目的:采用超濾離心質(zhì)譜法篩選和鑒定當(dāng)歸四逆湯（DSD）中直接凝血酶（THR）抑制劑。方法:采用體外酶活性實驗結(jié)合超濾離心質(zhì)譜技術(shù)（UF-UPLC/Q-TOF/MS）篩選和鑒定當(dāng)歸四逆湯中THR的特異性結(jié)合配體。結(jié)果:當(dāng)歸四逆湯水提物表現(xiàn)出了較強的THR抑制活性,其IC₅₀為0.119 41 mg/mL。使用UF-UPLC-DAD/LC-MS篩選并鑒定了17種潛在直接THR抑制劑,分別為藁本內(nèi)脂、丁基苯酞、香芹酮、辛醇葡萄糖苷、Valenciaxanthin、當(dāng)歸內(nèi)酯、甘草寧、Apo-10’-violaxanthal、香豆基棕櫚酸、亞麻酸、環(huán)四（異）亮氨酸、環(huán)六（異）亮氨酸、環(huán)七（異）亮氨酸、氧化芍藥苷、Kanzonol P、苯甲酰芍藥苷、白芍苷R3。結(jié)論:超濾離心質(zhì)譜法可以有效地篩選當(dāng)歸四逆湯中的潛在THR抑制劑,并為進一步確定天然產(chǎn)物中直接THR抑制劑提供實驗依據(jù)。

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圖1 DSD提取物對THR抑制作用的劑量效應(yīng)曲線

DSD對THR的抑制活性測定表明，DSD提取物對凝血酶的抑制率隨著DSD濃度的增加而增大，并在0.25mg/mL時達到最大抑制率。結(jié)果見圖1。2.2篩選條件的優(yōu)化

圖2 篩選條件優(yōu)化

DSD復(fù)方中的主要成分包含酚酸（如阿魏酸，香草酸），單萜苷類類（如芍藥苷，氧化芍藥苷）和鄰苯二甲酸酯（如藁本內(nèi)脂）等。本實驗使用超濾離心質(zhì)譜法篩選了當(dāng)歸四逆湯水提液中潛在的直接凝血酶抑制劑。通過質(zhì)譜分析以及數(shù)據(jù)庫比對，對篩選出的潛在活性化合物進行了指認(rèn)，鑒定出藁本內(nèi)脂、丁基苯酞、....

圖3 正離子模式（左）和負(fù)離子模式（右）下的色譜圖

圖2篩選條件優(yōu)化圖4正離子模式（左）和負(fù)離子模式（右）下的多元統(tǒng)計分析圖

圖4 正離子模式（左）和負(fù)離子模式（右）下的多元統(tǒng)計分析圖

圖3正離子模式（左）和負(fù)離子模式（右）下的色譜圖4結(jié)論

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