目的:通過觀察加味陽和湯含藥血清對乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期、凋亡以及PI3K/Akt信號通路相關(guān)基因和蛋白表達(dá)的影響。初步探討其干預(yù)PI3K/Akt信號通路及抗侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制,為進(jìn)一步探討溫陽化痰法治療乳腺癌的具體分子機(jī)制,拓寬其應(yīng)用空間奠定研究基礎(chǔ)。方法:不同劑量加味陽和湯含藥血清干預(yù)乳腺癌MCF-7細(xì)胞�！�1觀察細(xì)胞生長狀態(tài)及細(xì)胞形態(tài)的改變;○2 MTT法檢測細(xì)胞增殖;○3流式細(xì)胞術(shù)測定細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡;○4劃痕法及Transwell小室法檢測細(xì)胞侵襲能力;○5 RT-PCR法測定PI3K、Akt、caspase-3、cyclinD₁、Bcl-2及BaxmRNA的表達(dá)水平;○6 Western Blot法測定PI3K、Akt、p-Akt、MMP-2、TIMP-2蛋白的表達(dá)。結(jié)果:①倒置顯微鏡下可見,經(jīng)加味陽和湯含藥血清干預(yù)后細(xì)胞發(fā)生不同程度的形態(tài)學(xué)改變。② MTT法結(jié)果顯示,加味陽和湯含藥血清可抑制乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖。③ FCM測定細(xì)胞周期結(jié)果顯示,加味陽和湯含藥血清作用于乳腺癌MCF-7細(xì)胞48h后,各劑量組G₀/G...

【文章頁數(shù)】：100 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
縮略詞表
引言
實(shí)驗(yàn)研究
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.3 受試藥物
        1.4 主要試劑
        1.5 主要儀器
        1.6 主要試劑配制
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 受試藥物配制
        2.2 含藥血清制備
        2.3 乳腺癌MCF-7細(xì)胞懸液制備
        2.4 MTT比色法測定細(xì)胞增殖
        2.5 檢測細(xì)胞侵襲能力
        2.6 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡
        2.7 實(shí)時(shí)熒光定量檢測PI3K/Akt通路及凋亡相關(guān)基因表達(dá)
        2.8 WesternBlot檢測PI3K、Akt、p-Akt、MMP-2、TIMP-2蛋白的表達(dá)
        2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 對MCF-7細(xì)胞生長的影響
            3.1.1 對乳腺癌MCF-7細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響
            3.1.2 抑制增殖
        3.2 對MCF-7細(xì)胞周期的影響
        3.3 對細(xì)胞凋亡的影響
        3.4 對PI3K、Akt、caspase-3、cyclinD1、Bcl-2、Bax磷酸化水平的影響
        3.5 對PI3K、Akt、p-Akt蛋白的表達(dá)
        3.6 對細(xì)胞侵襲能力的影響
            3.6.1 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)
            3.6.2 Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)
            3.6.3 腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)因子MMP-2、TIMP-2的表達(dá)
討論
    1 加味陽和湯治療乳腺癌的中醫(yī)機(jī)制
        1.1 陽虛痰凝致乳腺癌的中醫(yī)機(jī)理
        1.2 溫陽化痰法在乳腺癌治療中的應(yīng)用
        1.3 加味陽和湯配伍原理
    2 乳腺癌PI3K/Akt信號通路相關(guān)發(fā)病機(jī)制
        2.1 PI3K/Akt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的分子結(jié)構(gòu)
        2.2 PI3K/Akt信號傳導(dǎo)通路的激活
        2.3 PI3K/Akt信號傳導(dǎo)通路的生物效應(yīng)
        2.4 PI3K/Akt信號通路與乳腺癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系
    3 加味陽和湯抗乳腺癌的作用機(jī)制
        3.1 血清藥理學(xué)方法的選擇
        3.2 加味陽和湯對乳腺癌細(xì)胞MCF-7生長的抑制作用
        3.3 加味陽和湯調(diào)控乳腺癌MCF-7細(xì)胞周期
        3.4 加味陽和湯抑制乳腺癌MCF-7細(xì)胞凋亡
            3.4.1 抑制細(xì)胞凋亡率
            3.4.2 調(diào)控細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制
        3.5 抗乳腺癌細(xì)胞MCF-7侵襲能力
        3.6 加味陽和湯干預(yù)PI3K/Akt通路的作用
        3.7 加味陽和湯抗乳腺癌MCF-7的網(wǎng)絡(luò)作用機(jī)制
結(jié)論
特色與創(chuàng)新
問題與展望
致謝
參考文獻(xiàn)
附件1：附圖
附件2：文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
附件3：文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
附件4：在讀期間公開發(fā)表的學(xué)術(shù)論文、專著及科研成果



本文編號：4023520