本文關(guān)鍵詞：兩種頻率電項(xiàng)針對(duì)AD模型大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力分子機(jī)制的影響

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【摘要】：目的：探討兩種頻率電項(xiàng)針對(duì)阿爾茨海默病(Alzheimer's disease, AD)模型大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力分子機(jī)制的影響,以期更好地為電項(xiàng)針治療AD提供客觀的理論依據(jù)。 方法：20月齡、健康、清潔級(jí)、雄性SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周,經(jīng)Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)淘汰掉先天愚鈍鼠后,根據(jù)體重(320±50g)從小到大編號(hào),隨機(jī)分為空白組、假損傷組、模型組、2Hz治療組和50Hz治療組,每組10只�？瞻捉M僅給予正常飲食、飲水。假損傷組給予胃飼及腹腔注射與模型組等量的生理鹽水。模型組與治療組大鼠,每天給予20mg·ml-1的AlCl3水溶液2m1胃飼,48mg·kg-1的D-半乳糖腹腔注射,連續(xù)8周,余同空白組。 穴位與針具常規(guī)消毒,取大鼠項(xiàng)部雙側(cè)的“風(fēng)池”、“供血”,用Φ0.40mm×25mm毫針,直刺10mm,接DJ-6805D型脈沖電針儀,一組導(dǎo)線同側(cè)上下連接,正極連“風(fēng)池”穴,負(fù)極連“供血”穴。治療組根據(jù)頻率分為2Hz治療組和50Hz治療組。針刺通電持續(xù)刺激20min,每天1次,每周休息1天,連續(xù)治療4周�？瞻捉M、假損傷組、模型組不予治療,但采取與治療組同樣時(shí)間的抓取、綁定。 以Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)檢測(cè)AD大鼠行為學(xué)變化；以光、電鏡檢測(cè)海馬組織形態(tài)學(xué)、神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)；以免疫組化技術(shù)觀察pCREB1、BDNF、TrkB、 Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白的陽(yáng)性表達(dá)；以原位雜交技術(shù)觀察pCREB1、 BDNFmRNA的陽(yáng)性表達(dá)。應(yīng)用motic image3.2軟件對(duì)圖像進(jìn)行分析,并用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件處理收據(jù)。 結(jié)果： 1.行為學(xué)：造模前各組大鼠的逃避潛伏期、穿越平臺(tái)次數(shù)和靶象限游泳路程百分比無(wú)差異(P0.05)；造模完成后模型組、2Hz治療組及50Hz治療組與空白組及假損傷組比較,逃避潛伏期、穿越平臺(tái)次數(shù)和靶象限游泳路程百分比有明顯差異(P0.01)；治療結(jié)束后：與空白組及假損傷組比較,模型組逃避潛伏期、穿越平臺(tái)次數(shù)和靶象限游泳路程百分比有明顯差異(P0.01)；與模型組比較,2Hz治療組的逃避潛伏期、穿越平臺(tái)次數(shù)和靶象限游泳路程百分比有差異(P0.05),而50Hz治療組的有明顯差異(P0.01)；與2Hz治療組比較,50Hz治療組的逃避潛伏期、穿越平臺(tái)次數(shù)和靶象限游泳路程百分比有差異(P0.05)。 2.組織形態(tài)學(xué)：空白組細(xì)胞形態(tài)完整、染色均勻,核仁清晰。假損傷組存在少數(shù)炎性細(xì)胞。模型組細(xì)胞固縮,數(shù)目明顯減少,排列極不規(guī)整,部分細(xì)胞核溶解固縮,核周出現(xiàn)大量空泡物質(zhì)。2Hz治療組有少量細(xì)胞形態(tài)固縮,染色均勻,排列欠規(guī)整。50Hz治療組偶見(jiàn)細(xì)胞固縮,染色均勻,排列較規(guī)整,核仁明顯,細(xì)胞質(zhì)染色清晰。 3.神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)：空白組及假損傷組未見(jiàn)明顯變化；模型組溶酶體及脂褐素增多,神經(jīng)元內(nèi)尼氏體分散,線粒體空化,突觸小泡減少。2Hz治療組較模型組略有改善,有脂褐素存在,突觸小泡數(shù)目略有增加。50Hz治療組較模型組改善明顯,神經(jīng)元形態(tài)尚可,尼氏體相對(duì)較少,突觸小泡數(shù)目較多,部分線粒體空化。 4.免疫組化結(jié)果：(1)與空白組及假損傷組比較,模型組pCREB1、 BDNF、TrkB、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)檢測(cè)均有顯著性差異(P0.01)。(2)與模型組比較,2Hz治療組pCREB1、BDNF、TrkB、 Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)有差異(P0.05),50Hz治療組pCREB1、BDNF、TrkB、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)(P0.01)。(3)與2Hz治療組比較50Hz治療組pCREB1、BDNF、TrkB、 Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)(P0.05)。 5.原位雜交結(jié)果：(1)與空白組及假損傷組比較,模型組pCREB1mRNA、BDNFmRNA的陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)有明顯差異(P0.01)；(2)與模型組比較,2Hz治療組pCREB1mRNA、BDNFmRNA陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)有明顯差異(P0.05),50Hz治療組有明顯差異(P0.01)；(3)與2Hz治療組比較,pCREB1mRNA和BDNFmRNA陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)有差異(P0.05)。 