手術治療是膽管癌唯一根治的手段,但膽管癌起病隱匿,被查出時大都已是晚期,癌細胞已發(fā)生轉(zhuǎn)移,不適合手術治療,因此尋找敏感性高且毒副作用小的天然抗腫瘤藥物對于不能手術切除的膽管癌患者具有重要意義。薯蕷皂苷元(DSG)作為一種用途廣泛的甾體化合物,具有多種藥用功效。近年來,DSG的抗癌作用在多種不同腫瘤中不斷被發(fā)現(xiàn),但對膽管癌的具體作用及機制研究寥寥無幾。本論文以膽管癌細胞為研究對象,在體內(nèi)外水平探究DSG在膽管癌中的作用及機理。細胞水平:MTS法檢測發(fā)現(xiàn)DSG抑制膽管癌細胞增殖,且呈濃度和時間依賴性,此外,DSG對膽管癌細胞克隆形成能力也具有明顯抑制效果。流式檢測結(jié)果表明DSG使得膽管癌細胞發(fā)生G2/M期周期阻滯并誘導凋亡。WB結(jié)果顯示CyclinB1的蛋白表達水平隨藥物濃度升高而降低,p21呈升高趨勢,這提示DSG或通過對CyclinB1和P21的調(diào)控造成細胞周期阻滯,影響細胞周期進程進而導致生長抑制甚至凋亡。我們還發(fā)現(xiàn)經(jīng)藥物處理后Bax/Bcl-2的比例顯著升高,Caspase3和PARP-1明顯發(fā)生片段化;細胞色素C在線粒體中表達降低,胞漿中表達升高;z-VAD-fmk(Caspase...

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖４Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８染色觀察ＤＳＧ對ＣＣＡ細胞形態(tài)的影響（２４ｈ，?ｘ２００）??

細胞核染色未見濃縮致密；而藥物處理組，隨著ＤＳＧ作用濃度的升高，細胞數(shù)??量逐漸減少，核內(nèi)表現(xiàn)出細胞核質(zhì)固縮甚至胞核碎裂和濃度致密的顆粒狀強藍色??熒光現(xiàn)象，部分細胞形成大小不等的凋亡小體（圖４）。以上現(xiàn)象表明ＤＳＧ使??抑制細胞增殖與并誘發(fā)細胞凋亡現(xiàn)象。?．??ＱＢ，Ｈ?Ｗｎ?....

圖６?ＤＳＧ對ＣＣＡ細胞集落形成能力的影響??

４．３?ＤＳＧ抑制膽管癌細胞克隆形成??克隆形成率是反映細胞群體依賴性和增殖能力的重要指標，于是我們探究了??ＤＳＧ對膽管癌細胞克隆形成能力的影響。如圖６、７，對照組細胞集落形成最多，??克隆形成能力最強，集落分布密集且面積較大；隨著藥物濃度升高最終形成的細??胞克隆數(shù)越少，最高....

圖７?ＤＳＧ抑制集落形成能力的數(shù)據(jù)分析??

圖７?ＤＳＧ抑制集落形成能力的數(shù)據(jù)分析??Ｆｉｇ．?７?Ｄａｔａ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｃｌｏｎｅ－ｆｏｒｍｉｎｇ?ａｂｉｌｉｔｙ?ａｆｔｅｒ?ｔｒｅａｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ＤＳＧ??

圖１０?ＤＳＧ對膽管癌ＣＣＡ細胞基因轉(zhuǎn)錄水平的影響??

４．４．２?ＤＳＧ對細胞周期相關因子轉(zhuǎn)錄和蛋白水平的影響??本實驗中，我們使用ｑＲＴ－ＰＣＲ法對這兩個重要因子的轉(zhuǎn)錄水平進行了檢測。??結(jié)果如圖１０所示，兩組細胞經(jīng)不同濃度ＤＳＧ處理２４ｈ后：對照組與藥物處理??．?組相比較，兩株細胞的ｐ２１均表現(xiàn)輕微升高，而ＣｙｃｌｉｎＢｌ表達....

本文編號：4044059