發(fā)布時(shí)間：2017-04-30 16:08

  本文關(guān)鍵詞：艾灸對AA大鼠“足三里”穴位局部與氧化磷酸化相關(guān)基因表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的： 采用全基因表達(dá)譜芯片和生物信息學(xué)分析技術(shù),挖掘氧化磷酸化信號通路對艾灸刺激響應(yīng)的潛在分子靶點(diǎn),運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)對潛在分子靶點(diǎn)進(jìn)行生物學(xué)驗(yàn)證,從氧化磷酸化的角度為穴位局部對艾灸刺激響應(yīng)的研究提供線索。 方法： (1)艾灸后“足三里”穴位局部氧化磷酸化信號通路及相關(guān)基因挖掘：將24只SD大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、溫和灸組、隔附灸組。模型組、溫和灸組、隔附灸組大鼠分別給予局部注射弗氏完全佐劑誘導(dǎo)佐劑性關(guān)節(jié)炎模型,造模后第7天,溫和灸組在“足三里”穴給予溫和灸15分鐘,隔附灸組在“足三里”穴給予隔附灸5壯。灸后2個(gè)小時(shí),立即取各組大鼠“足三里”穴位局部組織,提取并純化組織總RNA,用改良的cRNA反轉(zhuǎn)錄線性擴(kuò)增法對實(shí)驗(yàn)樣品和共同參照樣品進(jìn)行熒光標(biāo)記,用27k大鼠全基因表達(dá)譜芯片進(jìn)行雜交掃描,檢測“足三里”穴位局部對艾灸刺激響應(yīng)的基因表達(dá)譜,用微陣列顯著性檢驗(yàn)軟件(SAM)分別篩選溫和灸組、隔附灸組相對于模型組的差異基因表達(dá)譜,運(yùn)用隨機(jī)方差模型篩選共表達(dá)差異基因,用分子功能注釋系統(tǒng)(MAS)對共表達(dá)差異基因進(jìn)行信號通路分析和相關(guān)基因挖掘。(2)生物學(xué)重復(fù)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)：以SD大鼠為研究對象,動物實(shí)驗(yàn)的方法和操作完全和表達(dá)譜芯片實(shí)驗(yàn)的一致,提取組織總RNA后,用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)對艾灸后佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠“足三里”穴位局部氧化磷酸化信號通路的潛在分子靶點(diǎn)進(jìn)行驗(yàn)證。 結(jié)果： 1.溫和灸后“足三里”穴位局部差異表達(dá)基因共篩選出498個(gè),上調(diào)基因255個(gè)下調(diào)基因243個(gè)。隔附灸后“足三里”穴位局部差異表達(dá)基因共篩選出937個(gè)上調(diào)基因335個(gè),下調(diào)基因602個(gè)�！白闳铩毖ㄎ痪植繉睾途暮透舾骄拇碳ろ憫�(yīng)的共表達(dá)差異基因篩選出106個(gè),上調(diào)基因44個(gè),下調(diào)基因62個(gè)。篩選出共表達(dá)差異基因富集的信號通路27個(gè)(P0.001),其中氧化磷酸化信號通路中的參與基因分別是Cox7a2、Atp6v0d2、Atp5j。(以foldchange≥2.0|Score(d)|≥2和foldchange0.5|Score(d)|2分別作為上調(diào)基因和下調(diào)基因的篩選標(biāo)準(zhǔn))。 2.生物學(xué)重復(fù)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果：Cox7a2、Atp6v0d2、Atp5j的表達(dá)水平：模型組與空白組相比,三個(gè)基因均顯著下調(diào)(P0.05)；溫和灸組與模型組相比,三個(gè)基因均顯著上調(diào)(P0.05),與芯片結(jié)果一致；隔附灸組與模型組相比,三個(gè)基因均顯著上調(diào)(P0.05),與芯片結(jié)果一致；與溫和灸相比,隔附灸對三個(gè)基因的上調(diào)作用更明顯(P0.05),與芯片結(jié)果一致。 結(jié)論： 氧化磷酸化信號通路可能參與穴位局部對艾灸刺激的應(yīng)答,Cox7a2、 Atp6vOd2、Atp5j可能是艾灸對穴位局部氧化磷酸化信號通路影響的潛在分子靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：艾灸 氧化磷酸化作用 Cox7a2 Atp6v0d2 Atp5j 基因表達(dá)譜 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)
【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R245.81
【目錄】：