結(jié)論： 1.兩種頻率電項(xiàng)針均可縮短AD模型大鼠的平均逃避潛伏期,提高靶象限游泳路程百分比,增加其穿越平臺(tái)次數(shù),且50Hz治療組療效好于2Hz治療組。 2.兩種頻率電項(xiàng)針均可改善AD模型大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞組織形態(tài)和超微結(jié)構(gòu),且50Hz治療組療效好于2Hz治療組。 3.兩種頻率電項(xiàng)針均可增加pCREB1和BDNF蛋白及mRNA、以及TrkB蛋白陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá),從而提高對(duì)海馬神經(jīng)元的保護(hù),且50Hz治療組療效好于2Hz治療組。 4.兩種頻率電項(xiàng)針均可增加Bcl-2陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá),減少Bax和Caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá),從而減少海馬神經(jīng)元的凋亡,且50Hz治療組療效好于2Hz治療組。 5.電項(xiàng)針對(duì)AD模型大鼠的治療作用與頻率快慢有關(guān),50Hz的療效優(yōu)于2Hz的療效。
【關(guān)鍵詞】：頻率 電項(xiàng)針 阿爾茨海默病 分子機(jī)制
【學(xué)位授予單位】：黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R245.97;R749.16
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表4-6
• 中文摘要6-9
• ABSTRACT9-13
• 前言13-14
• 文獻(xiàn)綜述14-28
• 1 中醫(yī)學(xué)對(duì)癡呆的認(rèn)識(shí)14-21
• 1.1. 癡呆的病名沿革14
• 1.2. 癡呆的臨床表現(xiàn)14-15
• 1.3. 癡呆的病因病機(jī)15-17
• 1.4. 癡呆的治療概況17-21
• 2 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)AD的認(rèn)識(shí)21-28
• 2.1. AD的危險(xiǎn)因素21-22
• 2.2. AD的臨床表現(xiàn)22-23
• 2.3. AD的流行病學(xué)23-24
• 2.4. AD的發(fā)病機(jī)制24-26
• 2.5. AD的治療概況26-28
• 實(shí)驗(yàn)研究28-47
• 1 實(shí)驗(yàn)材料28-29
• 1.1. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物28
• 1.2 主要儀器與試劑28-29
• 2 實(shí)驗(yàn)方法29-35
• 2.1. 動(dòng)物挑選與分組29
• 2.2. 模型制備及成功標(biāo)準(zhǔn)29
• 2.3. 針刺選穴及治療方法29-30
• 2.4. Morris水迷宮行為學(xué)檢測(cè)30-31
• 2.5. 固定與取材31-32
• 2.6. 海馬光、電鏡檢測(cè)32-33
• 2.7. 免疫組化技術(shù)檢測(cè)pCREB1、BDNF、TrkB、Bcl-2/Bax、Caspase-3蛋白33
• 2.8. 原位雜交技術(shù)檢測(cè)檢測(cè)pCREB1、BDNFmRNA33-34
• 2.9. 圖像分析34
• 2.10. 統(tǒng)計(jì)處理34
• 2.11. 附實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線圖34-35
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果35-47
• 3.1. 兩種頻率電項(xiàng)針對(duì)AD模型大鼠行為學(xué)的影響35-40
• 3.2. 兩種頻率電項(xiàng)針對(duì)AD模型大鼠組織形態(tài)學(xué)的影響40
• 3.3. 兩種頻率電項(xiàng)針對(duì)AD模型大鼠海馬神經(jīng)超微結(jié)構(gòu)的影響40-41
• 3.4. 兩種頻率電項(xiàng)針對(duì)pCREB1mRNA、蛋白陽(yáng)性表達(dá)的影響41-42
• 3.5. 兩種頻率電項(xiàng)針對(duì)BDNFmRNA、蛋白陽(yáng)性表達(dá)的影響42-43
• 3.6. 兩種頻率電項(xiàng)針對(duì)TrkB蛋白陽(yáng)性表達(dá)的影響43-44
• 3.7. 兩種頻率電項(xiàng)針對(duì)Bcl-2、Bax蛋白陽(yáng)性表達(dá)的影響44-46
• 3.8. 兩種頻率電項(xiàng)針對(duì)Caspase-3蛋白陽(yáng)性表達(dá)的影響46-47
• 討論47-62
• 1 實(shí)驗(yàn)方案的選擇47-52
• 1.1. AD動(dòng)物模型的評(píng)價(jià)與選擇47-49
• 1.2. 電項(xiàng)針參數(shù)的選擇49-52
• 1.3 針刺穴位的選擇及其作用機(jī)制52
• 2 兩種頻率電項(xiàng)針對(duì)AD模型大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力的影響52-53
• 3 兩種頻率電項(xiàng)針對(duì)AD模型大鼠海馬組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響53-54
• 4 兩種頻率電項(xiàng)針對(duì)AD模型大鼠海馬組織pCREB1-BDNF-TrkB陽(yáng)性表達(dá)的影響54-59
• 5 兩種頻率電項(xiàng)針對(duì)AD模型大鼠海馬組織Bcl-2/Bax及caspase-3陽(yáng)性表達(dá)的影響59-60
• 6 課題不足與展望60-62
• 結(jié)論62-63
• 附圖63-73
• 致謝73-74
• 參考文獻(xiàn)74-91
• 附錄91-96
• 個(gè)人簡(jiǎn)介96

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1063317