目的1.對LPS刺激后的DC2.4成熟性進(jìn)行鑒定,確保后續(xù)實驗的科學(xué)性與可行性。2.青藤堿作用于成熟DC2.4后,觀察細(xì)胞內(nèi)SOCS1、JAK2、STAT1蛋白與基因含量變化及上清液中IFN-γ、IL-6、IL-10含量變化,探討青藤堿對DC2.4細(xì)胞內(nèi)JAK/STAT信號通路的磷酸化作用機制,及其治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎機制,為治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎尋找新的治療靶點。方法1.通過形態(tài)學(xué)及細(xì)胞膜上表型CD11C、CD80及CD86判定DC2.4成熟狀態(tài)。2.將DC2.4細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)并分為A、B、C三組,A組為空白組,B組為模型組,C組為青藤堿組。A組不做處理,B組、C組分別經(jīng)5μg/m L的LPS刺激培養(yǎng)24h,使DC2.4成熟,C組中繼續(xù)加入40μg/mL的青藤堿,A組、B組不做進(jìn)一步處理,繼續(xù)培養(yǎng)三組細(xì)胞48h。Rt-PCR法檢測三組細(xì)胞中SOCS1、JAK2、STAT1基因表達(dá);Western Blot法檢測各組細(xì)胞中SOCS1、JAK2、STAT1、p-JAK2、p-STAT1蛋白表達(dá);取上清液,ELISA法檢測炎癥因子IFN-γ、IL-6、IL-10含量。結(jié)果1.DC2.4成熟性鑒定(1)...

【文章頁數(shù)】：100 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
英文縮寫
序論
實驗技術(shù)路線圖
第一章 DC2.4誘導(dǎo)成熟與鑒定
    1.前言
    2.實驗材料
        2.1 實驗細(xì)胞株
        2.2 實驗儀器及材料
        2.3 細(xì)胞培養(yǎng)所需試劑和配置方法
    3.實驗方法
        3.1 DC2.4培養(yǎng)與分組
        3.2 DC2.4的活力鑒定
        3.3 DC2.4表面標(biāo)志物檢測
        3.4 統(tǒng)計學(xué)分析
    4.結(jié)果
        4.1 細(xì)胞形態(tài)學(xué)分析
        4.2 細(xì)胞表面標(biāo)志物檢測
    5.討論
    6.小結(jié)
第二章 青藤堿對DC2.4JAK/STAT信號通路磷酸化的影響
    1.前言
        1.1 青藤堿研究概況
        1.2 DC與JAK/STAT信號通路
    2.實驗材料
        2.1 實驗細(xì)胞
        2.2 主要試劑
        2.3 實驗儀器及材料
    3.實驗方法
        3.1 Rt-PCR檢測JAK/STAT通路中相關(guān)基因JAK2、STAT1及SOCS1的表達(dá)
        3.2 WesternBlot檢測青藤堿對成熟DC2.4JAK2、p-JAK2、STAT1、p-STAT1及SOCS1蛋白表達(dá)
    4.實驗結(jié)果
        4.1 Rt-PCR檢測JAK/STAT通路中相關(guān)基因JAK2、STAT1及SOCS1的表達(dá)變化
        4.2 WesternBlot檢測中青藤堿對成熟DC2.4JAK2、p-JAK2、STAT1、p-STAT1及SOCS1蛋白表達(dá)的影響
    5.討論
        5.1 DC與JAK2/STAT1通路
        5.2 DC與SOCS
        5.3 選擇藥物濃度及作用時間的依據(jù)
    6.小結(jié)
        6.1 青藤堿對JAK/STAT通路中相關(guān)基因JAK2、STAT1及SOCS表達(dá)的影響
        6.2 青藤堿對成熟的DC2.4JAK2、p-JAK2、STAT1、p-STAT及SOCS1蛋白表達(dá)的影響
第三章 青藤堿治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的機制
    1.前言
        1.1 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中醫(yī)認(rèn)識
        1.2 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究進(jìn)展
    2.實驗材料
        2.1 實驗細(xì)胞
        2.2 主要試劑及試劑盒
        2.3 實驗儀器及材料
    3.實驗方法
        3.1 分組
        3.2 青藤堿對DC2.4細(xì)胞分泌炎性因子IL-6、IL-10、IFN-γ含量的影響
        3.3 統(tǒng)計學(xué)分析
    4.實驗結(jié)果
        4.1 ELISA檢測DC2.4G細(xì)胞上清中IL-6的含量
        4.2 ELISA檢測DC2.4細(xì)胞上清中IL-10的含量
        4.3 ELISA檢測DC2.4細(xì)胞上清中IFN-γ的含量
    5.討論
        5.1 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中醫(yī)中藥治療
        5.2 青藤堿治療類風(fēng)關(guān)的研究進(jìn)展
        5.3 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎與炎癥
        5.4 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎與DC
        5.5 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎與JAK/STAT通路
        5.6 SOCS1與RA
        5.7 青藤堿治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的可能機制
    6.小結(jié)
總論
本研究創(chuàng)新性
存在問題及展望
參考文獻(xiàn)
致謝
綜述
    參考文獻(xiàn)
在讀期間公開發(fā)表的學(xué)術(shù)論文、專著及科研成果



本文編號：3956405