本文關(guān)鍵詞：電針和BMSC移植聯(lián)合應(yīng)用對脊髓損傷再生修復(fù)的基因調(diào)控機制研究

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【摘要】： 目的： 探索電針促進(jìn)骨髓基質(zhì)細(xì)胞(bone marrow stromal cells，BMSCs)分化為神經(jīng)細(xì)胞的可行性；通過把現(xiàn)代BMSC移植技術(shù)與傳統(tǒng)針刺療法相結(jié)合，為臨床中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療及損傷修復(fù)開創(chuàng)一種新型、安全、有效的治療方法，并揭示其基因調(diào)控機制。 實驗動物： SD健康幼鼠8只，體重約100g左右，雌雄不限，用來進(jìn)行BMSCs原代培養(yǎng)。 SD健康成年大鼠81只，體重250±20g，雌雄不限，隨機分為五組： (1)假手術(shù)組：9只，僅咬除T_(11、12)棘突和椎板； (2) PBS組：18只，脊髓ALLEN’S打擊傷后在損傷臨近區(qū)注射PBS； (3) BMSC組：18只，脊髓ALLEN’S打擊傷后在損傷臨近區(qū)注射5-溴脫氧核苷尿嘧啶(BrdU)標(biāo)記的BMSCs； (4)電針組：18只，脊髓ALLEN’S打擊傷后24h進(jìn)行電針治療； (5)電針BMSC組(電針與BMSC移植聯(lián)合應(yīng)用)：18只，受損脊髓移植BrdU標(biāo)記過的BMSCs后24h進(jìn)行電針治療； 以上各組分為移植后3d、7d、14d三個時相點。 實驗方法： 1．體外分離培養(yǎng)BMSCs，鏡下進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察； 2．移植后3天、7天、14天，應(yīng)用CBS評分法評價治療前后損傷大鼠神經(jīng)功能改善狀況。 3．應(yīng)用光鏡觀察損傷脊髓組織形態(tài)學(xué)變化；應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測BrdU標(biāo)記的BMSCs在體內(nèi)存活情況。 4．于移植后第14天應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測BrdU標(biāo)記的BMSCs的神經(jīng)元烯醇化酶(NSE)、膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)表達(dá)情況。 5．移植后3天、7天、14天，應(yīng)用原位雜交方法檢測損傷大鼠脊髓BDNF、NGFmRNA表達(dá)變化情況。 結(jié)果： 1．BMSCs的原代和傳代培養(yǎng)：原代細(xì)胞呈集落趨勢貼壁生長，分布不均勻。接種10天左右，細(xì)胞融合達(dá)90％以上，此時進(jìn)行傳代培養(yǎng)。傳代后細(xì)胞增殖迅速，7天左右細(xì)胞即融合。傳代后的細(xì)胞生長均勻，大部分呈長梭形。 2．各時相點的各組動物神經(jīng)功能均有不同程度的恢復(fù)。BMSC組、電針組與PBS組比較神經(jīng)功能評分有顯著性差異(P＜0.05)；電針BMSC組與PBS組比較有非常顯著性差異(P＜0.01)；而電針BMSC組與單純BMSC組和單純電針組比較，神經(jīng)功能恢復(fù)的更好，，評分亦有顯著性差異(P＜0.05)；而BMSC組和電針組比較無顯著性差異(P＞0.05)。 3．BMSC組、電針組損傷區(qū)的脊髓結(jié)構(gòu)與PBS組相比，相對較完整，而電針BMSC組的脊髓結(jié)構(gòu)明顯優(yōu)于單純BMSC組和單純電針組；進(jìn)行了BMSCs移植的組織內(nèi)可見BrdU標(biāo)記的細(xì)胞在損傷區(qū)及其周邊區(qū)明顯聚集并存活。 4．BMSCs移植14d后，BrdU標(biāo)記的陽性細(xì)胞表達(dá)NSE和GFAP的百分率分別為：BMSC組為7.2％和1.5％；電針BMSC組為7.9％和2.1％。 5．BMSC組與電針組損傷脊髓BDNF、NGFmRNA表達(dá)較PBS組有明顯增加(P＜0.05)；電針BMSC組較PBS組表達(dá)增加更為明顯(P＜0.01)；電針BMSC組與單純BMSC組和單純電針組比較BDNF、NGFmRNA的表達(dá)亦有明顯增加(P＜0.05)；電針組與BMSC組比較無顯著性差異(P＞0.05)。 結(jié)論： BMSCs移植后可在宿主體內(nèi)存活并分化為神經(jīng)細(xì)胞；電針可以促進(jìn)骨髓基質(zhì)細(xì)胞分化為神經(jīng)細(xì)胞；電針與骨髓基質(zhì)細(xì)胞移植聯(lián)合應(yīng)用可以明顯促進(jìn)脊髓損傷大鼠的運動及感覺功能恢復(fù)；電針與骨髓基質(zhì)細(xì)胞移植聯(lián)合應(yīng)用，可以改變脊髓損傷區(qū)的微環(huán)境，上調(diào)損傷脊髓局部的BDNF、NGFmRNA的表達(dá)，這可能是減少脊髓繼發(fā)性損傷，促進(jìn)損傷大鼠脊髓結(jié)構(gòu)修復(fù)及其功能恢復(fù)的機制之一。
【關(guān)鍵詞】：骨髓基質(zhì)細(xì)胞 移植 神經(jīng)細(xì)胞 脊髓損傷 電針
【學(xué)位授予單位】：黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R246;R651.2
【目錄】：

• 縮略語表3-4
• 中文摘要4-7
• Abstract7-10
• 前言10-11
• 文獻(xiàn)綜述11-40
• 一、干細(xì)胞的概念和分類11-12
• 二、骨髓基質(zhì)細(xì)胞的研究進(jìn)展12-34
• 三、中醫(yī)對脊髓損傷的認(rèn)識34-36
• 四、針刺治療脊髓損傷的機理研究36-40
• 實驗研究40-58
• 實驗一 電針促進(jìn)骨髓基質(zhì)細(xì)胞分化為神經(jīng)細(xì)胞的實驗研究40-51
• 實驗二 電針和骨髓基質(zhì)細(xì)胞移植聯(lián)合應(yīng)用對脊髓損傷大鼠BDNF、NGFmRNA表達(dá)影響的實驗研究51-58
• 討論58-73
• 一、關(guān)于實驗性脊髓損傷模型的建立58-59
• 二、SCI模型動物運動能力評分法59-61
• 三、BMSC在受損脊髓組織中的神經(jīng)分化61-62
• 四、神經(jīng)生長因子對BMSC分化的誘導(dǎo)作用62-66
• 五、電針與BMSCs移植聯(lián)合應(yīng)用對大鼠脊髓損傷組織 BDNFmRNA和NGFmRNA表達(dá)的影響66-69
• 六、電針聯(lián)合骨髓基質(zhì)細(xì)胞移植治療脊髓損傷的可能機制69-70
• 七、電針聯(lián)合骨髓基質(zhì)細(xì)胞移植在脊髓損傷治療中的優(yōu)越性70-71
• 八、目前骨髓基質(zhì)細(xì)胞臨床應(yīng)用所存在的問題71-73
• 結(jié)論73-74
• 致謝74-75
• 參考文獻(xiàn)75-90
• 附圖90-98
• 個人簡歷98

【引證文獻(xiàn)】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 魏祥科;BMSCs聯(lián)合去細(xì)胞肌肉生物支架對急性大鼠脊髓半切損傷修復(fù)的影響[D];蘭州大學(xué);2013年

本文編號：1041362