目的:1.高效、穩(wěn)定的體外培養(yǎng)大量的骨髓間充質干細胞(BMSCs),并對BMSCs進行細胞生物學鑒定。2.觀察梓醇對BMSCs的細胞增殖作用,深入探討梓醇對BMSCs促成軟骨分化的作用。3.觀察梓醇對體外BMSCs細胞遷移的影響,進一步研究梓醇在促細胞遷移過程與Wnt非經(jīng)典信號通路Wnt5a/CaMKII的關系。方法:1.應用全骨髓貼壁法培養(yǎng)SD大鼠BMSCs,取狀態(tài)良好的第3代BMSCs行細胞表面抗原流式細胞檢測及誘導成脂肪、成骨細胞分化。2.CCK-8法檢測梓醇對BMSCs增殖的影響,RT-PCR檢測梓醇對BMSCs分化為軟骨細胞的特異性基因COLⅠ、Aggrecan和SOX9基因的表達。3.Transwell法觀察梓醇對BMSCs細胞遷移的影響,并通過構建過表達Wnt5a慢病毒載體的方法感染BMSCs。通過熒光顯微鏡觀察綠色熒光蛋白熒光表達及RT-PCR檢測Wnt5a基因的表達量確定慢病毒感染效果。進一步Western-blot檢測慢病毒感染BMSCs中CaMKII的表達來觀察梓醇對其下游CaMKII蛋白的影響。結果:1.流式細胞檢測細胞表面抗原標志物結果顯示CD29、CD44、C...

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

AB圖1.1培養(yǎng)24h的原代細胞A和培養(yǎng)至第3代細胞B的形態(tài)學觀察(100×）（三）BMSCs的流式細胞鑒定SD大鼠BMSCs流式細胞儀檢測結果顯示，培養(yǎng)的第3代BMSCs均表達CD29、CD44、CD90，陽性率分別為99.84%、96....

AB圖1.1培養(yǎng)24h的原代細胞A和培養(yǎng)至第3代細胞B的形態(tài)學觀察(100×）（三）BMSCs的流式細胞鑒定SD大鼠BMSCs流式細胞儀檢測結果顯示，培養(yǎng)的第3代BMSCs均表達CD29、CD44、CD90，陽性率分別為99.84%、96....

梓醇對BMSCs成軟骨分化及體外遷移能力的實驗研究骨、成脂誘導分化可見BMSCs體外成骨誘導3周后茜素紅染色，細胞化結節(jié)形成，并逐漸融合，見圖1.3；成脂誘導2，顯示細胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)染紅的脂滴，形態(tài)大小不一合，見圖1.4。××

圖1.4成脂誘導染紅脂滴(×200)純度、強活力、生物特性均一的BMSCs對用顯得至關重要。早在半世紀前，F(xiàn)riede持造血和分化的祖細胞，并于1974年體外]，直至1991年Caplan將這類干細胞命名為于骨髓中，還能夠從臍血、脂肪、骨骼、

本文編號：4010432