目的:腦缺血再灌注損傷是一個復(fù)雜的病理生理過程,其中腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞(brain microvascular endothelium cell,BMEC)損傷占據(jù)中心地位。課題組前期研究結(jié)果顯示,在整體動物實驗水平上,天麻酚性成分可有效對抗缺血再灌注損傷,機(jī)制與抗炎、內(nèi)皮性依賴舒張血管有關(guān),提示天麻有效成分可能是通過抗炎,激活PI3K/AKt信號通路而發(fā)揮作用。本研究復(fù)制細(xì)胞缺糖缺氧/復(fù)糖復(fù)氧(Oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/Rep)模型,檢測細(xì)胞存活率、LDH、NO、炎癥介質(zhì)、緊密連接(Tight junction,TJ)標(biāo)志性蛋白、基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá),明確天麻酚性成分保護(hù)作用機(jī)制,并檢測PI3K/AKt信號通路相關(guān)因子,在分子水平上進(jìn)一步明確腦保護(hù)機(jī)制是否與PI3K/AKt信號通路的激活有關(guān)。方法:1.天麻酚性成分對OGD/Rep損傷b End.3細(xì)胞模型的保護(hù)作用研究1.1采用三氣培養(yǎng)箱造成OGD/Rep損傷模型,用MTT法測定b End.3細(xì)胞存活率,選擇存活率50%-60%作為造模條件。1.2復(fù)制細(xì)胞OGD/Rep損傷模...

【文章頁數(shù)】：106 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文索引表
引言
實驗研究
    第一部分 天麻酚性成分對OGD/Rep損傷bEnd.3 細(xì)胞模型保護(hù)作用的研究
        1.實驗材料
            1.1 實驗細(xì)胞
            1.2 實驗試劑
            1.3 實驗儀器
            1.4 試劑配制
            1.5 藥物配制
        2.實驗方法
            2.1 bEnd.3 細(xì)胞的復(fù)蘇、傳代和凍存
            2.2 bEnd.3 細(xì)胞生長曲線測定
            2.3 不同濃度Na2S2O4對bEnd.3 細(xì)胞存活率的影響
            2.4 三氣培養(yǎng)箱對OGD/Rep損傷b End.3 細(xì)胞存活率的影響
            2.5 天麻酚性成分對bEnd.3 細(xì)胞存活率的影響
            2.6 天麻酚性成分對OGD/Rep損傷bEnd.3 細(xì)胞存活率的影響
            2.7 天麻酚性成分對OGD/Rep損傷bEnd.3 細(xì)胞occludin蛋白的影響
            2.8 天麻酚性成分對OGD/Rep損傷bEnd.3 細(xì)胞claudin-5 蛋白的影響
            2.9 天麻酚性成分對OGD/Rep損傷bEnd.3 細(xì)胞NO的影響
            2.10 天麻酚性成分對OGD/Rep損傷bEnd.3 細(xì)胞LDH的影響
            2.11 天麻酚性成分對OGD/Rep損傷bEnd.3 細(xì)胞MMP-2/9 mRNA的影響
        3.數(shù)據(jù)處理
        4.實驗結(jié)果
            4.1 bEnd.3 細(xì)胞株鑒定
            4.2 bEnd.3 細(xì)胞生長曲線
            4.3 不同濃度Na2S2O4對bEnd.3 細(xì)胞存活率的影響
            4.4 三氣培養(yǎng)箱對OGD/Rep損傷b End.3 細(xì)胞存活率的影響
            4.5 天麻酚性成分對bEnd.3 細(xì)胞存活率的影響
            4.6 天麻酚性成分對OGD/Rep損傷bEnd.3 細(xì)胞存活率的影響
            4.7 天麻酚性成分對OGD/Rep損傷bEnd.3 細(xì)胞occludin蛋白的影響
            4.8 天麻酚性成分對OGD/Rep損傷bEnd.3 細(xì)胞claudin-5 蛋白的影響
            4.9 天麻酚性成分對OGD/Rep損傷bEnd.3 細(xì)胞NO的影響
            4.10 天麻酚性成分對OGD/Rep損傷bEnd.3 細(xì)胞LDH的影響
            4.11 天麻酚性成分對OGD/Rep損傷bEnd.3 細(xì)胞MMP-2/9 mRNA的影響
        討論
        小結(jié)
    第二部分 天麻酚性成分對OGD/Rep損傷bEnd.3 細(xì)胞炎性介質(zhì)的影響
        1.實驗材料
            1.1 實驗細(xì)胞
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
            1.4 主要試劑配制
            1.5 藥物配制
        2.實驗方法
            2.1 天麻酚性成分對OGD/Rep損傷bEnd.3 細(xì)胞TNF-α的影響
            2.2 天麻酚性成分對OGD/Rep損傷bEnd.3 細(xì)胞IL-1β的影響
            2.3 天麻酚性成分對OGD/Rep損傷bEnd.3 細(xì)胞IL-6 的影響
        3.數(shù)據(jù)處理
        4.實驗結(jié)果
            4.1 天麻酚性成分對OGD/Rep損傷bEnd.3 細(xì)胞TNF-α的影響
            4.2 天麻酚性成分對OGD/Rep損傷bEnd.3 細(xì)胞IL-1β的影響
            4.3 天麻酚性成分對OGD/Rep損傷bEnd.3 細(xì)胞IL-6 的影響
        討論
        小結(jié)
    第三部分 天麻酚性成分對OGD/Rep損傷bEnd.3 細(xì)胞PI3K/AKt信號通路的實驗研究
        1.實驗材料
            1.1 實驗細(xì)胞
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
            1.4 主要試劑配制
            1.5 藥物配制
        2.實驗方法
            2.1 蛋白提取
            2.2 BCA蛋白定量
            2.3 WB實驗方法
        3.數(shù)據(jù)處理
        4.實驗結(jié)果
            4.1 天麻酚性成分對OGD/Rep損傷bEnd.3 細(xì)胞AKt，e NOS蛋白的影響
            4.2 天麻酚性成分對OGD/Rep損傷bEnd.3 細(xì)胞p-AKt/AKt, p-eNOS/eNOS的影響
        討論
        小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況
致謝



本文編號：3914811