動物多肽毒素有很多優(yōu)良的性質(zhì),其作用范圍廣泛,對血液系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)以及細菌真菌均有不同的作用,是開發(fā)新型藥物和新型殺蟲劑抗生素的重要資源庫。其中,富含二硫鍵的多肽毒素多樣性豐富,可以特異性地作用并調(diào)節(jié)電壓門控離子通道,從而阻斷或抑制細胞電信號的傳導(dǎo),因而有著極其重要的研究價值。針對動物毒素的異源表達和純化,本文開展了以下兩個工作,為深入研究有毒動物毒素的結(jié)構(gòu)功能以及研發(fā)新型多肽類藥物奠定了基礎(chǔ)。1、蜈蚣毒素κ-SLPTX-Ssm1b的表達純化及活性研究。κ-SLPTX-Ssm1b是蜈蚣S colopendra subspinipes mutilans完整轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物所構(gòu)建的cDNA文庫中與電壓敏感鉀離子通道抑制劑κ-SLPTX-Ssm1a同源的多肽。且兩者含三對位置相同的二硫鍵,因此可能存在類似的空間結(jié)構(gòu)和相似的生理活性。本實驗利用pET-43-His-SUMO原核表達載體,通過E.coli SHuffle^TM菌種自動誘導(dǎo)表達重組蛋白,隨后利用鎳柱和RP-HPLC純化以及Ulp1激酶酶切獲得目的蛋白,最終通過MALDI-TOF質(zhì)譜鑒定其分子量為5532.18...

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 動物毒素的介紹
        1.1.1 蜈蚣毒素的多樣性及應(yīng)用
        1.1.2 螞蟻毒素的多樣性及應(yīng)用
    1.2 動物毒素的表達
    1.3 本文的研究思路
第二章 利用大腸桿菌異源表達系統(tǒng)表達蜈蚣毒素κ1b
    2.1 前言
    2.2 實驗器材與材料準(zhǔn)備
        2.2.1 實驗儀器
        2.2.2 實驗材料與試劑
        2.2.3 實驗部分溶液的配制
    2.3 實驗方法與過程
        2.3.1 重組表達質(zhì)粒pET-43-His-SUMO-κ1b的構(gòu)建
        2.3.2 κ1b的表達與純化
        2.3.3 κ1b的電生理活性檢測
    2.4 實驗結(jié)果與分析
        2.4.1 重組表達質(zhì)粒pET-43-His-SUMO-κ1b的構(gòu)建
        2.4.2 κ1b的表達與純化
        2.4.3 κ1b的電生理活性檢測
    2.5 討論
第三章 利用大腸桿菌異源表達系統(tǒng)表達三種螞蟻毒素
    3.1 前言
    3.2 實驗器材與材料準(zhǔn)備
    3.3 實驗方法與過程
        3.3.1 重組表達質(zhì)粒pET-43-His-SUMO-Ae1d/e/g的構(gòu)建
        3.3.2 Ae1d/Ae1e/Ae1g的表達與純化
    3.4 實驗結(jié)果與分析
        3.4.1 重組表達質(zhì)粒的構(gòu)建
        3.4.2 Ae1d/Ae1e/Ae1g的表達與純化
    3.5 討論
第四章 總結(jié)與展望
致謝
參考文獻
作者在學(xué)期間取得的學(xué)術(shù)成果



本文編號：3887792