發(fā)布時間：2017-05-15 17:25

  本文關(guān)鍵詞：按摩動態(tài)力學(xué)刺激防治肥胖對前脂肪細(xì)胞增殖和分化功能的影響及機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：體外培養(yǎng)前脂肪細(xì)胞,通過對該細(xì)胞進(jìn)行力學(xué)刺激觀察按摩動態(tài)力學(xué)刺激對前脂肪細(xì)胞增殖的影響及過氧化物酶體增殖物激活受體(peroxisome proliferators-activated receptor PPAR)、轉(zhuǎn)錄因子CCAAT增強子結(jié)合蛋白(CCAAT enhancer binding protein C/EBP)、脂聯(lián)素結(jié)合受體(AdipodR1、AdipodR2)表達(dá)的變化,為推拿按摩可以防治單純性肥胖提供實驗依據(jù),從分子生物角度認(rèn)識中醫(yī)推拿作用于人體后前脂肪細(xì)胞生物學(xué)功能的影響。 方法：1、以清潔級80g-100g(1-2月齡)的SD雄性大鼠(Sprague Dawley Rat)為實驗材料,無菌操作采集附睪周圍白色脂肪組織,利用酶消化法培養(yǎng)前脂肪細(xì)胞,分別從形態(tài)學(xué)角度和油紅0染色技術(shù)鑒定前脂肪細(xì)胞。將原代前脂肪細(xì)胞傳代至P3代,作為后續(xù)試驗的平臺。2、將前脂肪細(xì)胞隨機(jī)分為六組,OR/min組、60R/min組、90R/min組、120R/min組、150R/min組、180R/min組。經(jīng)24h培養(yǎng)同步化后,根據(jù)相應(yīng)的組別加載力不同強度的刺激,每日刺激2次,每次時長30min,間隔時間為12h,連續(xù)3日,共計刺激6次。刺激結(jié)束后,利用MTT法檢測細(xì)胞生長活力法檢測各組細(xì)胞的活力變化。3、重復(fù)方法二中對前脂肪細(xì)胞的分組加力刺激,刺激結(jié)束后,收集細(xì)胞提取總RNA,利用RT-PCR半定量技術(shù)分析AdipodR1、 AdipodR2、PPAR及C/EBP基因表達(dá)的變化；收集細(xì)胞提取總蛋白,利用western blot技術(shù)分析AdipoR1、AdipoR2、PPAR及C/EBP蛋白表達(dá)的變化。 結(jié)果：1、原代培養(yǎng)SD大鼠前脂肪細(xì)胞成功。油紅0染色結(jié)果呈陽性。該細(xì)胞可成功誘導(dǎo)為成熟脂肪細(xì)胞。為整個實驗提供了平臺。2、將前脂肪細(xì)胞分組后,每一次刺激結(jié)束都用MTT法檢測各組吸光值,通過6次的刺激,畫出各組細(xì)胞經(jīng)過不同力度刺激后的生長曲線,觀察細(xì)胞活力變化,結(jié)果隨著力學(xué)刺激的梯度增大,前脂肪細(xì)胞的增殖也受到抑制,并且刺激力度與增殖抑制率成正相關(guān)；其中150R/min組與180R/min組雖然細(xì)胞活力低于正常組,但在兩兩比較中無統(tǒng)計學(xué)差異。經(jīng)分析得出結(jié)論：按摩力學(xué)刺激越大,前脂肪細(xì)胞活力越低,增殖抑制率越高(P0.05)；高轉(zhuǎn)速組(150R/min組與180R/min組)與其他實驗組對比無統(tǒng)計學(xué)差異。3、RT-PCR半定量分析各轉(zhuǎn)速組別間的C/EBP、PPAR、AdipodR1、 AdipodR2、基因表達(dá)水平的變化,①C/EBP基因的表達(dá)：實驗組(60R/min組、90R/min組、120R/min組、150R/min組、80R/min組)與對照組OR/min組相比,C/EBP的表達(dá)水平均低于OR/min組,且隨著刺激力度的增加其表達(dá)呈逐步下調(diào)趨勢,統(tǒng)計分析有顯著差異(P0.05)各組兩兩對比也存在顯著差異。PPAR基因的表達(dá)：與OR組相比,實驗組PAR隨著力學(xué)刺激的增強表達(dá)水平呈下降趨勢,有顯著差異(P0.05)；各組兩兩對比也存在顯著差異。③Adipod R1基因的表達(dá)：與OR組相比,實驗組Adipod R1隨著力學(xué)刺激的增強表達(dá)水平呈下降趨勢,有顯著差異(P0.05)；各組兩兩對比也存在顯著差異。④AdipodR2基因的表達(dá)：與OR組相比,實驗組Adipod R2隨著力學(xué)刺激的增強表達(dá)水平呈下降趨勢,有顯著差異(P0.05)；各組兩兩對比也存在顯著差異。