【摘要】：背景:研究認為骨髓基質細胞在損傷、缺血的腦脊髓組織中定向神經分化與損傷局部的微環(huán)境變化有關,特別是神經營養(yǎng)因子的誘導作用。課題組前期實驗已證實,針刺可以通過增加各種細胞因子及營養(yǎng)因子的表達,促進神經的再生及修復。目的:觀察電針聯(lián)合骨髓基質細胞移植對脊髓損傷大鼠神經功能恢復的影響。設計、時間及地點:隨機對照動物實驗,于2005-03/2006-07在哈爾濱醫(yī)科大學細胞生物實驗室完成。材料:健康純系SD大鼠80只,取8只用于骨髓基質細胞的分離培養(yǎng),剩余72只隨機分為4組:空白對照組、細胞移植組、電針組、聯(lián)合組,18只/組。KWD-808II型脈沖電針儀由江蘇武進第三無線電廠生產。方法:取體外分離培養(yǎng)的第3代骨髓基質細胞,移植前72h行BrdU標記,調整細胞濃度為1×1011L-1備用。4組大鼠均建立脊髓損傷模型,造模后細胞移植組將骨髓基質細胞懸液緩慢注入到脊髓損傷臨近區(qū)域的灰白質交界處,總細胞數6×105個;空白對照組同法注射等量磷酸鹽緩沖液;電針組于造模成功后24h采用脈沖電針儀進行夾脊電針治療,在距損傷處上下端兩個椎體的棘突間隙旁開距中線3.0~4.0mm處取穴,針刺20min,1次/d;聯(lián)合組行骨髓基質細胞移植+夾脊電針治療。主要觀察指標:移植后3,7,14d,應用聯(lián)合行為評分評估大鼠脊髓損傷后神經功能的改善狀況;免疫雙標法檢測BrdU標記的骨髓基質細胞膠質纖維酸性蛋白、神經元烯醇化酶的表達。結果:損傷后3,7,14d與空白對照組比較,細胞移植組、電針組、聯(lián)合組聯(lián)合行為評分均有顯著性差異(P0.05,0.05,0.01);聯(lián)合組神經功能恢復情況明顯優(yōu)于細胞移植組、電針組(P0.05);而細胞移植組、電針組之間比較無明顯差異(P0.05)。與空白對照組相比,細胞移植組、電針組損傷區(qū)脊髓結構相對較完整,聯(lián)合組脊髓結構更加完整,骨髓基質細胞移植的組織內可見BrdU標記細胞在損傷區(qū)及其周邊區(qū)明顯聚集并存活;移植后14d細胞移植組神經元烯醇化酶和膠質纖維酸性蛋白陽性細胞率分別分7.2%和1.5%,聯(lián)合組陽性細胞率分別為7.9%和2.1%。結論:骨髓基質細胞移植后可在宿主體內存活,電針可以促進骨髓基質細胞向神經細胞的分化,電針與骨髓基質細胞移植聯(lián)合應用可以明顯改善脊髓損傷大鼠的運動及感覺功能。
[Abstract]:Background: it is considered that directional nerve differentiation of bone marrow stroma cells in injured and ischemic cerebral and spinal cord tissues is related to the changes of local microenvironment, especially the induction of neurotrophic factors. Previous experiments have confirmed that acupuncture can promote nerve regeneration and repair by increasing the expression of various cytokines and nutritional factors. Objective: to observe the effect of electro-acupuncture combined with bone marrow stroma cell transplantation on the recovery of nerve function in rats with spinal cord injury. Design, time and place: a randomized controlled animal experiment was conducted in the Cell Biology Laboratory of Harbin Medical University in 2005 / 03 / 2006 / 07. Materials: 80 healthy pure SD rats were used for the isolation and culture of bone marrow stroma cells. The remaining 72 rats were randomly divided into 4 groups: blank control group, cell transplantation group, acupuncture group, combined group. KWD- 808II pulse needle instrument is produced by Jiangsu Wujin No. 3 Radio Factory. Methods: the third passage bone marrow stroma cells isolated and cultured in vitro were labeled with BrdU 72 hours before transplantation, and the cell concentration was adjusted to 1 脳 1011L-1. Spinal cord injury models were established in all four groups. In the cell transplantation group, the bone marrow stroma suspension was slowly injected into the gray and white matter junction of the adjacent area of spinal cord injury, and the total number of cells was 6 脳 105. The blank control group was injected with the same amount of phosphate buffer. In the EA group, 24 hours after the successful establishment of the model, the patients in the EA group were treated with pulse electro-acupuncture instrument. The acupoints were taken at the distance between the spinous process space of the two vertebrae at the upper and lower ends of the injury and the 3.0~4.0mm of the midline, and the acupuncture was done once a day for 20 minutes. The combined group was treated with bone marrow stroma cell transplantation with spinal acupuncture. Main outcome measures: the improvement of nerve function after spinal cord injury was evaluated by combined behavior score at 3, 7 and 14 days after transplantation. The expression of glial fibrillar acidic protein and neuron enolase in bone marrow stroma cells labeled with BrdU was detected by double immunostaining. Results: compared with the blank control group at 3, 7 and 14 days after injury, the combined behavior scores of cell transplantation group, acupuncture group and combined group were significantly different (P0.05, 0.05, 0.01). The recovery of nerve function in the combined group was significantly better than that in the cell transplantation group and the electro-acupuncture group (P 0.05), while there was no significant difference between the cell transplantation group and the acupuncture group (P 0.05). Compared with the blank control group, the spinal cord structure of the injured area in the cell transplantation group and the combined group was relatively complete, and the spinal cord structure in the combined group was more complete. In the tissue of bone marrow stroma cell transplantation, BrdU labeled cells were significantly aggregated and survived in the injured area and its surrounding area. On the 14th day after transplantation, the positive cell rates of neuron enolase and glial fibrillar acidic protein in the cell transplantation group were 7.2% and 1.5%, respectively, and those in the combined group were 7.9% and 2.1%, respectively. Conclusion: bone marrow Stromal cells can survive in the host body after transplantation, and EA can promote the differentiation of Bone Marrow Stromal cells into nerve cells. The combined application of electro-acupuncture and bone marrow stroma cell transplantation can significantly improve the motor and sensory function of spinal cord injury rats.
【作者單位】： 深圳市第六人民醫(yī)院疼痛科;
【基金】：黑龍江省研究生創(chuàng)新基金資助項目~~
【分類號】：R651.2;R245

