目的:孕烷X受體（pregnane X receptor,PXR）作為核受體（nuclear receptor,NR）超家族成員之一,廣泛分布在肝臟、腸、腎臟中,參與體內(nèi)眾多藥物代謝酶及轉(zhuǎn)運(yùn)體的調(diào)控,在機(jī)體內(nèi)內(nèi)源性和外源性物質(zhì)和藥物的吸收、分布、代謝及排泄等過程中扮演重要角色。前期實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建了基于分泌型Gaussia熒光素酶報(bào)告基因PXR-CYP3A4通路的穩(wěn)定工程細(xì)胞株并成功用于PXR激活效應(yīng)的快速篩選,發(fā)現(xiàn)丹參中主要有效脂溶性成分丹參酮ⅡA（Tanshinone ⅡA,Tan ⅡA）具有明顯的PXR激活效應(yīng),同時(shí)Tan ⅡA亦被證實(shí)具有明顯的心血管保護(hù)效應(yīng)。近來文獻(xiàn)報(bào)道PXR除了在肝臟表達(dá)外,在心血管系統(tǒng)中也有大量表達(dá),那么Tan ⅡA的潛在藥理效應(yīng)及其心血管保護(hù)作用是否與其激活PXR有關(guān)。因此,本課題主要是基于PXR研究Tan ⅡA血管保護(hù)的效應(yīng)機(jī)制。依據(jù)PXR效應(yīng)的篩選結(jié)果,首先通過人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（human umbilical vein endothelial,HUVECs）細(xì)胞為載體,進(jìn)一步確證Tan ⅡA對(duì)PXR表達(dá)以及活性的影響,利用過氧化氫（hydrogen pero...

【文章頁(yè)數(shù)】：77 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
英文縮略詞
摘要
Abstract
第一部分 丹參酮ⅡA對(duì)HUVECs中PXR的激活作用
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 藥品與試劑
        2.2 儀器與設(shè)備
        2.3 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.4 藥物母液配制
        2.5 CCK-8 檢測(cè)HUVECs細(xì)胞活力
        2.6 q RT-PCR檢測(cè)PXR和CYP3A4的mRNA表達(dá)
        2.7 Western-blot檢測(cè)PXR的蛋白表達(dá)
        2.8 siRNA轉(zhuǎn)染PXR基因
        2.9 統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果
        3.1 丹參酮ⅡA和H₂O₂對(duì)HUVECs細(xì)胞活力的影響
        3.2 丹參酮ⅡA對(duì)HUVECs細(xì)胞PXR mRNA和蛋白的影響
        3.3 丹參酮ⅡA對(duì)HUVECs細(xì)胞CYP3A4 mRNA影響
    4 討論
第二部分 丹參酮ⅡA通過激活PXR保護(hù)H₂O₂誘導(dǎo)的細(xì)胞氧化損傷
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 藥品與試劑
        2.2 儀器與設(shè)備
        2.3 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.4 藥物母液配制
        2.5 CCK-8 檢測(cè)HUVECs細(xì)胞活力
        2.6 HUVECs細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
        2.7 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)HUVECs細(xì)胞ROS含量
        2.8 ELISA檢測(cè)HUVECs細(xì)胞GSH和GSSG含量
        2.9 qRT-PCR檢測(cè)HUVECs細(xì)胞PXR、MDR1、GST、GPx和GSTM1 mRNA表達(dá)
        2.10 siRNA轉(zhuǎn)染HUVECs細(xì)胞PXR基因
        2.11 統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果
        3.1 丹參酮ⅡA和H₂O₂對(duì)HUVECs細(xì)胞形態(tài)的影響
        3.2 PXR在丹參酮ⅡA保護(hù)H₂O₂誘導(dǎo)的HUVECs細(xì)胞損傷的作用
        3.3 PXR對(duì)丹參酮ⅡA誘導(dǎo)的代謝酶和抗氧化酶基因表達(dá)的影響
        3.4 PXR對(duì)丹參酮ⅡA誘導(dǎo)的抗氧化酶蛋白表達(dá)的影響
    4 討論
第三部分 丹參酮ⅡA激活PXR保護(hù)H₂O₂誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡和炎癥
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 藥品與試劑
        2.2 儀器與設(shè)備
        2.3 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.4 藥物母液配制
        2.5 細(xì)胞凋亡檢測(cè)
        2.6 線粒體膜電位檢測(cè)
        2.7 細(xì)胞Caspace3/7、8、9 檢測(cè)
        2.8 Hoechst 33342 凋亡形態(tài)學(xué)檢測(cè)
        2.9 Western-blot檢測(cè)凋亡信號(hào)分子
        2.10 高內(nèi)涵檢測(cè)凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)的易位
        2.11 DNA fragment檢測(cè)
        2.12 丹參酮ⅡA對(duì)H₂O₂誘導(dǎo)HUVECS細(xì)胞粘附的影響
        2.13 PXR對(duì)丹參酮ⅡA保護(hù)H₂O₂誘導(dǎo)HUVECS細(xì)胞IL-8 的影響
        2.14 統(tǒng)計(jì)分析
    3 結(jié)果
        3.1 PXR對(duì)H₂O₂誘導(dǎo)的HUVECs細(xì)胞凋亡的影響
        3.2 丹參酮ⅡA對(duì)H₂O₂損傷的細(xì)胞核和Caspase酶的影響
        3.3 PXR對(duì)H₂O₂誘導(dǎo)的HUVECs細(xì)胞凋亡信號(hào)分子的影響
        3.4 高內(nèi)涵檢測(cè)丹參酮ⅡA對(duì)凋亡誘導(dǎo)因子核內(nèi)移位的影響
        3.5 丹參酮ⅡA對(duì)H₂O₂誘導(dǎo)的HUVECs細(xì)胞DNA fragment的影響
        3.6 Tan ⅡA對(duì)H₂O₂誘導(dǎo)HUVECS細(xì)胞粘附的影響
        3.7 PXR對(duì)丹參酮ⅡA保護(hù)H₂O₂誘導(dǎo)HUVECS細(xì)胞炎癥的影響
    4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄 個(gè)人簡(jiǎn)歷
致謝
綜述 PXR/CYP的生物學(xué)特性及參與體內(nèi)代謝的作用
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：4023033