系統(tǒng)性紅斑狼瘡是一種累積多臟器的自身免疫性疾病,其中狼瘡腎炎是最嚴(yán)重的并發(fā)癥之一。臨床上大約有40%-70%的狼瘡患者都表現(xiàn)出腎功能障礙和腎炎癥狀。狼瘡腎炎發(fā)病過(guò)程通常伴隨著自身抗體水平的產(chǎn)生;炎性細(xì)胞因子的升高;免疫復(fù)合物的沉積以及免疫細(xì)胞的浸潤(rùn)。其中T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞在狼瘡腎炎疾病的發(fā)生發(fā)展中扮演著重要角色,同時(shí)中性粒細(xì)胞通過(guò)形成NETs參與狼瘡腎炎的發(fā)病過(guò)程。而一些趨化因子包括IP-10、RANTES、MCP-1等通過(guò)介導(dǎo)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)腎臟參與狼瘡腎炎的發(fā)病。這些趨化因子及其受體被認(rèn)為是治療狼瘡腎炎的重要靶點(diǎn)。中藥雷公藤作為傳統(tǒng)中藥,一直被廣泛應(yīng)用于治療各類自身免疫性疾病以及炎癥,雷公藤內(nèi)酯醇是從雷公藤植物中提取得到的環(huán)氧二萜內(nèi)酯化合物。雷公藤內(nèi)酯醇具有良好的免疫抑制活性,并對(duì)多種自身免疫性疾病具有良好的治療效果。然而其較強(qiáng)的毒副作用,限制了在臨床上的應(yīng)用。LLDT-8是雷公藤內(nèi)酯醇的衍生物,在保留較強(qiáng)的免疫抑制活性的同時(shí),大大降低了毒性。LLDT-8的CC₅₀為256.6±73.8nM,而雷公藤內(nèi)酯醇僅為2.1±0.2nM。本文主要探討LLDT-8對(duì)狼瘡腎炎的...

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
致謝
中文摘要
ABSTRACT
第1章 引言
    1.1 狼瘡腎炎
    1.2 狼瘡腎炎動(dòng)物模型
        1.2.1 MRL/lpr小鼠
        1.2.2 NZB/WF1小鼠
        1.2.3 BXSB小鼠
    1.3 趨化因子及受體在狼瘡腎炎中作用
        1.3.1 CCL2（MCP-1）和CCR2
        1.3.2 CCL4（MIP-1β），CCL5（RANTES）和CCR1，CCR5
        1.3.3 CXCR3和CXCL9（Mig），CXCL10（IP-10）
    1.4 （5R）5羥基雷公藤內(nèi)酯醇（LLDT-8）
第2章 （5R）5羥基雷公藤內(nèi)酯醇（LLDT-8）對(duì)MRL/lpr小鼠藥效學(xué)研究
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)藥物
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.4 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
        2.2.2 蛋白尿測(cè)定
        2.2.3 血生化指標(biāo)檢測(cè)
        2.2.4 脾臟和淋巴結(jié)稱重
        2.2.5 免疫熒光檢測(cè)小鼠腎臟免疫復(fù)合物沉積
        2.2.6 腎臟病理學(xué)檢測(cè)
        2.2.7 血清中自身抗體檢測(cè)
        2.2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 LLDT-8顯著提高M(jìn)RL/lpr小鼠生存率
        2.3.2 LLDT-8顯著降低MRL/lpr小鼠蛋白尿水平
        2.3.3 LLDT-8不影響MRL/lpr小鼠外周淋巴器官重量
        2.3.4 LLDT-8減輕MRL/lpr小鼠腎臟病理?yè)p傷。
        2.3.5 LLDT-8改善MRL/lpr小鼠腎功能
        2.3.6 LLDT-8減少M(fèi)RL/lpr小鼠腎臟免疫復(fù)合物沉積
        2.3.7 LLDT-8不影響MRL/lpr小鼠血清中自身抗體水平
    2.4 討論
第3章 （5R）5羥基雷公藤內(nèi)酯醇（LLDT-8）對(duì)MRL/lpr小鼠藥理機(jī)制研究
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)藥物
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.4 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
        3.2.2 蛋白尿測(cè)定
        3.2.3 脾臟和淋巴結(jié)稱重
        3.2.4 免疫熒光檢測(cè)小鼠腎臟免疫復(fù)合物沉積
        3.2.5 血清中自身抗體檢測(cè)
        3.2.6 細(xì)胞因子檢測(cè)
        3.2.7 分離腎臟單個(gè)核細(xì)胞（kidney mononuclear cells，KMNCs）