【參考文獻】

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3 陳雅云;曾園山;張偉;陳玉玲;陳穗君;;督脈電針與NSCs移植聯(lián)合應用對大鼠脊髓全橫斷損傷組織NT-3含量及受體表達的影響[J];中國康復醫(yī)學雜志;2006年09期

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4 楊拯;何彥芳;陳建敏;梁楠;張曉;;電針在脊髓損傷功能康復中的研究[J];時珍國醫(yī)國藥;2011年01期

5 易受鄉(xiāng);洪金標;;針灸對效應靶器官細胞受體、G蛋白及離子通道影響的研究概況[J];中國中醫(yī)藥信息雜志;2009年04期

6 岳峰;蔡艷華;葉超群;;神經營養(yǎng)因子與脊髓損傷[J];中國康復醫(yī)學雜志;2010年09期

7 孫為增;王新家;林麗艷;;電針對急性脊髓損傷大鼠白細胞介素-1β表達變化的影響[J];中國康復理論與實踐;2009年03期

8 黨彥麗;李俊岑;楊拯;田蕓;張曉;;神經營養(yǎng)素-3修復脊髓損傷的研究進展[J];中國康復理論與實踐;2010年02期

9 胡德志,周良輔,朱劍虹;大鼠骨髓基質細胞腦池移植對創(chuàng)傷性腦損傷的治療效應的研究[J];中國神經精神疾病雜志;2004年05期

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2 李曉濱;曾園山;陳玉玲;郭家松;陳穗君;;督脈電針與神經干細胞移植聯(lián)合應用促進脊髓全橫斷大鼠受損傷的神經元存活及其軸突再生[J];解剖學報;2006年01期

3 許佳年,肖達,雎久紅,余愛珍,徐曉慶;電針抗脊髓損傷的實驗研究[J];上海針灸雜志;2003年05期

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5 曾園山,李曉濱,郭家松,陳雅云,丁英,陳玉玲;督脈電針與神經干細胞移植在脊髓損傷修復中的作用[J];中國康復醫(yī)學雜志;2005年06期

6 周雪,吳良芳,王廷華,諶宏鳴,保天然,廖德陽;針刺對部分去背根貓脊髓背角與備用背根節(jié)神經營養(yǎng)素家族及其mRNA表達的影響[J];中國針灸;2002年11期

7 許健鵬，，王明火，劉學茹，王征美，陳之罡，張進軍;以督脈電針為主治療脊髓損傷80例的臨床觀察[J];針灸臨床雜志;1994年06期

8 王新家,孔抗美,葉衛(wèi)蓮,楊小穎,林楠;針刺影響慢性脊髓損傷大鼠脊髓組織神經生長因子及其受體的表達[J];中醫(yī)正骨;2005年05期

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4 沈健;俞康;;血寶和再障患者血清對骨髓基質細胞的影響[A];中華醫(yī)學會第11屆全國內科學術會議論文匯編[C];2007年

5 方希敏;李原;錢江潮;周海霞;王菊香;曾煒煒;徐霞;;正常骨髓基質細胞對HL-60細胞分化作用的初探[A];第六屆江浙滬兒科學術會議暨兒科學基礎與臨床研究進展學術班論文匯編[C];2009年

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9 楊志軍;羅永春;張洪鈿;戴宜武;徐如祥;;Sinerem標記大鼠骨髓基質細胞及移植后活體示蹤研究[A];中華醫(yī)學會神經外科學分會第九次學術會議論文匯編[C];2010年

10 黃紅云;陳琳;;脊髓損傷的臨床細胞神經修復學治療方案[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經外科醫(yī)師分會第四屆全國代表大會論文匯編[C];2009年

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7 張荔子;中樞神經修復之路有多遠[N];健康報;2002年

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9 通訊員　匡遠深;骨髓基質細胞移植治療腦梗塞取得突破[N];光明日報;2003年

10 匡遠深;我國一項神外基礎實驗研究取得成果[N];中國醫(yī)藥報;2003年

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6 梁蓉;正常人骨髓成纖維樣基質細胞系對急性髓細胞性白血病細胞增殖、分化和凋亡的影響[D];第四軍醫(yī)大學;2004年

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8 宋艷秋;抗VEGF靶向治療白血病的研究[D];吉林大學;2006年

9 顧祖超;自體骨髓基質細胞定向誘導成骨分化修復節(jié)段性骨缺損的實驗研究[D];第三軍醫(yī)大學;2002年

10 趙延欣;重組人粒細胞集落刺激因子對局灶性腦缺血保護作用機制的研究[D];復旦大學;2004年

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7 高全文;VEGF基因轉染的骨髓基質細胞復合磷酸鈣陶瓷成骨能力研究[D];中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學;2003年

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9 周江;骨髓基質細胞和內皮細胞聯(lián)合種植構建組織工程化骨的研究[D];四川大學;2003年

10 谷云風;RCAS1在再生障礙性貧血中的表達[D];山西醫(yī)科大學;2010年

本文編號：2494894