發(fā)布時(shí)間：2025-02-11 19:12

　　 目的:觀察益氣化瘀方聯(lián)合過表達(dá)Mash-1修飾的胚胎干細(xì)胞對(duì)小鼠脊髓損傷的修復(fù)作用。方法:采用鉗夾法建立小鼠急性脊髓損傷模型,于造模后第3天將Mash-1修飾的胚胎干細(xì)胞移植到脊髓損傷部位,并給予益氣化瘀方干預(yù)。通過觀察小鼠的后肢功能評(píng)分、脊髓的剩余面積以及神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、炎癥因子和凋亡相關(guān)基因的表達(dá)改變;并采用免疫熒光檢測(cè)OCT3/4、nestin、β-tubulin Ⅲ、GFAP的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目,分析移植細(xì)胞在體內(nèi)的存活和分化情況。結(jié)果:與模型組比較,益氣化瘀方可減少炎癥因子TNF-α和凋亡基因caspase-3的表達(dá),輕微提高小鼠運(yùn)動(dòng)功能。與單純干細(xì)胞移植組比較,益氣化瘀方聯(lián)合Mash-1修飾胚胎干細(xì)胞移植能減少炎癥因子TNF-α的基因表達(dá)水平,提高移植細(xì)胞的存活數(shù)量,進(jìn)而改善小鼠的后肢運(yùn)動(dòng)評(píng)分。結(jié)論:益氣化瘀方能減輕脊髓損傷的炎癥反應(yīng),增加移植細(xì)胞在脊髓損傷部位的存活數(shù)量,促進(jìn)脊髓損傷的修復(fù)。

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【部分圖文】：

圖5 造模后14 d和28d各組神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、炎癥因子和凋亡相關(guān)基因的表達(dá)情況圖

益氣化瘀方能輕微改善小鼠脊髓損傷后的神經(jīng)功能，可能通過減少炎癥因子IL-1、TNF-α和凋亡相關(guān)基因caspase-3的表達(dá)，促進(jìn)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子BDNF、NT-3的表達(dá)，進(jìn)而減輕脊髓的繼發(fā)性損傷。文獻(xiàn)報(bào)道，益氣化瘀方可以減輕慢性脊髓損傷和椎間盤退變引起的炎癥反應(yīng)[7,12]。在之前....

圖1 術(shù)后第28天各組小鼠的后肢運(yùn)動(dòng)功能照片

術(shù)后第1天，假手術(shù)組的小鼠后肢的運(yùn)動(dòng)功能均為正常，評(píng)分值為9分；造模后各造模組的小鼠后肢出現(xiàn)明顯運(yùn)動(dòng)功能障礙，評(píng)分均為0。術(shù)后第7天，即細(xì)胞注射和給藥后第4天，干細(xì)胞組和聯(lián)合組的小鼠后肢運(yùn)動(dòng)功能有部分恢復(fù)，與模型組和中藥組比較均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。在造模后的第14、2....

圖2 造模后14d和28d時(shí)各組脊髓橫切面HE染色圖

從脊髓橫切面HE染色可見，在造模后的14天和28天時(shí)，模型組和中藥組小鼠的脊髓橫切面剩余面積明顯減少，與假手術(shù)組比較存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01）。干細(xì)胞組和聯(lián)合組的小鼠脊髓剩余面積均有明顯的恢復(fù)，與模型組和中藥組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01）。假手術(shù)組、干細(xì)胞組和聯(lián)合組三組....

圖3 術(shù)后第14d和28d，脊髓組織免疫熒光染色圖

由于CE3胚胎干細(xì)胞帶有GFP，因此可在熒光顯微鏡下通過綠色熒光跟蹤移植細(xì)胞在體內(nèi)的存活數(shù)量和所在位置，進(jìn)一步通過帶紅色熒光的二抗與不同的一抗結(jié)合可觀察到移植的細(xì)胞在體內(nèi)的存活和分化情況。免疫熒光染色結(jié)果顯示，干細(xì)胞組與聯(lián)合組的OCT3/4、nestin、β-tubulinII....

本文編號(hào)：4033729