• 中文摘要2-4
• ABSTRACT4-8
• 縮略詞表8-9
• 前言9-11
• 實(shí)驗(yàn)研究11-44
• 第一部分 艾灸后“足三里”穴位局部氧化磷酸化信號通路及其分子靶點(diǎn)的挖掘11-38
• 1 實(shí)驗(yàn)材料11-14
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動物11
• 1.2 主要試劑盒11-12
• 1.3 主要儀器12-13
• 1.4 使用軟件13-14
• 2 實(shí)驗(yàn)方法14-20
• 2.1 動物分組與造模14
• 2.2 艾灸干預(yù)和樣本取材14
• 2.3 RNA提取和質(zhì)檢14-16
• 2.3.1 RNA提取14-15
• 2.3.2 RNA質(zhì)檢15
• 2.3.3 RNA純化15-16
• 2.4 RNA熒光標(biāo)記16-18
• 2.4.1 合成1st-strand cDNA16
• 2.4.2 合成2nd-strand cDNA16
• 2.4.3 體外轉(zhuǎn)錄合成cRNA16-17
• 2.4.4 反轉(zhuǎn)錄合成cDNA17
• 2.4.5 熒光標(biāo)記反應(yīng)17-18
• 2.5 雜交前芯片預(yù)處理和芯片雜交18-19
• 2.5.1 雜交前處理18
• 2.5.2 芯片雜交18-19
• 2.6 芯片清洗19
• 2.7 芯片掃描19
• 2.8 芯片數(shù)據(jù)分析19-20
• 2.9 對差異基因進(jìn)行信號通路篩選20
• 3 結(jié)果和分析20-38
• 3.1 動物總體情況觀察和足趾容積檢測20-21
• 3.2 差異基因篩選21-33
• 3.2.1 溫和灸組與模型組相比篩選出的差異基因21-25
• 3.2.2 隔附灸組與模型組相比篩選出的差異基因25-33
• 3.3 “足三里”穴位局部對溫和灸和隔附灸刺激響應(yīng)的的共表達(dá)差異基因篩選33-36
• 3.3.1 “足三里”穴位對溫和灸和隔附灸刺激響應(yīng)的共同上調(diào)基因33-34
• 3.3.2 “足三里”穴位對溫和灸和隔附灸刺激響應(yīng)的共同下調(diào)基因34-36
• 3.4 “足三里”穴位局部對溫和灸和隔附灸刺激響應(yīng)共表達(dá)差異基因信號通路篩選36-38
• 第二部分 艾灸后“足三里”穴位局部氧化磷酸化信號通路相關(guān)基因的生物學(xué)重復(fù)實(shí)驗(yàn)38-44
• 1 材料和方法38-41
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動物38
• 1.2 主要試劑、儀器及耗材38
• 1.3 動物分組與造模方法38
• 1.4 艾灸干預(yù)與取材38
• 1.5 RNA提取38-39
• 1.6 RNA質(zhì)檢39
• 1.7 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)步驟39-40
• 1.7.1 基因的引物設(shè)計(jì)39
• 1.7.2 以RNA為模板合成cDNA39
• 1.7.3 退火溫度39-40
• 1.7.4 各基因的qPCR反應(yīng)程序40
• 1.8 統(tǒng)計(jì)分析40-41
• 2 結(jié)果41-44
• 2.1 動物總體情況觀察和足趾容積檢測41
• 2.2 qPCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果41-42
• 2.3 qPCR與芯片結(jié)果對比42-44
• 討論44-53
• 1 基因芯片技術(shù)選擇與運(yùn)用44-45
• 2 選穴依據(jù)45-46
• 3 氧化磷酸化可能是艾灸作用的重要參與信號通路46-49
• 4. COX7A2、ATP6VOD2、ATP5J可能是艾灸后穴位局部氧化磷酸化通路的潛在分子靶點(diǎn)49-53
• 結(jié)論53-54
• 問題與展望54-55
• 致謝55-56
• 參考文獻(xiàn)56-62
• 附件一62-69
• 附件二：綜述69-76
• 參考文獻(xiàn)73-76
• 附件三：在讀期間公開發(fā)表的學(xué)術(shù)論文76-77

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：艾灸對AA大鼠“足三里”穴位局部與氧化磷酸化相關(guān)基因表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：337158