        3.2.8 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞比例
        3.2.9 熒光實(shí)時(shí)定量PCR（qRT-PCR）
        3.2.10 免疫組化
        3.2.11 分離純化脾臟T細(xì)胞
        3.2.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 LLDT-8改善MRL/lpr小鼠腎功能，減緩腎損傷
        3.3.2 LLDT-8不影響MRL/lpr小鼠血清中細(xì)胞因子水平
        3.3.3 LLDT-8降低MRL/lpr小鼠腎臟中細(xì)胞因子水平
        3.3.4 LLDT-8減少M(fèi)RL/lpr小鼠腎臟中T細(xì)胞的比例，而不影響脾臟中T細(xì)胞比例
        3.3.5 LLDT-8不影響MRL/lpr小鼠脾臟T細(xì)胞表達(dá)趨化因子受體CXCR3
        3.3.6 LLDT-8不抑制MRL/lpr小鼠腎臟T細(xì)胞表達(dá)趨化因子受體CXCR3
        3.3.7 LLDT-8減少M(fèi)RL/lpr小鼠腎臟中T細(xì)胞相關(guān)趨化因子的表達(dá)
        3.3.8 LLDT-8減少M(fèi)RL/lpr小鼠腎臟中CD11b+細(xì)胞比例
        3.3.9 LLDT-8減少M(fèi)RL/lpr小鼠腎臟中髓樣細(xì)胞相關(guān)趨化因子
    3.4 討論
第4章 （5R）5羥基雷公藤內(nèi)酯醇（LLDT-8）對(duì)NZB/W F1小鼠狼瘡腎炎的治療作用
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)藥物：
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        4.1.4 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
        4.2.2 尿蛋白測(cè)定
        4.2.3 尿肌酐測(cè)定
        4.2.4 分離小鼠腎臟單核細(xì)胞
        4.2.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)腎臟單核細(xì)胞比例
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 LLDT-8降低NZB/W F1小鼠尿蛋白肌酐比水平
        4.3.2 LLDT-8延長(zhǎng)NZB/W F1小鼠生存周期
        4.3.3 LLDT-8減少NZB/W F1小鼠腎臟中T細(xì)胞的浸潤(rùn)
        4.3.4 LLDT-8減少NZB/W F1小鼠腎臟中CD11b+髓樣細(xì)胞比例
    4.4 討論
第5章 （5R）5羥基雷公藤內(nèi)酯醇（LLDT-8）抑制腎臟實(shí)質(zhì)細(xì)胞趨化因子的表達(dá)
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)藥物
        5.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        5.1.3 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        5.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        5.2.2 化合物對(duì)細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)
        5.2.3 IFN-γ和IL-17刺激腎臟細(xì)胞
        5.2.4 細(xì)胞總RNA提取
        5.2.5 qRT-PCR
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.3.1 LLDT-8對(duì)HK-2 細(xì)胞和SV40 MES 13細(xì)胞毒性檢測(cè)
        5.3.2 LLDT-8抑制IFN-γ誘導(dǎo)的HK-2細(xì)胞表達(dá)炎性因子
        5.3.3 LLDT-8抑制IFN-γ誘導(dǎo)的SV40 MES13細(xì)胞表達(dá)Mig
        5.3.4 IL-17能夠協(xié)同IFN-γ 刺激腎臟細(xì)胞表達(dá)炎性因子
        5.3.5 LLDT-8能夠顯著降低IL-17和IFN-γ共同刺激引起的炎性因子表達(dá)
    5.4 討論
第6章 結(jié)論與討論
    6.1 結(jié)論
    6.2 討論
參考文獻(xiàn)
附錄1 縮略詞表
附錄2 引物序列
附錄3 發(fā)表論文
作者簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3968728