4、Western Blot免疫印跡實驗分析各轉(zhuǎn)速組別間的C/EBP、PPAR、 AdipodR1、AdipodR2、蛋白表達(dá)水平的變化,①C/EBP蛋白的表達(dá)：實驗組(60R/min組、90R/min組、120R/min組、150R/min組、180R/min組)與對照組OR/min組相比,C/EBP的表達(dá)水平均低于OR組,隨著力學(xué)刺激的增強其表達(dá)呈下調(diào)趨勢,統(tǒng)計學(xué)有顯著差異(P0.05)；各組兩兩對比也存在顯著差異。②PPAR蛋白的表達(dá)：與OR組相比,實驗組PPAR隨著力學(xué)刺激的增強其表達(dá)水平呈下降趨勢,統(tǒng)計分析有顯著差異(P0.05)；各組兩兩對比也存在顯著差異。③AdipodR1蛋白的表達(dá)：與OR組相比,實驗組Adipod R1隨著力學(xué)刺激的增強其表達(dá)水平呈下降趨勢,統(tǒng)計分析有顯著差異(P0.05)：各組兩兩對比也存在顯著差異。④AdipodR2蛋白的表達(dá)：與OR組相比,實驗組AdipodR2隨著力學(xué)刺激的增強其表達(dá)水平呈下降趨勢,統(tǒng)計分析有顯著差異(P0.05)；各組兩兩對比也存在顯著差異。 結(jié)論：1、體外模擬推拿按摩動態(tài)力學(xué)刺激可以抑制前脂肪細(xì)胞的增殖。動態(tài)力學(xué)刺激通過抑制前脂肪細(xì)胞的增殖可能是推拿防治單純性肥胖病癥的機(jī)制之一2、前脂肪細(xì)胞分化為成熟脂肪細(xì)胞并且貯存能量是肥胖發(fā)生的必經(jīng)途徑。實驗顯示前脂肪細(xì)胞可以感受按摩力學(xué)刺激,從而減弱PPAR和C/EBP、Adipod R1、 Adipod R2基因和蛋白的表達(dá),有效的證明了推拿按摩力學(xué)刺激可以參與前脂肪細(xì)胞分化、進(jìn)一步證明了,在體外按摩力學(xué)的干擾下,前脂肪細(xì)胞在向成熟脂肪細(xì)胞分化的過程得到了有效地抑制,說明前脂肪細(xì)胞可以主動參與和適應(yīng)生長環(huán)境中力學(xué)環(huán)境的變化這可能是推拿按摩防治肥胖的重要機(jī)理之一。
【關(guān)鍵詞】：推拿按摩 動態(tài)力學(xué)刺激 單純性肥胖 前脂肪細(xì)胞 細(xì)胞增殖 細(xì)胞分化 C/EBP PPAR AdipodRl AdipodR2
【學(xué)位授予單位】：貴陽中醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R244.1
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• Abstract9-13
• 引言13-16
• 第一部分 模擬按摩治療單純性肥胖的細(xì)胞力學(xué)模型的構(gòu)建16-21
• 1. 實驗材料16-17
• 2. 方法與結(jié)果17-20
• 3. 結(jié)論20-21
• 第二部分 體外按摩動態(tài)力學(xué)刺激對前脂肪細(xì)胞增殖的影響21-25
• 1. 實驗材料21
• 2. 方法與結(jié)果21-24
• 3. 結(jié)論24-25
• 第三部分 體外按摩動態(tài)力學(xué)刺激對前脂肪細(xì)胞PPAR、C/EBP、Adipod1、2基因及蛋白表達(dá)的影響25-50
• 1. 實驗動物25
• 2. 方法與結(jié)果25-49
• 3. 結(jié)論49-50
• 實驗結(jié)果總結(jié)50-51
• 全文討論51-61
• 1. 研究背景及本實驗擬解決問題51-53
• 2. 本課題實驗方法平臺的構(gòu)建53-54
• 3. 前脂肪細(xì)胞與肥胖發(fā)生的關(guān)系54
• 4. 按摩力學(xué)模型加載對前脂肪細(xì)胞生物功能改變的可行性分析54-55
• 5. 實驗結(jié)果分析55-59
• 6 本研究在按摩治療單純型肥胖中的意義與價值59-61
• 展望61-62
• 參考文獻(xiàn)62-65
• 附錄一：中英文縮略詞表65-66
• 附錄二：綜述66-70
• 參考文獻(xiàn)69-70
• 附錄三 致謝70-71
• 附錄四 個人簡介71

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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  本文關(guān)鍵詞：按摩動態(tài)力學(xué)刺激防治肥胖對前脂肪細(xì)胞增殖和分化功能的影響及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：368413