵詞】：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 急性心肌梗死 穴位注射 細(xì)胞凋亡 Fas FasL Bcl-2
【學(xué)位授予單位】：遼寧中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R245;R542.22
【目錄】：

• 中英文名詞術(shù)語對照4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-11
• 前言11-13
• 文獻(xiàn)綜述一13-26
• 參考文獻(xiàn)21-26
• 文獻(xiàn)綜述二26-39
• 參考文獻(xiàn)36-39
• 正文39-50
• 1 材料方法39-44
• 2 結(jié)果44-50
• 分析討論50-53
• 結(jié)論53-54
• 參考文獻(xiàn)54-56
• 附圖56-70
• 致謝70-71
• 個人簡歷71-73

【引證文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 蔣曉明;屈紅林;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞防治心肌細(xì)胞凋亡的基因及蛋白研究[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2011年36期

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本文編號：801625